杜仲雄花醇提取物抑菌活性的评价(附件)
摘 要为了探讨杜仲醇提取物活性成分的抑菌作用和稳定性，本研究以杜仲雄花醇提取物为试验材料，以六种细菌作为供试菌，依次用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇等有机溶剂萃取杜仲雄花醇提取物中的不同极性的活性成分，采用生长速率法研究杜仲雄花醇提取物的石油醚相，乙酸乙酯相，正丁醇相和水相对六种供试菌的抑菌活性，并且采用二倍稀释法分别测定石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度。然后以金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌作为供试菌，将杜仲提取物分别进行高温处理，紫外线照射，不同PH调试，测定杜仲雄花提取物的抑菌稳定性。结果表明：杜仲雄花各提取物对供试菌均产生不同程度的抑制作用，其中对枯草芽孢杆菌的抑制作用均较强，抑制作用优于环丙沙星；石油醚相对各供试菌的MIC为0.37-12.50 mg/mL，MBC为0.37-12.50mg/mL；乙酸乙酯相对各供试菌的MIC为0.15-6.25mg/mL，MBC为0.15-12.50 mg/mL；正丁醇相对各供试菌的MIC为0.07-3.25 mg/mL，MBC为0.37-6.25 mg/mL。杜仲雄花的各个萃取相在环境温度低于80℃，PH值接近7，紫外线照射时间低于20min时的抑菌活性相对稳定。综上所述，杜仲雄花的抑菌活性好且稳定，可以作为健康的新一代防腐剂进行开发利用。 目 录
1 绪论
1.1杜仲的生理学性质 1
1.2 杜仲雄花的化学成分研究 2
1.3杜仲抑菌活性研究进展 3
1.4 选题的目的和意义 4
2 材料和方法
2.1实验材料 6
2.2 试验方法 6
2.2.1杜仲雄花提取物样品的制备 6
2.2.2菌悬液的制备 6
2.2.3杜仲雄花提取物抑菌活性检测 6
2.2.4最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度(MBC)的测定 7
2.2.5杜仲雄花提取物的抑菌稳定性的测定 7
2.3数据处理方法 7
3 结果与分析
3.1杜仲雄花醇提取物的抑菌活性 8
3.2杜仲雄花醇提取物的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度 9
3.3杜仲雄花各提起物抑菌活性的稳定性 10
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/> 2.2.4最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度(MBC)的测定 7
2.2.5杜仲雄花提取物的抑菌稳定性的测定 7
2.3数据处理方法 7
3 结果与分析
3.1杜仲雄花醇提取物的抑菌活性 8
3.2杜仲雄花醇提取物的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度 9
3.3杜仲雄花各提起物抑菌活性的稳定性 10
3.3.1热稳定性 10
3.3.2紫外线稳定性 11
3.3.3pH稳定性 12
结论 13
参考文献 14
致谢 16
1绪论
1.1杜仲的生理学性质
杜仲（Eucommia ulmoides Oliv.）又名思仲、思仙、木棉、丝绵皮、川杜仲等，为杜仲科杜仲属植物[1,2]，其皮和叶均可入药。树皮表面粗燥呈现灰褐色，刚开始生长的树枝有黄褐色的绒毛，后来随着树枝的生长渐渐消失，相对较老的树枝会有皮孔，是我国二级珍贵保护树种[3,4,5]。杜仲，性味甘、微辛、温、无毒，是我国的名贵的滋补中药材。杜仲广泛分布在我国亚热带到暖温带地区，如贵州、湖北、湖南、重庆、四川、河南、陕西、山西、江苏、浙江、安徽、山东、广西、广东等地[6]。杜仲树高约20m，胸径约40cm以上，树冠密集卵形，树干端直且枝条斜上，雄花下有短梗，花药条形，花丝极短，单叶椭圆形，边缘似锯齿状。从外观上观察，杜仲外面较为平整光滑，呈淡棕色，里面光滑呈暗紫色，折断后会出现富有弹性的银白色胶丝，拉一到两厘米才会断开，俗称“藕断丝连”，气微味苦[7]；从显微水平上观察，杜仲在显微镜观察下没有草酸钙结晶，而其他一些杜仲伪劣品全部都有草酸钙结晶。国家药材部门把杜仲、一枝花、灵芝和熊胆列入四大紧缺药材。杜仲的花期通常为3月到5月，果期为9月到11月。目前，有许多学者对杜仲的性状和功效做过大量研究，人们常指的杜仲为杜仲科植物杜仲的干燥树皮，一直以来作为我国传统的滋补中药，具有降压、补肾、保肝、通便的作用，同时杜仲还能清除人体内的垃圾毒素，增强人体细胞新陈代谢，所以说，杜仲能防止人体细胞老化，增强人体免疫力，被称为“世界上高质量的天然降压药”。
杜仲皮是杜仲科植物杜仲的干燥树皮，味辛，平，无毒，归肾经，一直以来都是我国非常珍贵的中药材，各类医书里都有记载。杜仲皮具有补肝肾、强筋骨、安胎等作用，对于小便余沥、腰肌劳损、胎动不安、高血压等病有很好的治疗效果[8,9]。杜仲叶是杜仲科植物杜仲的干燥叶子，微辛、温，归肝、肾经，适合在夏天和秋天枝繁叶茂时采收，采收后低温烘干或者晒干，杜仲叶形状为椭圆形或者卵圆形，长约七到十五厘米，宽约三到七厘米，顶端比较尖，呈黄绿色或黄褐色，底部圆形，上表面呈暗绿色，下表面呈淡绿色，老一点的杜仲叶表面略有皱纹，边缘呈现锯齿状，侧脉六到九对，叶柄比较短，大概有一到二厘米，上面还有槽，质地比较脆容易碎，单叶互生，气味微苦。但是杜仲叶的利用率相对来说还是比较低。经过研究发现杜仲叶和杜仲皮的化学成分基本一致，具有相同的功效，因此杜仲叶的早期开发来源于“以叶代皮”的研究[10,11,12]，除此之外杜仲叶还对心脑血管疾病有独特的治疗效果。杜仲叶中含有15种微量元素和15中必需氨基酸[13,14]。
杜仲属于雌雄双株的树种，杜仲雄树开的花就是雄花，是我国非常珍贵的药用花粉资源。研究发现杜仲雄花中含有60多种有效成分，比如木脂素类、环烯醚萜类、黄酮、氨基酸等，还有锌、铜、铁、钙等人体所必须的微量元素[15]。有效成分含量不但高而且全面，汇集了杜仲的精华，有很好的补肝肾、通便、降三高的作用。杜仲雄花中含有的环烯醚萜类和苯丙素类有很好的醒酒效果，能保护肝脏，对于肾阳虚患者肾上腺功能低下的患者，可以用杜仲雄花中含有的松脂素二葡萄糖苷和京尼平苷治疗，杜仲雄花可以双向调节血压，从而做到把高血压患者的血压降低，把低血压患者的血压升高[16]。杜仲雄花中纤维含量很高，其中的桃叶珊瑚苷有很好的泻下效果，因此治疗便秘效果非常好。
1.2 杜仲雄花的化学成分研究
杜仲雄花含有较丰富的营养成分和生物活性物质。其中粗蛋白含量约为32.9%，蛋氨酸含量约为21.41%，还有人体所需的八种必须氨基酸。其中必须氨基酸占总量的约40%，另外还有多种矿物质和维生素，如钾、钠、镁、钙、磷、硫等，其中钾的含量比钠的含量高，具有典型高钾低钠的特点。杜仲雄花含有的生物活性主要是绿原酸、京尼平甘酸、桃叶珊瑚苷、黄酮类化合物等[17]。
总黄酮指黄酮类化合物，在植物界中存在非常广泛，很多中药材里面都有，具有很强的抗氧化抗自由基的作用，天然的生物黄酮分子量小，能很快通过血脑屏障，人体很容易对其吸收利用，它能有效保护血管、疏通微循环，把毛细血管进行扩张，从而防止动脉硬化，对中枢神经系统疾病有很好的防治作用，有利于血管的健康和年轻，在各大国家都被作为膳食补充品。绿原酸有降压利胆、解毒排毒、杀菌消炎、清除自由基等功效，它是植物有氧呼吸时产生的苯丙素类物质，在植物界中广泛存在，但是含量都比较低，通过这几年研究发现，绿原酸含量最高的植物之一就是杜仲，达到3.6％~5.5％。因为杜仲属于雌雄异株，在它的成长过程中，因为生殖生长激素的调节，不同性别的植株生长代谢也不一样，引起成分含量不同，杜仲雌株叶绿原酸含量稍微比雄株叶高。它能增加肠胃蠕动促进胃液分泌，所以对便秘有很好的功效，而且对白细胞减少有很强的抑制效果，对子宫功能性出血有很好的止血效果，而且还能抗肿瘤、增强机体免疫、抗衰老等，而且近几年发现绿原酸对糖尿病的治疗作用。曾经有人用杜仲中所含的绿原酸给大白鼠做过实验，口服或者腹腔注射能使大白鼠的中枢兴奋
1 绪论
1.1杜仲的生理学性质 1
1.2 杜仲雄花的化学成分研究 2
1.3杜仲抑菌活性研究进展 3
1.4 选题的目的和意义 4
2 材料和方法
2.1实验材料 6
2.2 试验方法 6
2.2.1杜仲雄花提取物样品的制备 6
2.2.2菌悬液的制备 6
2.2.3杜仲雄花提取物抑菌活性检测 6
2.2.4最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度(MBC)的测定 7
2.2.5杜仲雄花提取物的抑菌稳定性的测定 7
2.3数据处理方法 7
3 结果与分析
3.1杜仲雄花醇提取物的抑菌活性 8
3.2杜仲雄花醇提取物的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度 9
3.3杜仲雄花各提起物抑菌活性的稳定性 10
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/> 2.2.4最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度(MBC)的测定 7
2.2.5杜仲雄花提取物的抑菌稳定性的测定 7
2.3数据处理方法 7
3 结果与分析
3.1杜仲雄花醇提取物的抑菌活性 8
3.2杜仲雄花醇提取物的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度 9
3.3杜仲雄花各提起物抑菌活性的稳定性 10
3.3.1热稳定性 10
3.3.2紫外线稳定性 11
3.3.3pH稳定性 12
结论 13
参考文献 14
致谢 16
1绪论
1.1杜仲的生理学性质
杜仲（Eucommia ulmoides Oliv.）又名思仲、思仙、木棉、丝绵皮、川杜仲等，为杜仲科杜仲属植物[1,2]，其皮和叶均可入药。树皮表面粗燥呈现灰褐色，刚开始生长的树枝有黄褐色的绒毛，后来随着树枝的生长渐渐消失，相对较老的树枝会有皮孔，是我国二级珍贵保护树种[3,4,5]。杜仲，性味甘、微辛、温、无毒，是我国的名贵的滋补中药材。杜仲广泛分布在我国亚热带到暖温带地区，如贵州、湖北、湖南、重庆、四川、河南、陕西、山西、江苏、浙江、安徽、山东、广西、广东等地[6]。杜仲树高约20m，胸径约40cm以上，树冠密集卵形，树干端直且枝条斜上，雄花下有短梗，花药条形，花丝极短，单叶椭圆形，边缘似锯齿状。从外观上观察，杜仲外面较为平整光滑，呈淡棕色，里面光滑呈暗紫色，折断后会出现富有弹性的银白色胶丝，拉一到两厘米才会断开，俗称“藕断丝连”，气微味苦[7]；从显微水平上观察，杜仲在显微镜观察下没有草酸钙结晶，而其他一些杜仲伪劣品全部都有草酸钙结晶。国家药材部门把杜仲、一枝花、灵芝和熊胆列入四大紧缺药材。杜仲的花期通常为3月到5月，果期为9月到11月。目前，有许多学者对杜仲的性状和功效做过大量研究，人们常指的杜仲为杜仲科植物杜仲的干燥树皮，一直以来作为我国传统的滋补中药，具有降压、补肾、保肝、通便的作用，同时杜仲还能清除人体内的垃圾毒素，增强人体细胞新陈代谢，所以说，杜仲能防止人体细胞老化，增强人体免疫力，被称为“世界上高质量的天然降压药”。
杜仲皮是杜仲科植物杜仲的干燥树皮，味辛，平，无毒，归肾经，一直以来都是我国非常珍贵的中药材，各类医书里都有记载。杜仲皮具有补肝肾、强筋骨、安胎等作用，对于小便余沥、腰肌劳损、胎动不安、高血压等病有很好的治疗效果[8,9]。杜仲叶是杜仲科植物杜仲的干燥叶子，微辛、温，归肝、肾经，适合在夏天和秋天枝繁叶茂时采收，采收后低温烘干或者晒干，杜仲叶形状为椭圆形或者卵圆形，长约七到十五厘米，宽约三到七厘米，顶端比较尖，呈黄绿色或黄褐色，底部圆形，上表面呈暗绿色，下表面呈淡绿色，老一点的杜仲叶表面略有皱纹，边缘呈现锯齿状，侧脉六到九对，叶柄比较短，大概有一到二厘米，上面还有槽，质地比较脆容易碎，单叶互生，气味微苦。但是杜仲叶的利用率相对来说还是比较低。经过研究发现杜仲叶和杜仲皮的化学成分基本一致，具有相同的功效，因此杜仲叶的早期开发来源于“以叶代皮”的研究[10,11,12]，除此之外杜仲叶还对心脑血管疾病有独特的治疗效果。杜仲叶中含有15种微量元素和15中必需氨基酸[13,14]。
杜仲属于雌雄双株的树种，杜仲雄树开的花就是雄花，是我国非常珍贵的药用花粉资源。研究发现杜仲雄花中含有60多种有效成分，比如木脂素类、环烯醚萜类、黄酮、氨基酸等，还有锌、铜、铁、钙等人体所必须的微量元素[15]。有效成分含量不但高而且全面，汇集了杜仲的精华，有很好的补肝肾、通便、降三高的作用。杜仲雄花中含有的环烯醚萜类和苯丙素类有很好的醒酒效果，能保护肝脏，对于肾阳虚患者肾上腺功能低下的患者，可以用杜仲雄花中含有的松脂素二葡萄糖苷和京尼平苷治疗，杜仲雄花可以双向调节血压，从而做到把高血压患者的血压降低，把低血压患者的血压升高[16]。杜仲雄花中纤维含量很高，其中的桃叶珊瑚苷有很好的泻下效果，因此治疗便秘效果非常好。
1.2 杜仲雄花的化学成分研究
杜仲雄花含有较丰富的营养成分和生物活性物质。其中粗蛋白含量约为32.9%，蛋氨酸含量约为21.41%，还有人体所需的八种必须氨基酸。其中必须氨基酸占总量的约40%，另外还有多种矿物质和维生素，如钾、钠、镁、钙、磷、硫等，其中钾的含量比钠的含量高，具有典型高钾低钠的特点。杜仲雄花含有的生物活性主要是绿原酸、京尼平甘酸、桃叶珊瑚苷、黄酮类化合物等[17]。
总黄酮指黄酮类化合物，在植物界中存在非常广泛，很多中药材里面都有，具有很强的抗氧化抗自由基的作用，天然的生物黄酮分子量小，能很快通过血脑屏障，人体很容易对其吸收利用，它能有效保护血管、疏通微循环，把毛细血管进行扩张，从而防止动脉硬化，对中枢神经系统疾病有很好的防治作用，有利于血管的健康和年轻，在各大国家都被作为膳食补充品。绿原酸有降压利胆、解毒排毒、杀菌消炎、清除自由基等功效，它是植物有氧呼吸时产生的苯丙素类物质，在植物界中广泛存在，但是含量都比较低，通过这几年研究发现，绿原酸含量最高的植物之一就是杜仲，达到3.6％~5.5％。因为杜仲属于雌雄异株，在它的成长过程中，因为生殖生长激素的调节，不同性别的植株生长代谢也不一样，引起成分含量不同，杜仲雌株叶绿原酸含量稍微比雄株叶高。它能增加肠胃蠕动促进胃液分泌，所以对便秘有很好的功效，而且对白细胞减少有很强的抑制效果，对子宫功能性出血有很好的止血效果，而且还能抗肿瘤、增强机体免疫、抗衰老等，而且近几年发现绿原酸对糖尿病的治疗作用。曾经有人用杜仲中所含的绿原酸给大白鼠做过实验，口服或者腹腔注射能使大白鼠的中枢兴奋
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