广金钱草中夏佛塔苷的含量测定(附件)
摘 要本论文通过采用反相高效液相色谱法，以购进的广金钱草样品为供试品溶液，夏佛塔苷纯品为对照品，通过观察夏佛塔苷的进样量与峰面积值所呈的线性关系情况，得出线性回归方程，并计算回收率，从而来确定夏佛塔苷的含量。实验条件：依利特C18(4.6 mm×250mm，5μm)色谱柱；选取甲醇-水溶液作为流动相，并设置柱子的流速为0.1 mL/min，流量为0.5 mL/min，且柱温为35℃，于波长270nm处进行检测。通过试剂与溶液的配制，线性关系的考察、标准曲线的制作、精密度试验、稳定性考察、重复性试验、加样回收试验试验，最后进行样品测定。实验结果表明广金钱草中夏佛塔苷精密度试验的相对标准偏差为0.6%，稳定性考察试验的相对标准偏差为1.04%，重复性试验的相对标准偏差为0.7%，平均回收率达到99.9%，其相对标准偏差为3.4%。 因此，利用反相高效液相色谱法测定广金钱草中夏佛塔苷含量的精密度，稳定性，重复性，回收率都比较乐观，更能精确的测出夏佛塔苷的含量，而且此方法操作简单，重现性好，测定结果可靠。目 录
1 绪论
1.1广金钱草简介 2
1.2实验仪器简介 3
1.2.1 色谱柱 3
1.2.2 检测器 4
1.2.3流动相 4
1.2.4 色谱柱的理论板数(n) 4
1.2.5 分离度（R） 4
1.2.6 重复性 5
1.2.7 拖尾因子 5
1.3研究方法 5
2实验内容
2.1仪器与试药 6
2.1.1 仪器 6
2.1.2 试药 6
2.2 样品预处理 6
2.2.1 供试品处理 6
2.2.2 对照品处理 6
2.3 色谱条件 6
2.4 系统适用性试验 7
2.5方法学考察 7
2.5.1 线性关系的考察 7
2.5.3重复性试验 9
2.5.4 稳定性试验 9
2.5.6 样品测定 10
2.6 讨论 11
结论 12
参考文献 13
致谢 15<
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥3^5`1^9`1^6^0`7^2$
br /> 2.3 色谱条件 6
2.4 系统适用性试验 7
2.5方法学考察 7
2.5.1 线性关系的考察 7
2.5.3重复性试验 9
2.5.4 稳定性试验 9
2.5.6 样品测定 10
2.6 讨论 11
结论 12
参考文献 13
致谢 15
1 绪论
广金钱草是一种传统中药材，为豆科植物广金钱草的干燥地上部分。春、夏两季采割，除去杂质，晒干。具有清热除湿、利尿通淋的功效，主产于广东、广西、福建等省区，用于治疗热淋、砂淋、石淋、尿路结石等症。广金钱草中的黄酮类物质为其药理作用的主要化学成分，该类化合物能显著抑制血小板聚集，明显增加小鼠的心肌营养性血流量，增加狗的脑血流量及冠脉血流量，显著增强小鼠的常压缺氧耐受力，缓解家兔的离体血管条痉挛，对大鼠的心肌急性缺血也有明显的保护作用，还能预防草酸钙结石形成和复发，具有抗炎和益智等多种作用[1]。近年来随着广金钱草的广泛应用，其在抗炎、清热祛湿、利尿通淋上的作用，以及治疗泌尿系统感染、泌尿系统结石、肝炎的疗效，已引起相关人士的关注。
为了从广金钱草中分离出含量较多的夏佛塔苷含量，目前国内外相关人士通过不同生长气候和地理环境、以及质量变异遗传多样，栽培技术等方面对广金钱草中夏佛塔苷质量进行分析，并利用资源调查与药材质量评价的方法，对广金钱草中含有的夏佛塔苷含量进行参考分析，再通过反相高效液相色谱（反相高效液相色谱法是目前常用的一种分离有机化合物的方法之一，由于其较温和的实验条件能够保证样品在分离的过程中物化性质不发生变化，并且，由于反相高效液相色谱具有较低的检测线，所以，其已经被作为有效检测、分离样品的首选方法之一）中的相关参数，通过一些列的系统适应性试验，验证此方法的有效性和重复性等来确保所测定含量的准确性,从而达到最大回收率的目的[28]。尤其是在栽培技术方面，据相关资料表示，合理的栽培技术，优质的土壤，对广金钱草的含量影响甚大。目前对于广金钱草中成分的研究水平已达到对基因的研究，主要从多态性位点的变化情况来反映遗传性的大小。当多态性位点的变化在84.27%时，则表示其遗传多样性较大，所选择的样本中夏佛塔苷的含量也较高，当多态性位点的变化在20.68%时，则表示其遗传多样性较小，所选择的样本中夏佛塔苷的含量亦较低[9]。因此，多态性变化与夏佛塔苷的含量之间有严格的对应关系。
因此，通过反相高效液相色谱法研究化合物的分离，通过一定的系统适应性试验，方法学考察，以及严格的实验操作来控制广金钱草药材质量的含量测定，为建立考察广金钱草的药用价值以及临床应用提供科学依据。
1.1广金钱草简介
广金钱草是一种传统中药，为豆科植物广金钱草的干燥地上部分。春、夏两季采割，除去杂质，晒干。具有清热除湿、利尿通淋的功效，主产于广东、广西、福建等省区，用于治疗热淋、砂淋、石淋、尿路结石等症[10]，广金钱草中的黄酮类物质为其药理作用的主要化学成分，其芹菜素黄酮类成分中最主要成分为夏佛塔苷，其分子式：C26H28O14 ，分子量：564.49，主要产自广东。该类化合物能显著抑制血小板聚集，明显增加小鼠的心肌营养性血流量，增加狗的脑血流量及冠脉血流量，显著增强小鼠的常压缺氧耐受力，缓解家兔的离体血管条痉挛，对大鼠的心肌急性缺血也有明显的保护作用[11]，还能预防草酸钙结石形成和复发，具有抗炎和益智等多种作用。
早期报道广金钱草含生物碱、黄酮类（含有 5，7，8，4四羟基6葡萄糖基黄酮等）、酚类、鞣质等成分，其后，相关人士从广金钱草的甲醇提取液中分离得 5 种化合物，鉴定为大豆皂甙、位酮基大豆皂甙、夏佛答甙、异荭草甙、异牡荆甙。后来从广金钱草中分离出广金钱草碱、广金钱草内酯，三萜化合物羽豆酮和羽扇豆醇、三十三烷、硬脂酸、花生酸花生醇酯和β谷甾醇等化合物。苏亚化等从广金钱草中分得 4个黄酮化合物，为异牡荆甙、6c木糖8c葡萄糖洋芹素、6c葡萄糖8c木糖洋芹素、异荭甙等。又从广金钱草中分离到广金钱草多糖，并对其多糖进行精制和含量测定，多糖得率为2.8%，含量 27.7%。另有文献介绍用水提钙络合沉淀法提取广金钱草总黄酮的方法；用柱色谱紫外分光光度法测定广金钱草总黄酮的含量。
通常在28°C，避光且低温下保存。注意广金钱草粉末长时间在暴露在空气中，含量会有所降低。色谱条件：流动相：甲醇水（32:68），并设置柱子的流速为0.1mL/min，流量为0.5mL/min，且柱温为35℃，于272nm进行检测。
广金钱草及多种以广金钱草为主的中成药对防治泌尿系统结石有显著作用。广金钱草的多糖部分可以延缓水草酸钙的成核，对尿石中最常见的水草酸钙的结晶生长有抑制作用。金钱草冲剂15g/Kg、30g/
1 绪论
1.1广金钱草简介 2
1.2实验仪器简介 3
1.2.1 色谱柱 3
1.2.2 检测器 4
1.2.3流动相 4
1.2.4 色谱柱的理论板数(n) 4
1.2.5 分离度（R） 4
1.2.6 重复性 5
1.2.7 拖尾因子 5
1.3研究方法 5
2实验内容
2.1仪器与试药 6
2.1.1 仪器 6
2.1.2 试药 6
2.2 样品预处理 6
2.2.1 供试品处理 6
2.2.2 对照品处理 6
2.3 色谱条件 6
2.4 系统适用性试验 7
2.5方法学考察 7
2.5.1 线性关系的考察 7
2.5.3重复性试验 9
2.5.4 稳定性试验 9
2.5.6 样品测定 10
2.6 讨论 11
结论 12
参考文献 13
致谢 15<
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥3^5`1^9`1^6^0`7^2$
br /> 2.3 色谱条件 6
2.4 系统适用性试验 7
2.5方法学考察 7
2.5.1 线性关系的考察 7
2.5.3重复性试验 9
2.5.4 稳定性试验 9
2.5.6 样品测定 10
2.6 讨论 11
结论 12
参考文献 13
致谢 15
1 绪论
广金钱草是一种传统中药材，为豆科植物广金钱草的干燥地上部分。春、夏两季采割，除去杂质，晒干。具有清热除湿、利尿通淋的功效，主产于广东、广西、福建等省区，用于治疗热淋、砂淋、石淋、尿路结石等症。广金钱草中的黄酮类物质为其药理作用的主要化学成分，该类化合物能显著抑制血小板聚集，明显增加小鼠的心肌营养性血流量，增加狗的脑血流量及冠脉血流量，显著增强小鼠的常压缺氧耐受力，缓解家兔的离体血管条痉挛，对大鼠的心肌急性缺血也有明显的保护作用，还能预防草酸钙结石形成和复发，具有抗炎和益智等多种作用[1]。近年来随着广金钱草的广泛应用，其在抗炎、清热祛湿、利尿通淋上的作用，以及治疗泌尿系统感染、泌尿系统结石、肝炎的疗效，已引起相关人士的关注。
为了从广金钱草中分离出含量较多的夏佛塔苷含量，目前国内外相关人士通过不同生长气候和地理环境、以及质量变异遗传多样，栽培技术等方面对广金钱草中夏佛塔苷质量进行分析，并利用资源调查与药材质量评价的方法，对广金钱草中含有的夏佛塔苷含量进行参考分析，再通过反相高效液相色谱（反相高效液相色谱法是目前常用的一种分离有机化合物的方法之一，由于其较温和的实验条件能够保证样品在分离的过程中物化性质不发生变化，并且，由于反相高效液相色谱具有较低的检测线，所以，其已经被作为有效检测、分离样品的首选方法之一）中的相关参数，通过一些列的系统适应性试验，验证此方法的有效性和重复性等来确保所测定含量的准确性,从而达到最大回收率的目的[28]。尤其是在栽培技术方面，据相关资料表示，合理的栽培技术，优质的土壤，对广金钱草的含量影响甚大。目前对于广金钱草中成分的研究水平已达到对基因的研究，主要从多态性位点的变化情况来反映遗传性的大小。当多态性位点的变化在84.27%时，则表示其遗传多样性较大，所选择的样本中夏佛塔苷的含量也较高，当多态性位点的变化在20.68%时，则表示其遗传多样性较小，所选择的样本中夏佛塔苷的含量亦较低[9]。因此，多态性变化与夏佛塔苷的含量之间有严格的对应关系。
因此，通过反相高效液相色谱法研究化合物的分离，通过一定的系统适应性试验，方法学考察，以及严格的实验操作来控制广金钱草药材质量的含量测定，为建立考察广金钱草的药用价值以及临床应用提供科学依据。
1.1广金钱草简介
广金钱草是一种传统中药，为豆科植物广金钱草的干燥地上部分。春、夏两季采割，除去杂质，晒干。具有清热除湿、利尿通淋的功效，主产于广东、广西、福建等省区，用于治疗热淋、砂淋、石淋、尿路结石等症[10]，广金钱草中的黄酮类物质为其药理作用的主要化学成分，其芹菜素黄酮类成分中最主要成分为夏佛塔苷，其分子式：C26H28O14 ，分子量：564.49，主要产自广东。该类化合物能显著抑制血小板聚集，明显增加小鼠的心肌营养性血流量，增加狗的脑血流量及冠脉血流量，显著增强小鼠的常压缺氧耐受力，缓解家兔的离体血管条痉挛，对大鼠的心肌急性缺血也有明显的保护作用[11]，还能预防草酸钙结石形成和复发，具有抗炎和益智等多种作用。
早期报道广金钱草含生物碱、黄酮类（含有 5，7，8，4四羟基6葡萄糖基黄酮等）、酚类、鞣质等成分，其后，相关人士从广金钱草的甲醇提取液中分离得 5 种化合物，鉴定为大豆皂甙、位酮基大豆皂甙、夏佛答甙、异荭草甙、异牡荆甙。后来从广金钱草中分离出广金钱草碱、广金钱草内酯，三萜化合物羽豆酮和羽扇豆醇、三十三烷、硬脂酸、花生酸花生醇酯和β谷甾醇等化合物。苏亚化等从广金钱草中分得 4个黄酮化合物，为异牡荆甙、6c木糖8c葡萄糖洋芹素、6c葡萄糖8c木糖洋芹素、异荭甙等。又从广金钱草中分离到广金钱草多糖，并对其多糖进行精制和含量测定，多糖得率为2.8%，含量 27.7%。另有文献介绍用水提钙络合沉淀法提取广金钱草总黄酮的方法；用柱色谱紫外分光光度法测定广金钱草总黄酮的含量。
通常在28°C，避光且低温下保存。注意广金钱草粉末长时间在暴露在空气中，含量会有所降低。色谱条件：流动相：甲醇水（32:68），并设置柱子的流速为0.1mL/min，流量为0.5mL/min，且柱温为35℃，于272nm进行检测。
广金钱草及多种以广金钱草为主的中成药对防治泌尿系统结石有显著作用。广金钱草的多糖部分可以延缓水草酸钙的成核，对尿石中最常见的水草酸钙的结晶生长有抑制作用。金钱草冲剂15g/Kg、30g/
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