微波法辅助提取铁筷子多糖的工艺研究(附件)
摘 要 本文对微波法提取铁筷子多糖条件做了研究，确定了微波提取的最佳条件。 通过单因素实验来研究影响微波法提取铁筷子多糖的主要因素，主要从提取次数微波时间、料液比及微波功率几个方面因素考查。通过这些因素选出较优的因素和水平再进行正交实验，并用紫外—可见分光光度法测定所提取的多糖含量，结果确定提取最佳实验条件为：料液比1：30，处理时间12min，微波功率480 w。 目 录
1 绪论
1.1 铁筷子的概述 1
1.2 铁筷子的研究概况 1
1.2.1 铁筷子的简介 1
1.2.2 毛茛科铁筷子属药用植物研究进展 2
1.2.3 铁筷子多糖的药理作用 2
1.2.4 中药铁筷子多糖的研究进展 3
1.3 铁筷子多糖成分的提取方法 3
1.3.1 热水浸提取法 3
1.3.2 微波法 4
1.4 铁筷子多糖成分的提取方法 4
1.5 前景展望 4
2 仪器与药品
2.1 实验仪器 5
2.2 药材与试剂 5
3 实验方法与结果
3.1 铁筷子多糖的提取工艺优化研究 6
3.1.1 热水浸提取法 6
3.1.2 微波提取法 6
3.1.3 微波提取铁筷子多糖单因素试验 7
3.1.4 微波法辅助提取铁筷子多糖正交试验 7
3.1.5 传统热水浸提取法的铁筷子多糖提取率 7
3.1.6 铁筷子多糖的理化性质分析 7
3.2 紫外可见分光光度法测定铁筷子多糖含量 8
3.2.1 铁筷子多糖的提取分离 8
3.2.2 标准曲线的绘制 8
3.3 实验结果与分析 11
3.3.1 微波提取的单因素正交实验结果分析 11
3.3.2 铁筷子多糖热水浸提法正交试验结果与分析 13
3.3.3 两种多糖提取方法的比较 15
3.3.4 正交法优选铁筷子提取最佳工艺 15
3.4 讨论 16
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3.2.2 标准曲线的绘制 8
3.3 实验结果与分析 11
3.3.1 微波提取的单因素正交实验结果分析 11
3.3.2 铁筷子多糖热水浸提法正交试验结果与分析 13
3.3.3 两种多糖提取方法的比较 15
3.3.4 正交法优选铁筷子提取最佳工艺 15
3.4 讨论 16
结论 17
参考文献 18
致谢 21
1 绪论
1.1 铁筷子的概述
铁筷子(Helleborus Thibetanus Franch.) 系毛茛科 (Ranunculaceae) 铁筷子属(Helleborus)多年生草本植物[1]。铁筷子生长的环境为阴凉干燥的环境。其开花时间为春季，是一种优良的珍贵的野生花卉。不但适合适合盆栽观景，而且是布置材料的不二选则，可种植于草坪，树林下，作为点缀园艺，可给人以生机勃勃之感。陕产铁筷子大多生长在秦岭山区的灌木丛中或山地疏林中，其次宁夏，湖北及四川也有分布[2]。
铁筷子属大约有二十种左右，遍布于欧洲及亚洲等地。其中有一种 Helleborus Thibetanus Franch.是我国特有植物，又称黑毛七、鸳鸯七、九朵云、九连灯、胡子七、见春花、钻石风、嚏根草等[3]，是我国民间的一种有明确疗效的中草药。铁筷子中含有成分较多，经查阅文献，主要有多糖和苷类，不含生物碱。多糖的作用主要表现在抗肿瘤作用，而多糖的药理作用主要表现在强心作用、且对呼吸中枢的兴奋及局部麻醉也有一定作用。但是目前陕产铁筷子的研究还主要集中在药理学方面研究，而对铁筷子多糖的提取工艺研究尚不多见。
目前，多糖的提取方法有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等。主要影响因素有料液比、提取温度、提取时间、提取液PH值、离子种类及浓度。水提醇沉法是目前应用最为广泛的提取方法，该法对设备没有特殊要求，生产成本较低，但提取效率低，耗时长；酸碱法提取虽然收率高，耗时短，但实验条件要求高，易破坏多糖的立体结构和活性；微波法能使溶媒能渗透到药材细胞中，对有效成分的结构不会影响，并且缩短了提取时间，然而加速药材中的有效成分溶解，大大提高了有效成分提取率[4]。因此，本课题采用微波辅助提取铁筷子多糖的工艺研究，既为这一特有资源更深层次的开发研究奠定了基础，又可为药材质量标准提供了依据，同时，为药材的临床应用提供依据和保障。
1.2 铁筷子的研究概况
1.2.1 铁筷子的简介
铁筷子属毛莨科多年生草本植物,是陕西太白著名的“七药”之一。别名有黑毛七、鸳鸯七、九朵云、九连灯、胡子七、嚏根草等。入口其性凉，味稍苦，并带有小毒，但其适用症状较多，对跌打损伤，活血化瘀有着显著的功效，主要可以治疗膀胱炎、尿道炎等而且对疮疖肿毒也有不错的治愈效果[57]。
1.2.2 毛茛科铁筷子属药用植物研究进展
铁筷子属大约有二十种左右，遍布于欧洲及亚洲等地。其中铁筷子为主要分布在陕西西南部太白县山区，眉县红河谷山区；甘肃东南部如成县、陇南、甘南、天水、青海以及四川西部。目前多以野生为主，近年已成功将其由野生变为家种，以供欣赏。
铁筷子属化学成分的研究始于20世纪六七十年代，国外报道[8]同属植物嚏根草的根中含有强心甙嚏根草甙、嚏根草甙元、嚏根草毒甙和嚏根草毒素；杨健[9]采用大孔树脂成功的从根茎中分离出了铁筷子总皂苷；张艳红[10]从铁筷子根茎的正丁醇提取物中分离得到9个化合物，近年来有关铁筷子的药理研究报道较多。文献报道[11,12]同属植物嚏根草中的嚏根草毒甙具有典型的洋地黄样强心作用，对粘膜刺激性也较强，在离心蛙体上，钙离子对嚏根草的毒性有增强作用；研究表明嚏根草甙和嚏根草甙元不仅能够抑制人上皮癌KB细胞的生长而且还能使动脉及毛细血管收缩，同时应用过量的嚏根草，能引起胃肠粘膜炎症，眩晕，痉挛，惊厥，死亡，新鲜的嚏根草用于手足，可引起皮炎，甚至发泡；杨永健[13]等人研究表明铁筷子根水提物对人胃癌细胞及人白血病K562细胞的生长均有明显的抑制作用；刘昕[14,15]研究报道铁筷子对肿瘤细胞生长具有抑制作用，并能够明显改善机体免疫功能；张勇[16]等人研究表明铁筷子多糖可诱导$180肿瘤细胞凋亡。具以上研究可见铁筷子多糖具有抗肿瘤、抗病毒、提高免疫力等作用。
1.2.3 铁筷子多糖的药理作用
（1）强心作用
李贵荣，对国产铁筷子苷的强心作用做了研究，研究表明铁筷子醇提物能加强立体豚鼠心和立体蛙心同时在位猫心和位免心的收缩力；大鼠和猫的在体心脏实验可以证实铁筷子苷有增加心肌收缩力，增加心搏出量，减低心律等强心作用[17]。程绍瑜，通过过立体豚鼠的左心房肌实验，证明其安全用药范围与临床常用的强心
1 绪论
1.1 铁筷子的概述 1
1.2 铁筷子的研究概况 1
1.2.1 铁筷子的简介 1
1.2.2 毛茛科铁筷子属药用植物研究进展 2
1.2.3 铁筷子多糖的药理作用 2
1.2.4 中药铁筷子多糖的研究进展 3
1.3 铁筷子多糖成分的提取方法 3
1.3.1 热水浸提取法 3
1.3.2 微波法 4
1.4 铁筷子多糖成分的提取方法 4
1.5 前景展望 4
2 仪器与药品
2.1 实验仪器 5
2.2 药材与试剂 5
3 实验方法与结果
3.1 铁筷子多糖的提取工艺优化研究 6
3.1.1 热水浸提取法 6
3.1.2 微波提取法 6
3.1.3 微波提取铁筷子多糖单因素试验 7
3.1.4 微波法辅助提取铁筷子多糖正交试验 7
3.1.5 传统热水浸提取法的铁筷子多糖提取率 7
3.1.6 铁筷子多糖的理化性质分析 7
3.2 紫外可见分光光度法测定铁筷子多糖含量 8
3.2.1 铁筷子多糖的提取分离 8
3.2.2 标准曲线的绘制 8
3.3 实验结果与分析 11
3.3.1 微波提取的单因素正交实验结果分析 11
3.3.2 铁筷子多糖热水浸提法正交试验结果与分析 13
3.3.3 两种多糖提取方法的比较 15
3.3.4 正交法优选铁筷子提取最佳工艺 15
3.4 讨论 16
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
3.2.2 标准曲线的绘制 8
3.3 实验结果与分析 11
3.3.1 微波提取的单因素正交实验结果分析 11
3.3.2 铁筷子多糖热水浸提法正交试验结果与分析 13
3.3.3 两种多糖提取方法的比较 15
3.3.4 正交法优选铁筷子提取最佳工艺 15
3.4 讨论 16
结论 17
参考文献 18
致谢 21
1 绪论
1.1 铁筷子的概述
铁筷子(Helleborus Thibetanus Franch.) 系毛茛科 (Ranunculaceae) 铁筷子属(Helleborus)多年生草本植物[1]。铁筷子生长的环境为阴凉干燥的环境。其开花时间为春季，是一种优良的珍贵的野生花卉。不但适合适合盆栽观景，而且是布置材料的不二选则，可种植于草坪，树林下，作为点缀园艺，可给人以生机勃勃之感。陕产铁筷子大多生长在秦岭山区的灌木丛中或山地疏林中，其次宁夏，湖北及四川也有分布[2]。
铁筷子属大约有二十种左右，遍布于欧洲及亚洲等地。其中有一种 Helleborus Thibetanus Franch.是我国特有植物，又称黑毛七、鸳鸯七、九朵云、九连灯、胡子七、见春花、钻石风、嚏根草等[3]，是我国民间的一种有明确疗效的中草药。铁筷子中含有成分较多，经查阅文献，主要有多糖和苷类，不含生物碱。多糖的作用主要表现在抗肿瘤作用，而多糖的药理作用主要表现在强心作用、且对呼吸中枢的兴奋及局部麻醉也有一定作用。但是目前陕产铁筷子的研究还主要集中在药理学方面研究，而对铁筷子多糖的提取工艺研究尚不多见。
目前，多糖的提取方法有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等。主要影响因素有料液比、提取温度、提取时间、提取液PH值、离子种类及浓度。水提醇沉法是目前应用最为广泛的提取方法，该法对设备没有特殊要求，生产成本较低，但提取效率低，耗时长；酸碱法提取虽然收率高，耗时短，但实验条件要求高，易破坏多糖的立体结构和活性；微波法能使溶媒能渗透到药材细胞中，对有效成分的结构不会影响，并且缩短了提取时间，然而加速药材中的有效成分溶解，大大提高了有效成分提取率[4]。因此，本课题采用微波辅助提取铁筷子多糖的工艺研究，既为这一特有资源更深层次的开发研究奠定了基础，又可为药材质量标准提供了依据，同时，为药材的临床应用提供依据和保障。
1.2 铁筷子的研究概况
1.2.1 铁筷子的简介
铁筷子属毛莨科多年生草本植物,是陕西太白著名的“七药”之一。别名有黑毛七、鸳鸯七、九朵云、九连灯、胡子七、嚏根草等。入口其性凉，味稍苦，并带有小毒，但其适用症状较多，对跌打损伤，活血化瘀有着显著的功效，主要可以治疗膀胱炎、尿道炎等而且对疮疖肿毒也有不错的治愈效果[57]。
1.2.2 毛茛科铁筷子属药用植物研究进展
铁筷子属大约有二十种左右，遍布于欧洲及亚洲等地。其中铁筷子为主要分布在陕西西南部太白县山区，眉县红河谷山区；甘肃东南部如成县、陇南、甘南、天水、青海以及四川西部。目前多以野生为主，近年已成功将其由野生变为家种，以供欣赏。
铁筷子属化学成分的研究始于20世纪六七十年代，国外报道[8]同属植物嚏根草的根中含有强心甙嚏根草甙、嚏根草甙元、嚏根草毒甙和嚏根草毒素；杨健[9]采用大孔树脂成功的从根茎中分离出了铁筷子总皂苷；张艳红[10]从铁筷子根茎的正丁醇提取物中分离得到9个化合物，近年来有关铁筷子的药理研究报道较多。文献报道[11,12]同属植物嚏根草中的嚏根草毒甙具有典型的洋地黄样强心作用，对粘膜刺激性也较强，在离心蛙体上，钙离子对嚏根草的毒性有增强作用；研究表明嚏根草甙和嚏根草甙元不仅能够抑制人上皮癌KB细胞的生长而且还能使动脉及毛细血管收缩，同时应用过量的嚏根草，能引起胃肠粘膜炎症，眩晕，痉挛，惊厥，死亡，新鲜的嚏根草用于手足，可引起皮炎，甚至发泡；杨永健[13]等人研究表明铁筷子根水提物对人胃癌细胞及人白血病K562细胞的生长均有明显的抑制作用；刘昕[14,15]研究报道铁筷子对肿瘤细胞生长具有抑制作用，并能够明显改善机体免疫功能；张勇[16]等人研究表明铁筷子多糖可诱导$180肿瘤细胞凋亡。具以上研究可见铁筷子多糖具有抗肿瘤、抗病毒、提高免疫力等作用。
1.2.3 铁筷子多糖的药理作用
（1）强心作用
李贵荣，对国产铁筷子苷的强心作用做了研究，研究表明铁筷子醇提物能加强立体豚鼠心和立体蛙心同时在位猫心和位免心的收缩力；大鼠和猫的在体心脏实验可以证实铁筷子苷有增加心肌收缩力，增加心搏出量，减低心律等强心作用[17]。程绍瑜，通过过立体豚鼠的左心房肌实验，证明其安全用药范围与临床常用的强心
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