河蚬多糖对免疫功能低下小鼠的免疫功能的影响
摘要 目的：探讨河蚬多糖对免疫功能低下小鼠的免疫保护作用。方法：小鼠腹腔注射环磷酰胺建立小鼠免疫功能低下模型后，灌胃河蚬多糖50、100、200 mg/kg，连续给药6 d，另设正常对照组。测定小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力、碳廓清指数、脏器指数等免疫指标，分析河蚬多糖的免疫活性。结果：河蚬多糖能显著拮抗环磷酰胺所致的免疫功能低下小鼠的免疫器官重量的减轻，明显增加小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率及吞噬指数，显著增加碳廓清的吞噬指数，显著增加小鼠的迟发性反应。结论：河蚬多糖对免疫功能低下小鼠的免疫功能具有明显的增强作用。关键词 河蚬多糖；环磷酰胺；免疫功能低下；小鼠目录
1 引言 1
1.1 河蚬简介 1
1.2 多糖功效 1
1.3 多糖免疫作用研究现状 2
1.4 本实验的研究背景 4
2 实验用具 4
2.1 主要药品与试剂 4
2.2 实验材料 5
2.3 实验仪器 5
3 方法 6
3.1 动物分组 6
3.2 河蚬粗多糖的制备 6
3.3 方案 6
4 结果 7
4.1 对免疫功能低下小鼠脏器指数的影响 7
4.2 对免疫低下小鼠碳廓清指数和吞噬指数的影响 10
4.3 对免疫功能低下小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞的影响 11
4.4 对迟发性变态反应的影响 14
结 论 15
致 谢 16
参 考 文 献 17
1 引言
1.1 河蚬简介
河蚬是双壳类软体动物，又称黄蚬、金蚶等，常生长于淡水或咸淡水的江河、湖 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3_5_1_9_1_6_0_7_2
泊及入海口，由于生长环境不同，其贝壳可形成浅黄、黑等颜色，原产我国，现在广泛分布于世界各地水域。其生长速度快、繁殖能力强、养殖产量大，资源极其丰富。河蚬营养丰富，味道鲜美，具有很高的食用价值和保健作用。河蚬作为中药的药材，具有开胃、通乳、明目、利尿、去湿毒、治疗肝病、麻疹、退热、止咳化痰、解酒等功效[3]。然而在我国，目前对河蚬资源的利用，虽已研制开发出了浓缩蚬汁高级调味品、蚬精(台湾地区产)等产品，但大多仍以鲜食或制成蚬干、咸蚬罐头等加工为主，与日、韩等国相比，深加工率还较低，致使其经济价值没有被充分发挥。
1.2 多糖功效
1.2.1 抗氧化、抗衰老
近年来，人们对多糖及其复合物的抗氧化活性研究越来越深入。 许多从天然产物中分离得到的多糖类化合物具有清除自由基，抑制脂质过氧化、亚油酸氧化等抗氧化作用，其可能的抗氧化机理有：直接清除活性氧、络合产生活性氧所必需的金属离子、提高抗氧化酶的活性等。提示多糖的抗氧化性可能是抗肿瘤、抗衰老、抗感染等的作用机理之一。
1.2.2 多糖的抗肿瘤活性
根据多糖的抗肿瘤作用将其可以分为两种：一种是通过激活机体的免疫系统，诱导细胞的分化，刺激造血，抗新生血管生成，诱导 NO 产生等生物活性的多糖，这种多糖与机体的免疫细胞通过细胞水平的接触，致使免疫细胞被激活，导致某些类型的细胞转导信号，从而激发和提高免疫反应，而后通过增强机体的免疫功能直接抑制或杀死肿瘤细胞。具有抗肿瘤活性的多糖大多是通过这种方法发挥作用的。例如，人们从植物、动物、细菌和真菌中提取到β-葡萄糖，通过研究表明β-葡萄糖与机体免疫细胞受体存在着特异性结合，这种结合使免疫细胞（巨噬细胞、T 和 B 淋巴细胞及其它效应细胞）快速处于激活的状态，并且可以活化信号传导的途径并改善某些细胞因子的释放，诱导与调节免疫反应，抑制肿瘤或癌细胞的生长繁殖。另一种是具有细胞毒性的多糖，可以直接杀死肿瘤细胞，如青钱柳多糖可以明著抑制人类宫颈癌 Hele 细胞的生长，诱使其发生死亡，使细胞在 M 期发生停滞。 但是后一种多糖在体外直接杀伤肿瘤细胞的机制还不是很明了[4]。
1.2.3 增强巨噬细胞功能作用
在机体的免疫系统中，巨噬细胞具有强烈的吞噬功能，能够被动吞噬和杀死颗粒性的抗原或直接杀伤抗原生物，还能通过它产生的肿瘤因子及NO等分子损伤靶细胞，并且产生多种物质发挥其免疫调节作用。由于其活跃的生理学功能，特别是在免疫作答和防御机制中的重要作用而一直受到重视。能表达几十种受体，产生数十种相应的酶，而且能分泌达到近百种生物活性物质，是身体功能较为活跃的细胞之一。李厚兵等[5]人的研究表明野菊花多糖影响小鼠巨噬细胞分泌TNG及其tRNA的表达，从而增强巨噬细胞的功能。甄容等[6]人通过洋参多糖提高放射性免疫功能低下小鼠免疫功能实验发现洋参多糖能使巨噬细胞中cAMP浓度增加，激活PKG，从而激活巨噬细胞来增强免疫功能。
1.2.4 抗病毒作用
20世纪80年代以来，已经发现很多多糖具有抗细菌病毒及流感病毒的作用，如对HIV病毒、巨幼红细胞细胞病毒、单纯疱疹病毒等有显著的抑制作用。多糖通过以下方式达到抗病毒的作用：抑制病毒抗原的产生，抑制病毒活性酶的活性和抑制病毒表在蛋白 bc 120与细胞表面 BD4受体的结合等。如葫芦中的糖蛋白是通过与病毒原子结合，阻止病毒与细胞之间的相互感染。硫钡多糖无论在体外还是在体内，都显示出不同程度的抗病毒活性。硫钡多糖包括从动植物中提取得到的各种硫胍多糖、天然中性多糖的硫钡衍生物和人工合成的硫钡多糖，是一类阳离子多糖，带有大量的正电荷。目前认为其抗病毒机理可能是硫钡多糖掩盖了病毒或细胞表在的负电荷区域，从而抑制了病毒的吸收。有研究发现，活化多糖的抗病毒活性大于单多糖的活性；相对M大小、硫酸化程度、电荷的分布等因素均会对硫钡多糖的抗病毒活性有一定影响。
1.3 多糖免疫作用研究现状
李厚兵等[5]人通过腹腔注射环磷酰胺制备免疫功能低下小鼠模型，观察野菊花对小鼠谈廓清试验的影响，测定小鼠体重和脏器指数，结果表明野菊花多糖对小鼠非特异性免疫功能具有增强作用。野菊花多糖能刺激机体免疫器官相关指数的升高，增加机体的免疫能力。母海成[11]在玉米粗多糖对免疫低下小鼠免疫功能的影响实验中通过环磷酰胺制备小鼠免疫低下模型，检测小鼠的脏器指数、血清溶血素和巨噬细胞吞噬指数，结果表明玉米粗多糖可显著增加免疫低下小鼠的脾脏指数 ，并显著提高免疫低下小鼠的单核-巨噬细胞的吞噬指数。
1.3.1 对细胞免疫的调节
对淫羊藿多糖EPS的胸腺免疫药理研究表明[8]，EPS可提高小鼠胸腺产生IL-2水平，3H-TdR掺入能力增强，胸腺内CD4+、CD8+双阳性细胞减少，伴胸腺细胞对ConA刺激的增殖反应降低。沈敏等[10]从人指出CP可使胸腺中不成熟的CD4+、CD8+双阳性细胞发育成熟为单阳性细胞，同时还发现CP可使脾细胞CD5、CD4、CD8分子表达增加，并诱导MHC类分子表达，从而在分子水平上探讨了CP的作用机制。阮红等[7]报道女贞子多糖FLLPS体外在一定浓度范围内单独刺激可明显促进脾淋巴细胞增殖或协同刺激有丝分裂原PHA或Con A促进T淋巴细胞增殖，但多糖的作用呈现为剂量依赖的双向调节作用，即低浓度下激活增殖而高浓度下抑制增殖。葛淑芝等[8]人通过环磷酰胺制造免疫功能低下小鼠模型，给予酵母多糖后观察小鼠体重、脏器指数和迟发性变态反应强度变化的实验表明酵母多糖能改善免疫低下小鼠的细胞免疫及体液免疫状况。王玲[8]利用四氧嘧啶诱导制备糖尿病小鼠模型，观察枸杞多糖D组分(LBP-D)对此模型小鼠免疫功能的影响，发现对照组糖尿病模型小鼠免疫功能明显降低，而LBP-D具有显著促进小鼠淋巴细胞增殖的作用，调节T细胞亚群及提高IL-1、IL-2水平的作用，使四氧嘧啶模型糖尿病小鼠免疫功能恢复接近正常。
1 引言 1
1.1 河蚬简介 1
1.2 多糖功效 1
1.3 多糖免疫作用研究现状 2
1.4 本实验的研究背景 4
2 实验用具 4
2.1 主要药品与试剂 4
2.2 实验材料 5
2.3 实验仪器 5
3 方法 6
3.1 动物分组 6
3.2 河蚬粗多糖的制备 6
3.3 方案 6
4 结果 7
4.1 对免疫功能低下小鼠脏器指数的影响 7
4.2 对免疫低下小鼠碳廓清指数和吞噬指数的影响 10
4.3 对免疫功能低下小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞的影响 11
4.4 对迟发性变态反应的影响 14
结 论 15
致 谢 16
参 考 文 献 17
1 引言
1.1 河蚬简介
河蚬是双壳类软体动物，又称黄蚬、金蚶等，常生长于淡水或咸淡水的江河、湖 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3_5_1_9_1_6_0_7_2
泊及入海口，由于生长环境不同，其贝壳可形成浅黄、黑等颜色，原产我国，现在广泛分布于世界各地水域。其生长速度快、繁殖能力强、养殖产量大，资源极其丰富。河蚬营养丰富，味道鲜美，具有很高的食用价值和保健作用。河蚬作为中药的药材，具有开胃、通乳、明目、利尿、去湿毒、治疗肝病、麻疹、退热、止咳化痰、解酒等功效[3]。然而在我国，目前对河蚬资源的利用，虽已研制开发出了浓缩蚬汁高级调味品、蚬精(台湾地区产)等产品，但大多仍以鲜食或制成蚬干、咸蚬罐头等加工为主，与日、韩等国相比，深加工率还较低，致使其经济价值没有被充分发挥。
1.2 多糖功效
1.2.1 抗氧化、抗衰老
近年来，人们对多糖及其复合物的抗氧化活性研究越来越深入。 许多从天然产物中分离得到的多糖类化合物具有清除自由基，抑制脂质过氧化、亚油酸氧化等抗氧化作用，其可能的抗氧化机理有：直接清除活性氧、络合产生活性氧所必需的金属离子、提高抗氧化酶的活性等。提示多糖的抗氧化性可能是抗肿瘤、抗衰老、抗感染等的作用机理之一。
1.2.2 多糖的抗肿瘤活性
根据多糖的抗肿瘤作用将其可以分为两种：一种是通过激活机体的免疫系统，诱导细胞的分化，刺激造血，抗新生血管生成，诱导 NO 产生等生物活性的多糖，这种多糖与机体的免疫细胞通过细胞水平的接触，致使免疫细胞被激活，导致某些类型的细胞转导信号，从而激发和提高免疫反应，而后通过增强机体的免疫功能直接抑制或杀死肿瘤细胞。具有抗肿瘤活性的多糖大多是通过这种方法发挥作用的。例如，人们从植物、动物、细菌和真菌中提取到β-葡萄糖，通过研究表明β-葡萄糖与机体免疫细胞受体存在着特异性结合，这种结合使免疫细胞（巨噬细胞、T 和 B 淋巴细胞及其它效应细胞）快速处于激活的状态，并且可以活化信号传导的途径并改善某些细胞因子的释放，诱导与调节免疫反应，抑制肿瘤或癌细胞的生长繁殖。另一种是具有细胞毒性的多糖，可以直接杀死肿瘤细胞，如青钱柳多糖可以明著抑制人类宫颈癌 Hele 细胞的生长，诱使其发生死亡，使细胞在 M 期发生停滞。 但是后一种多糖在体外直接杀伤肿瘤细胞的机制还不是很明了[4]。
1.2.3 增强巨噬细胞功能作用
在机体的免疫系统中，巨噬细胞具有强烈的吞噬功能，能够被动吞噬和杀死颗粒性的抗原或直接杀伤抗原生物，还能通过它产生的肿瘤因子及NO等分子损伤靶细胞，并且产生多种物质发挥其免疫调节作用。由于其活跃的生理学功能，特别是在免疫作答和防御机制中的重要作用而一直受到重视。能表达几十种受体，产生数十种相应的酶，而且能分泌达到近百种生物活性物质，是身体功能较为活跃的细胞之一。李厚兵等[5]人的研究表明野菊花多糖影响小鼠巨噬细胞分泌TNG及其tRNA的表达，从而增强巨噬细胞的功能。甄容等[6]人通过洋参多糖提高放射性免疫功能低下小鼠免疫功能实验发现洋参多糖能使巨噬细胞中cAMP浓度增加，激活PKG，从而激活巨噬细胞来增强免疫功能。
1.2.4 抗病毒作用
20世纪80年代以来，已经发现很多多糖具有抗细菌病毒及流感病毒的作用，如对HIV病毒、巨幼红细胞细胞病毒、单纯疱疹病毒等有显著的抑制作用。多糖通过以下方式达到抗病毒的作用：抑制病毒抗原的产生，抑制病毒活性酶的活性和抑制病毒表在蛋白 bc 120与细胞表面 BD4受体的结合等。如葫芦中的糖蛋白是通过与病毒原子结合，阻止病毒与细胞之间的相互感染。硫钡多糖无论在体外还是在体内，都显示出不同程度的抗病毒活性。硫钡多糖包括从动植物中提取得到的各种硫胍多糖、天然中性多糖的硫钡衍生物和人工合成的硫钡多糖，是一类阳离子多糖，带有大量的正电荷。目前认为其抗病毒机理可能是硫钡多糖掩盖了病毒或细胞表在的负电荷区域，从而抑制了病毒的吸收。有研究发现，活化多糖的抗病毒活性大于单多糖的活性；相对M大小、硫酸化程度、电荷的分布等因素均会对硫钡多糖的抗病毒活性有一定影响。
1.3 多糖免疫作用研究现状
李厚兵等[5]人通过腹腔注射环磷酰胺制备免疫功能低下小鼠模型，观察野菊花对小鼠谈廓清试验的影响，测定小鼠体重和脏器指数，结果表明野菊花多糖对小鼠非特异性免疫功能具有增强作用。野菊花多糖能刺激机体免疫器官相关指数的升高，增加机体的免疫能力。母海成[11]在玉米粗多糖对免疫低下小鼠免疫功能的影响实验中通过环磷酰胺制备小鼠免疫低下模型，检测小鼠的脏器指数、血清溶血素和巨噬细胞吞噬指数，结果表明玉米粗多糖可显著增加免疫低下小鼠的脾脏指数 ，并显著提高免疫低下小鼠的单核-巨噬细胞的吞噬指数。
1.3.1 对细胞免疫的调节
对淫羊藿多糖EPS的胸腺免疫药理研究表明[8]，EPS可提高小鼠胸腺产生IL-2水平，3H-TdR掺入能力增强，胸腺内CD4+、CD8+双阳性细胞减少，伴胸腺细胞对ConA刺激的增殖反应降低。沈敏等[10]从人指出CP可使胸腺中不成熟的CD4+、CD8+双阳性细胞发育成熟为单阳性细胞，同时还发现CP可使脾细胞CD5、CD4、CD8分子表达增加，并诱导MHC类分子表达，从而在分子水平上探讨了CP的作用机制。阮红等[7]报道女贞子多糖FLLPS体外在一定浓度范围内单独刺激可明显促进脾淋巴细胞增殖或协同刺激有丝分裂原PHA或Con A促进T淋巴细胞增殖，但多糖的作用呈现为剂量依赖的双向调节作用，即低浓度下激活增殖而高浓度下抑制增殖。葛淑芝等[8]人通过环磷酰胺制造免疫功能低下小鼠模型，给予酵母多糖后观察小鼠体重、脏器指数和迟发性变态反应强度变化的实验表明酵母多糖能改善免疫低下小鼠的细胞免疫及体液免疫状况。王玲[8]利用四氧嘧啶诱导制备糖尿病小鼠模型，观察枸杞多糖D组分(LBP-D)对此模型小鼠免疫功能的影响，发现对照组糖尿病模型小鼠免疫功能明显降低，而LBP-D具有显著促进小鼠淋巴细胞增殖的作用，调节T细胞亚群及提高IL-1、IL-2水平的作用，使四氧嘧啶模型糖尿病小鼠免疫功能恢复接近正常。
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