铁筷子根茎多糖含量测定(附件)
摘 要 采用苯酚-硫酸法结合紫外可见分光光度法测定陕产铁筷子根茎多糖含量，并通过研究了苯酚用量、浓硫酸用量、显色温度、显色时间对测定结果的影响确定最佳实验方案。在此条件下引用稳定性实验、回收率实验、重复性实验进行方法学考察。实验结果表明苯酚-硫酸法结合紫外分光光度法测定陕产铁筷子根茎多糖含量5%苯酚用量1.6 mL，浓硫酸用量7.0 mL，显色温度室温，显色时间20 min，最大波长490 nm。最终测定陕产铁筷子根茎多糖含量为40.23%。 目 录
1 引言
2 文献研究
2.1 铁筷子植物的资源现状及合理开发利用 2
2.2 铁筷子植物的生物学特性 2
2.3 国内外关于铁筷子植物的研究现状 4
2.4 Helleborus属植物所含化学成分 4
2.5 铁筷子类成分的药理作用 5
2.5.1强心作用 5
2.5.2抗肿瘤作用 5
2.5.3对呼吸中枢的兴奋及局部麻醉作用 5
2.5.4抗菌消炎活性 6
2.5.5调节免疫和改善心脑血管功能作用 6
2.5.6作化妆品特殊添加剂 6
2.5.7镇痛和解痉 6
2.5.8其它作用 7
2.6 铁筷子前景展望 7
3 实验研究
3.1 材料与仪器 8
3.1.1 主要材料 8
3.1.2 主要仪器 8
3.2 方法与结果 8
3.2.1铁筷子多糖的制备 8
3.2.2葡萄糖对照品的制备 8
3.2.35%苯酚溶液的配制 8
3.2.4铁筷子多糖溶液的配制 8
3.3 显色条件的选择 9
3.3.1最大吸收波长的选择 9
3.3.2苯酚用量 9
3.3.3浓硫酸用量 10
3.3.4显色温度的确定 10
3.3.5显色时间的确定 11
3.4 线性关系的考察 11
3.7 方法学考察 14
3.7.1精
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
子多糖溶液的配制 8
3.3 显色条件的选择 9
3.3.1最大吸收波长的选择 9
3.3.2苯酚用量 9
3.3.3浓硫酸用量 10
3.3.4显色温度的确定 10
3.3.5显色时间的确定 11
3.4 线性关系的考察 11
3.7 方法学考察 14
3.7.1精密度试验 14
3.7.2重现性试验 14
3.7.3加样回收率试验 14
3.7.4稳定性实验 15
3.8 铁筷子根茎多糖含量测定 16
3.9 分析与讨论 16
结论 17
参考文献 18
致谢 21
1 引言
铁筷子(Helleborus thibetanus Franch)为毛茛科铁筷子属多年生草本植物[1]。别名黑毛七、小山桃儿七、红毛七、猪毛七、胡子七、嚏根草等。铁筷子属植物约有20余种，主要分布在欧洲东南部和亚洲西部。而Helleborusthibetanu Franch为我国西部特产种，主要分布于秦岭太白山区。主要药用部位为根茎，具有活血散瘀、清热解毒、消肿止痛之功效，民间主要用治疗尿道炎、膀胱炎、跌打损伤及疮疖肿毒等症[2]。据国内外研究报道指明，铁筷子属植物所含化学成分主要有甾体皂苷、木质素、黄酮、多糖等，有增大心搏出量和心肌收缩力、降低心律、消除呼吸道困难与水肿的强心作用，促进糖元产生以抑制肿瘤细胞的生长，抑制乳酸生成的胰岛素样作用，促进白细胞增多以及提高人体系统免疫力等多种生理功能而受到人们的关注。由此而知铁筷子多糖在肿瘤药物研究中有重要的作用。目前多糖的含量测定方法有滴定法、高效液相色谱法、比色法、薄层扫描法、高效毛细管电泳法等。滴定法要在沸腾状态下进行，滴定速度和温度对结果影响比较大，且不可排除还原糖的干扰。气相色谱法、高效液相色谱法需要仪器昂贵。毛细血管电泳法、薄层扫描法操作严格技术难度大。比色法中蒽酮硫酸法测定结果偏高，因此选择测定速度快、准确度高、线性好、仪器简单的苯酚硫酸法结合紫外分光光度法测定铁筷子多糖含量。DuBois等提出苯酚硫酸法以来，此法广泛应用于多糖含量测定。其原理是：多糖被浓硫酸在适当的高温下水解，产生单糖，并脱水成糠醛衍生物，该衍生物在强酸条件下与苯酚起显色反应，生成橙黄色物质，约在波长490 nm处，其吸光度值与糖质量浓度呈线性关系，从而测定其含量。
2 文献研究
2.1 铁筷子植物的资源现状及合理开发利用
铁筷子是太白“七药”之一，始出于《本草纲目》，近30年被大量挖掘，1977年被载入《中华人民共和国药典》。太白山中草药资源十分丰富。据初步统计“七药”有149种包括133个植物种16个变种，涉及地衣、蕨类、苔藓、种子植物等四大门类[3]。而铁筷子属于四大门类中的种子植物，当地人民利用其药治病历史悠久，经验丰富。但由于在药材行业发展过程中，人们更多注重的是能够带来更多经济利润的合法的药典收录品种上，而铁筷子这样一些地方习用的特色品种很难得到重视，企业未能形成资源开发的主体。加之不合理采集、生态环境恶化及资源开发的滞后性、科研投入不足、科技力量分散、科研平台之间协作不紧密，使贴筷子药材的研究只是低水平的重复研究，一些研究成果在资源开中发实现产业化还存在着问题。贴筷子已成为珍稀濒危物种，面临灭绝。为保护像铁筷子这样稀少药材，政府职能部门应通过引导当地政府加强铁筷子资源的宣传，并通过设立专项科研项目、组织相关专家编写专著等措施，进一步加强人们对“铁筷子”的认识，提高人们对铁筷子资源开发的重视程度。充分发挥制药企业在新药研究中和资源开发的主体地位作用，实现企业带动地方，市场促进企业，并根据现代医学流行疾病谱、结合铁筷子用特点，整合我省教、根据现代医学流行疾病谱、结合铁筷子临床应用特点，整合我省教、医、产、学、研、医等资源，建立资源保护、中药加工、药材引种、企业加工、新药研发、临床应用等一系列具有地方特色的中药材研究体系，充分发挥科技在铁筷子资源开发中的作用。从而使铁筷子资源被合理开发利用。
2.2 铁筷子植物的生物学特性
铁筷子植株高3050 cm，根茎细短，有多数发达的黑褐色须根，常多数密生成丛，根系深入于2040 cm的土层中。花冠小，尊片花瓣状，椭圆形，不脱落。颜色由初时粉红色随花冠脱去而变绿。每花2030个离生普英果，扁形，每呆含种子78粒。1年生泣株上年秋季播种，安全越冬。地下芽早春2月底破土，茎生l2片叶，不开花结实，2年生植株3月初返青，也不开花结实，但有基生叶生出。3年生或3年以上植株3月初返青，3月底始花，4月上旬盛花，4月下旬末花，总花期20天左右。4月初幼果，5月底果实成熟。无论几年生植株，从6月初起，高温下地上部分逐渐枯萎。铁筷子从种植到种子成熟需约3年时间，全年生长期150165天，无夏眠现象。野生铁筷子生于海拔11003100 m的山地疏林或灌丛中，南北山坡均有生长，最宜生于养料充足的腐植土中，以中性偏酸性的轻壤土或砂壤土种植为宜土壤通透性要好，在碱土或粘土中不能生长；也未发现在沼泽、沙漠地带生长。植株耐寒，低温对其无冻害。植株在2月底气温5℃以上时即可返青，种子也在此前后约1周发芽，高温灼伤幼苗。喜光照，亦耐阴。生长期阳光充足为好，荫蔽但能透光
1 引言
2 文献研究
2.1 铁筷子植物的资源现状及合理开发利用 2
2.2 铁筷子植物的生物学特性 2
2.3 国内外关于铁筷子植物的研究现状 4
2.4 Helleborus属植物所含化学成分 4
2.5 铁筷子类成分的药理作用 5
2.5.1强心作用 5
2.5.2抗肿瘤作用 5
2.5.3对呼吸中枢的兴奋及局部麻醉作用 5
2.5.4抗菌消炎活性 6
2.5.5调节免疫和改善心脑血管功能作用 6
2.5.6作化妆品特殊添加剂 6
2.5.7镇痛和解痉 6
2.5.8其它作用 7
2.6 铁筷子前景展望 7
3 实验研究
3.1 材料与仪器 8
3.1.1 主要材料 8
3.1.2 主要仪器 8
3.2 方法与结果 8
3.2.1铁筷子多糖的制备 8
3.2.2葡萄糖对照品的制备 8
3.2.35%苯酚溶液的配制 8
3.2.4铁筷子多糖溶液的配制 8
3.3 显色条件的选择 9
3.3.1最大吸收波长的选择 9
3.3.2苯酚用量 9
3.3.3浓硫酸用量 10
3.3.4显色温度的确定 10
3.3.5显色时间的确定 11
3.4 线性关系的考察 11
3.7 方法学考察 14
3.7.1精
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
子多糖溶液的配制 8
3.3 显色条件的选择 9
3.3.1最大吸收波长的选择 9
3.3.2苯酚用量 9
3.3.3浓硫酸用量 10
3.3.4显色温度的确定 10
3.3.5显色时间的确定 11
3.4 线性关系的考察 11
3.7 方法学考察 14
3.7.1精密度试验 14
3.7.2重现性试验 14
3.7.3加样回收率试验 14
3.7.4稳定性实验 15
3.8 铁筷子根茎多糖含量测定 16
3.9 分析与讨论 16
结论 17
参考文献 18
致谢 21
1 引言
铁筷子(Helleborus thibetanus Franch)为毛茛科铁筷子属多年生草本植物[1]。别名黑毛七、小山桃儿七、红毛七、猪毛七、胡子七、嚏根草等。铁筷子属植物约有20余种，主要分布在欧洲东南部和亚洲西部。而Helleborusthibetanu Franch为我国西部特产种，主要分布于秦岭太白山区。主要药用部位为根茎，具有活血散瘀、清热解毒、消肿止痛之功效，民间主要用治疗尿道炎、膀胱炎、跌打损伤及疮疖肿毒等症[2]。据国内外研究报道指明，铁筷子属植物所含化学成分主要有甾体皂苷、木质素、黄酮、多糖等，有增大心搏出量和心肌收缩力、降低心律、消除呼吸道困难与水肿的强心作用，促进糖元产生以抑制肿瘤细胞的生长，抑制乳酸生成的胰岛素样作用，促进白细胞增多以及提高人体系统免疫力等多种生理功能而受到人们的关注。由此而知铁筷子多糖在肿瘤药物研究中有重要的作用。目前多糖的含量测定方法有滴定法、高效液相色谱法、比色法、薄层扫描法、高效毛细管电泳法等。滴定法要在沸腾状态下进行，滴定速度和温度对结果影响比较大，且不可排除还原糖的干扰。气相色谱法、高效液相色谱法需要仪器昂贵。毛细血管电泳法、薄层扫描法操作严格技术难度大。比色法中蒽酮硫酸法测定结果偏高，因此选择测定速度快、准确度高、线性好、仪器简单的苯酚硫酸法结合紫外分光光度法测定铁筷子多糖含量。DuBois等提出苯酚硫酸法以来，此法广泛应用于多糖含量测定。其原理是：多糖被浓硫酸在适当的高温下水解，产生单糖，并脱水成糠醛衍生物，该衍生物在强酸条件下与苯酚起显色反应，生成橙黄色物质，约在波长490 nm处，其吸光度值与糖质量浓度呈线性关系，从而测定其含量。
2 文献研究
2.1 铁筷子植物的资源现状及合理开发利用
铁筷子是太白“七药”之一，始出于《本草纲目》，近30年被大量挖掘，1977年被载入《中华人民共和国药典》。太白山中草药资源十分丰富。据初步统计“七药”有149种包括133个植物种16个变种，涉及地衣、蕨类、苔藓、种子植物等四大门类[3]。而铁筷子属于四大门类中的种子植物，当地人民利用其药治病历史悠久，经验丰富。但由于在药材行业发展过程中，人们更多注重的是能够带来更多经济利润的合法的药典收录品种上，而铁筷子这样一些地方习用的特色品种很难得到重视，企业未能形成资源开发的主体。加之不合理采集、生态环境恶化及资源开发的滞后性、科研投入不足、科技力量分散、科研平台之间协作不紧密，使贴筷子药材的研究只是低水平的重复研究，一些研究成果在资源开中发实现产业化还存在着问题。贴筷子已成为珍稀濒危物种，面临灭绝。为保护像铁筷子这样稀少药材，政府职能部门应通过引导当地政府加强铁筷子资源的宣传，并通过设立专项科研项目、组织相关专家编写专著等措施，进一步加强人们对“铁筷子”的认识，提高人们对铁筷子资源开发的重视程度。充分发挥制药企业在新药研究中和资源开发的主体地位作用，实现企业带动地方，市场促进企业，并根据现代医学流行疾病谱、结合铁筷子用特点，整合我省教、根据现代医学流行疾病谱、结合铁筷子临床应用特点，整合我省教、医、产、学、研、医等资源，建立资源保护、中药加工、药材引种、企业加工、新药研发、临床应用等一系列具有地方特色的中药材研究体系，充分发挥科技在铁筷子资源开发中的作用。从而使铁筷子资源被合理开发利用。
2.2 铁筷子植物的生物学特性
铁筷子植株高3050 cm，根茎细短，有多数发达的黑褐色须根，常多数密生成丛，根系深入于2040 cm的土层中。花冠小，尊片花瓣状，椭圆形，不脱落。颜色由初时粉红色随花冠脱去而变绿。每花2030个离生普英果，扁形，每呆含种子78粒。1年生泣株上年秋季播种，安全越冬。地下芽早春2月底破土，茎生l2片叶，不开花结实，2年生植株3月初返青，也不开花结实，但有基生叶生出。3年生或3年以上植株3月初返青，3月底始花，4月上旬盛花，4月下旬末花，总花期20天左右。4月初幼果，5月底果实成熟。无论几年生植株，从6月初起，高温下地上部分逐渐枯萎。铁筷子从种植到种子成熟需约3年时间，全年生长期150165天，无夏眠现象。野生铁筷子生于海拔11003100 m的山地疏林或灌丛中，南北山坡均有生长，最宜生于养料充足的腐植土中，以中性偏酸性的轻壤土或砂壤土种植为宜土壤通透性要好，在碱土或粘土中不能生长；也未发现在沼泽、沙漠地带生长。植株耐寒，低温对其无冻害。植株在2月底气温5℃以上时即可返青，种子也在此前后约1周发芽，高温灼伤幼苗。喜光照，亦耐阴。生长期阳光充足为好，荫蔽但能透光
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