柿叶黄酮的体外抗氧化活性研究(附件)
摘 要目的研究三种不同提取方法得到的柿叶黄酮的体外抗氧化活性，为柿叶资源在天然抗氧化剂中的开发利用提供理论依据。方法采用经典乙醇回流法、超声波辅助乙醇提取法和微波辅助乙醇提取法提取柿叶中的总黄酮，同时采用紫外可见分光光度法对黄酮含量进行测定，结合DPPH模型和ABTS+模型对其进行体外抗氧化活性研究。结果柿叶中总黄酮具有显著的抗氧化活性，根据IC50值越小，其抗氧化活性能力越强，不同提取方法下柿叶黄酮的体外抗氧化活性强弱表现为经典乙醇回流法>超声波辅助乙醇提取法>微波辅助乙醇提取法。结论经典乙醇回流法提取得到的柿叶黄酮的体外抗氧化能力最强，是天然抗氧化剂的良好来源，所以应加大对柿叶的开发利用。
Keywords: Persimmon leaf total flavonoid; Extraction; DPPH antioxidant 、ABTS+ antioxidant models 目 录
1绪论 1
1.1柿叶中化学成分的研究 1
1.1.1黄酮类化合物 1
1.1.2有机酸类化合物 1
1.1.3植物甾醇类化合物 2
1.1.4三萜类化合物 2
1.1.5多糖类化合物 2
1.2柿叶黄酮药理作用研究 2
1.2.1降血脂作用 2
1.2.2抗氧化作用 2
1.2.3抗癌作用 3
1.2.4保护心脑血管作用 3
1.2.5降血压作用 3
1.2.6止血作用 3
1.3自由基的概述 3
1.3.1DPPH法原理及抗氧化模型的概述 4
1.3.2DPPH自由基清除率测定方法 4
1.3.3分光光度计法 4
1.3.4高效液相色谱法(HPLC) 4
1.3.5电子顺磁共振法(EPR) 4
1.3.6ABTS法原理及其抗氧化模型的概述 5
1.3.7ABTS自由基清除率测定方法 5
1.4柿叶的研究目的与意义 5
2实验部分 6
2.1 仪器与试药 6
2.1.1 仪器 6
2.1.2 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
试药 7
2.2柿叶样品的收集与处理 7
2.2.1柿叶样品的收集 7
2.2.2 柿叶样品的处理 7
2.3柿叶黄酮含量测定方法学的建立 7
2.3.1对照品溶液的制备 7
2.3.2供试品溶液的制备 7
2.3.3芦丁标准曲线的绘制 8
2.3.4精密度实验 9
2.3.5稳定性试验 9
2.3.6加样回收率实验 9
2.4柿叶黄酮的含量测定 10
2.5柿叶黄酮体外清除DPPH自由基活性测定 11
2.6柿叶黄酮体外清除ABTS +自由基活性测定 12
2.7小结与讨论 14
3总结 15
参考文献 16
致谢 18
1 绪论
柿叶为柿树科柿树属(Diospyros)植物柿(DiospyroskakiL.f.)的新鲜或干燥的叶片。味苦，性寒，其为药载于明代的药籍《滇南本草》[1]。具有生津止渴，清热解毒，润肺强心，镇咳止血，抗菌消炎，抗癌防癌等多种医疗保健功能[2]。柿叶中含有丰富的Vc、芦丁、胆碱、黄酮苷、胡萝卜素、多种氨基酸及铁、锌、钙等对人体健康有益的营养成分[3]。
近年来，科学研究逐渐证实黄酮类化合物在体外抗氧化方面有较强的活性。已有大量文献报道了植物总黄酮提取物在延缓衰老方面的研究。因此，从天然植物中筛选出具有抗氧化活性的成分，已成为当代医药专家竞先研究的热点。国内外先后研制开发了以银杏叶提取物制成的各种银杏制剂[4]。而关于柿子叶黄酮类药物却很少报道和研究。对于柿叶黄酮体外抗氧化活性的研究已经成为重要的课题。
1.1柿叶中化学成分的研究
现代研究表明，柿叶中含有多种化学活性物质：包括黄酮类化合物、三萜类化合物、植物甾醇类化合物、有机酸类化合物、多糖类化合物以及多酚类化合物等多种物质。这些化学活性物质具有广泛的药理作用。
1.1.1黄酮类化合物
在柿叶诸多化学成分中，黄酮类化合物是最重要的活性物质之一，也是药理作用最多的化学成分之一。黄酮类化合物是一类广泛存在于自然界的﹑具有2苯基色原酮基本结构的化合物，因其结构上常常带有羟基，故黄酮类化合物也属于酚类化合物[5]。目前,已发现的黄酮类化合物有芦丁、槲皮素[6]、黄芪苷、异棚皮素、山萘酚3OβD葡萄糖苷、山萘酚[7]、山萘酚3OαL鼠李糖苷、山萘酚3βD木糖苷、山萘酚3OαL阿拉伯糖苷、金丝桃苷（槲皮素3半乳糖苷）[8]、杨梅皮苷等。
1.1.2有机酸类化合物
柿叶所含有机酸包括维生素C及其他有机酸。维生素C又称为L抗坏血酸，是人类和其他高等灵长类动物必须但又不能在体内合成的营养素，是植物维生素类营养的评价标志。柿子叶中的维生素含量几乎是在植物叶片中最高的。其他的有机酸包括琥珀酸、苯甲酸、水杨酸、糠酸、丁香酸、对羟基苯甲酸、原儿茶酚酸及吲哚基醋酸和苹果酸[911]等。
1.1.3植物甾醇类化合物
植物甾醇类主要是菜油甾醇、豆甾醇、β谷甾醇等[12]。植物甾醇的理化性质主要表现为疏水性，但因其结构上带有羟基，因而又具有亲水性。
1.1.4三萜类化合物
三萜类化合物是由多个异戊二烯单位首尾相连构成的化合物。柿叶中含有多种三萜类化合物。如桦木酸、齐墩果酸﹑乌苏酸、熊果苷﹑乌苏醇﹑19α羟基乌苏酸、19α,24二羟基乌苏酸[1314]等。
1.1.5多糖类化合物
多糖(polysaccharide)是由糖苷键结合的糖链，至少要超过10个以上的单糖组成的聚合糖高分子碳水化合物。多糖具有免疫调节等功效，因此被广泛地用于医疗和保健行业。JinyouDuan等[15]提取柿叶果胶多糖，得到它的结构包括鼠李糖，阿拉伯糖，半乳糖，木糖和半乳糖醛酸单位。
1.1.6多酚类化合物
柿子中富含多分类化合物，其中导致柿子充满涩味的单宁也属于多酚类化合物。有人研究表明柿叶中含有没食子酸﹑肉桂酸﹑咖啡酸﹑香豆酸﹑绿原酸﹑原儿茶酸﹑阿魏酸﹑丁香等[16]多种多酚类化合物。
1.2柿叶黄酮药理作用研究
1.2.1降血脂作用
用鲜嫩的柿子叶制成柿子叶汁，对肥胖高脂大鼠饮6周后，大鼠的低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）、血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）含量均有明显下降，高密度脂蛋白胆固醇（HDLC）含量明显增高。鲜柿子叶汁对高脂饮食诱导的大鼠体重增加有明显抑制作用，说明柿子叶有降血脂作用[17]。
1.2.2抗氧化作用
Keywords: Persimmon leaf total flavonoid; Extraction; DPPH antioxidant 、ABTS+ antioxidant models 目 录
1绪论 1
1.1柿叶中化学成分的研究 1
1.1.1黄酮类化合物 1
1.1.2有机酸类化合物 1
1.1.3植物甾醇类化合物 2
1.1.4三萜类化合物 2
1.1.5多糖类化合物 2
1.2柿叶黄酮药理作用研究 2
1.2.1降血脂作用 2
1.2.2抗氧化作用 2
1.2.3抗癌作用 3
1.2.4保护心脑血管作用 3
1.2.5降血压作用 3
1.2.6止血作用 3
1.3自由基的概述 3
1.3.1DPPH法原理及抗氧化模型的概述 4
1.3.2DPPH自由基清除率测定方法 4
1.3.3分光光度计法 4
1.3.4高效液相色谱法(HPLC) 4
1.3.5电子顺磁共振法(EPR) 4
1.3.6ABTS法原理及其抗氧化模型的概述 5
1.3.7ABTS自由基清除率测定方法 5
1.4柿叶的研究目的与意义 5
2实验部分 6
2.1 仪器与试药 6
2.1.1 仪器 6
2.1.2 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
试药 7
2.2柿叶样品的收集与处理 7
2.2.1柿叶样品的收集 7
2.2.2 柿叶样品的处理 7
2.3柿叶黄酮含量测定方法学的建立 7
2.3.1对照品溶液的制备 7
2.3.2供试品溶液的制备 7
2.3.3芦丁标准曲线的绘制 8
2.3.4精密度实验 9
2.3.5稳定性试验 9
2.3.6加样回收率实验 9
2.4柿叶黄酮的含量测定 10
2.5柿叶黄酮体外清除DPPH自由基活性测定 11
2.6柿叶黄酮体外清除ABTS +自由基活性测定 12
2.7小结与讨论 14
3总结 15
参考文献 16
致谢 18
1 绪论
柿叶为柿树科柿树属(Diospyros)植物柿(DiospyroskakiL.f.)的新鲜或干燥的叶片。味苦，性寒，其为药载于明代的药籍《滇南本草》[1]。具有生津止渴，清热解毒，润肺强心，镇咳止血，抗菌消炎，抗癌防癌等多种医疗保健功能[2]。柿叶中含有丰富的Vc、芦丁、胆碱、黄酮苷、胡萝卜素、多种氨基酸及铁、锌、钙等对人体健康有益的营养成分[3]。
近年来，科学研究逐渐证实黄酮类化合物在体外抗氧化方面有较强的活性。已有大量文献报道了植物总黄酮提取物在延缓衰老方面的研究。因此，从天然植物中筛选出具有抗氧化活性的成分，已成为当代医药专家竞先研究的热点。国内外先后研制开发了以银杏叶提取物制成的各种银杏制剂[4]。而关于柿子叶黄酮类药物却很少报道和研究。对于柿叶黄酮体外抗氧化活性的研究已经成为重要的课题。
1.1柿叶中化学成分的研究
现代研究表明，柿叶中含有多种化学活性物质：包括黄酮类化合物、三萜类化合物、植物甾醇类化合物、有机酸类化合物、多糖类化合物以及多酚类化合物等多种物质。这些化学活性物质具有广泛的药理作用。
1.1.1黄酮类化合物
在柿叶诸多化学成分中，黄酮类化合物是最重要的活性物质之一，也是药理作用最多的化学成分之一。黄酮类化合物是一类广泛存在于自然界的﹑具有2苯基色原酮基本结构的化合物，因其结构上常常带有羟基，故黄酮类化合物也属于酚类化合物[5]。目前,已发现的黄酮类化合物有芦丁、槲皮素[6]、黄芪苷、异棚皮素、山萘酚3OβD葡萄糖苷、山萘酚[7]、山萘酚3OαL鼠李糖苷、山萘酚3βD木糖苷、山萘酚3OαL阿拉伯糖苷、金丝桃苷（槲皮素3半乳糖苷）[8]、杨梅皮苷等。
1.1.2有机酸类化合物
柿叶所含有机酸包括维生素C及其他有机酸。维生素C又称为L抗坏血酸，是人类和其他高等灵长类动物必须但又不能在体内合成的营养素，是植物维生素类营养的评价标志。柿子叶中的维生素含量几乎是在植物叶片中最高的。其他的有机酸包括琥珀酸、苯甲酸、水杨酸、糠酸、丁香酸、对羟基苯甲酸、原儿茶酚酸及吲哚基醋酸和苹果酸[911]等。
1.1.3植物甾醇类化合物
植物甾醇类主要是菜油甾醇、豆甾醇、β谷甾醇等[12]。植物甾醇的理化性质主要表现为疏水性，但因其结构上带有羟基，因而又具有亲水性。
1.1.4三萜类化合物
三萜类化合物是由多个异戊二烯单位首尾相连构成的化合物。柿叶中含有多种三萜类化合物。如桦木酸、齐墩果酸﹑乌苏酸、熊果苷﹑乌苏醇﹑19α羟基乌苏酸、19α,24二羟基乌苏酸[1314]等。
1.1.5多糖类化合物
多糖(polysaccharide)是由糖苷键结合的糖链，至少要超过10个以上的单糖组成的聚合糖高分子碳水化合物。多糖具有免疫调节等功效，因此被广泛地用于医疗和保健行业。JinyouDuan等[15]提取柿叶果胶多糖，得到它的结构包括鼠李糖，阿拉伯糖，半乳糖，木糖和半乳糖醛酸单位。
1.1.6多酚类化合物
柿子中富含多分类化合物，其中导致柿子充满涩味的单宁也属于多酚类化合物。有人研究表明柿叶中含有没食子酸﹑肉桂酸﹑咖啡酸﹑香豆酸﹑绿原酸﹑原儿茶酸﹑阿魏酸﹑丁香等[16]多种多酚类化合物。
1.2柿叶黄酮药理作用研究
1.2.1降血脂作用
用鲜嫩的柿子叶制成柿子叶汁，对肥胖高脂大鼠饮6周后，大鼠的低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）、血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）含量均有明显下降，高密度脂蛋白胆固醇（HDLC）含量明显增高。鲜柿子叶汁对高脂饮食诱导的大鼠体重增加有明显抑制作用，说明柿子叶有降血脂作用[17]。
1.2.2抗氧化作用
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