柿叶多糖的体外抗氧化活性研究(附件)
本人签名 日期 摘 要实验目的考察用不同浓度乙醇沉淀得到的柿叶多糖的体外抗氧化能力。方法采用经典水沉醇沉法对柿叶多糖进行沉取，得到不同醇沉浓度下柿叶多糖产物，以Vc为阳性对照品，考察其对超氧阴离子、羟基自由基、DPPH自由基的清除能力，来评价不同醇沉柿叶多糖的体外抗氧化活性。结果不同醇沉浓度下的柿叶多糖具有一定的抗氧化性，对超氧阴离子自由基、羟基自由基和DPPH有较好的清除能力，其抗氧化活性随着浓度增加而加强。不同浓度醇沉的柿叶多糖清除超氧阴离子的强弱为90%乙醇＞80%乙醇＞70%乙醇；清除羟基自由基的强弱为90%乙醇＞80%乙醇＞70%乙醇；清除DPPH自由基的强弱为90%乙醇＞80%乙醇＞70%乙醇。结论不同醇沉浓度的柿叶多糖对各种自由基都具有一定的清除能力，其中90%乙醇醇沉产物，其抗氧化活性最强，是较好的天然抗氧化剂来源。
目 录
1绪论 1
1.1 柿叶中化学成分的研究 1
1.1.1 多糖类化合物 1
1.1.2黄酮类化合物 1
1.1.3有机酸类化合物 2
1.1.4 三萜类化合物 2
1.1.5 多酚类化合物 2
1.2柿叶多糖的药理作用 2
1.2.1抗氧化作用 2
1.2.2抗癌作用 3
1.2.3保护心脑血管作用 3
1.2.4降血压作用 3
1.2.5止血作用 3
1.2.6抗菌作用 3
1.3抗氧化模型的概述 3
1.3.1自由基离子的概述 4
1.3.2清除超氧阴离子的原理 4
1.3.3清除羟基自由基原理 4
1.4DPPH法抗氧化模型的概述 4
1.4.1DPPH法原理 5
1.4.2DPPH自由基清除率测定方法 5
1.4.2.1分光光度计法 5
1.4.2.2高效液相色谱法(HPLC) 5
1.4.2.3电子顺磁共振法(EPR) 6
1.5柿叶多糖抗氧化活性研究的的目的和意义 6
2 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072#
柿叶中多糖的体外抗氧化活性研究 7
2.1材料、仪器和试剂 7
2.1.1实验材料 7
2.1.2 主要仪器 7
2.1.3 主要试剂 7
2.2 柿叶多糖的沉取 7
2.2.1 粗多糖的沉取 8
2.2.2sevag法除蛋白 8
2.2.3醇沉多糖 8
2.3 柿叶多糖含量测定方法学的建立 8
2.3.1 标准曲线的绘制 9
2.3.2精密度实验 10
2.3.3稳定性实验 10
2.3.4加样回收率试验 11
2.4柿叶多糖体外抗氧化活性研究 11
2.4.1超氧阴离子自由基清除能力的测定 11
2.4.2 羟基自由基清除能力测定 13
2.4.3 清除DPPH自由基能力的测定 13
2.5结果与分析 14
2.5.1 超氧阴离子的清除能力 14
2.5.2清除羟基自由基的能力 14
2.5.3多糖对DPPH自由基的清除能力 15
2.6讨论与结论 16
3小结 17
参考文献 18
致谢 20
1绪论
柿叶为柿树科柿树属(Diospyros)植物柿(Diospyroskaki L.f.)的新鲜或干燥的叶片[1]。味苦，性寒，其为药载于明代的药籍《滇南本草》 。柿叶含有多种生物活性成分，有助于降低血压，软化血管，增加冠状动脉流量，并且能活血消炎，改善心血管功能，还可以促进血液中乙醇的氧化，帮助机体对酒精的排泄，减少酒精对机体的伤害，柿叶具有生津止渴，抗菌消炎，镇咳止血，抗癌防癌，润肺强心，清热解毒等多种药理作用。柿叶中含有多种对人体健康有益的成分，例如胡萝卜素、多种氨基酸及铁、锌、钙、芦丁、黄酮苷、Vc、胆碱等多种化学成分 [2]。柿叶中的有机酸等有助于胃肠消化，增进食欲，同时有涩肠止血的功效，因此具有重要的研究与开发价值。
1.1 柿叶中化学成分的研究
现代研究表明[3]，柿叶中含有多种生物活性物质：包括黄酮类化合物(Flavonoids)、三萜类化合物（Triterpenoids）、有机酸类化合物(Organic acidcompounds)、多糖类化合物(Polysaccharide compounds)以及多酚类化合物(Polyphenols)等多种物质。这些生物活性物质具有广泛的药理作用。
1.1.1 多糖类化合物
多糖是由糖苷键结合的糖链，是由10个以上的单糖组成的聚合糖的高分子碳水化合物。多糖具有抗衰老、抗肿瘤、调节免疫等功效，因此被广泛地用于医疗和保健行业。冯婷等[4] 提取柿叶多糖，得到它的结构组成包括半乳糖，木糖，鼠李糖，阿拉伯糖等。
1.1.2黄酮类化合物
黄酮类化合物是一类广泛存在于自然界的﹑具有 2苯基色原酮基本结构的化合物。在柿叶的众多化学成分中，黄酮类化合物是最重要的活性物质之一，也是药理作用最广泛的化学成分之一。目前，已发现的黄酮类化合物有芦丁、槲皮素 、黄芪苷、异棚皮素、山萘酚 3OβD 葡萄糖苷、山萘酚 、山萘酚 3OαL 鼠李糖苷、山萘酚 3OαL阿拉伯糖苷、金丝桃苷（槲皮素3半乳糖苷）、山萘酚3βD木糖苷 、杨梅皮苷等。
1.1.3有机酸类化合物
柿叶中含有多种有机酸，主要有VC及其他有机酸。VC又称为L抗坏血酸，是人类和其他高等灵长类动物必须但又不能在体内合成的营养素，是植物维生素类营养的评价标志。柿叶中维生素的含量几乎是所有植物叶片中最高的。其他的有机酸包括对羟基苯甲酸、苯甲酸、苹果酸、原儿茶酚酸、丁香酸、糠酸、琥珀酸、水杨酸和吲哚基醋酸等。
1.1.4 三萜类化合物
三萜类化合物是由多个异戊二烯单位首尾相连构成的化合物。柿叶中含有齐墩果酸﹑熊果苷、桦木酸、乌苏酸、乌苏醇﹑19α羟基乌苏酸、19α,24二羟基乌苏酸 [910] 等多种三萜类化合物。
1.1.5 多酚类化合物
柿叶中含有多种酚类化合物，导致柿叶充满涩味的丹宁就属于多酚类化合物。有人研究表明 [5] 柿叶中含有没食子酸﹑肉桂酸﹑咖啡酸﹑香豆酸﹑绿原酸﹑原儿茶酸﹑阿魏酸﹑丁香酸等多种多酚类化合物。
1.2柿叶多糖的药理作用
中医上认为柿叶微苦，性寒，具有止咳定喘，生津止渴，活血止血，抗癌防癌，润肺强心，清热解毒等多种药理作用[6]。而柿叶多糖是柿叶主要成分之一，已成为近年来研究的热点，许多研究证实，柿叶多糖具有抗菌、增强免疫、延缓衰老，抗氧化等作用。
1.2.1抗氧化作用
经过大量的做实验，整理数据而得出，柿叶总多糖还是有一定能力的还原能力即氧化性，其也表明在超氧自由基清除方面也是有能力的，且多糖类化合物的增加趋势在实验范围内与其体外抗氧化活性呈正相相关性。总之，柿叶具有较强的体外抗氧化活性和自由基清除能力，是品质良好的天然抗氧化剂，可当做食品的添加剂和保健抗衰老功能[7]。我们都知道如果体内的自由基产生过多能够诱发体内的抗氧化体系不足，导致氧化物和抗氧化物平衡失调，从而引发衰老或者其他疾病。有人研究发现柿叶中的多糖成分能够有效的清除体内自由基，能够抑制红细胞膜、肝、脾等器官生物膜遭到氧化破坏。体现出柿叶多糖具有抗氧化作用[8]。
目 录
1绪论 1
1.1 柿叶中化学成分的研究 1
1.1.1 多糖类化合物 1
1.1.2黄酮类化合物 1
1.1.3有机酸类化合物 2
1.1.4 三萜类化合物 2
1.1.5 多酚类化合物 2
1.2柿叶多糖的药理作用 2
1.2.1抗氧化作用 2
1.2.2抗癌作用 3
1.2.3保护心脑血管作用 3
1.2.4降血压作用 3
1.2.5止血作用 3
1.2.6抗菌作用 3
1.3抗氧化模型的概述 3
1.3.1自由基离子的概述 4
1.3.2清除超氧阴离子的原理 4
1.3.3清除羟基自由基原理 4
1.4DPPH法抗氧化模型的概述 4
1.4.1DPPH法原理 5
1.4.2DPPH自由基清除率测定方法 5
1.4.2.1分光光度计法 5
1.4.2.2高效液相色谱法(HPLC) 5
1.4.2.3电子顺磁共振法(EPR) 6
1.5柿叶多糖抗氧化活性研究的的目的和意义 6
2 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072#
柿叶中多糖的体外抗氧化活性研究 7
2.1材料、仪器和试剂 7
2.1.1实验材料 7
2.1.2 主要仪器 7
2.1.3 主要试剂 7
2.2 柿叶多糖的沉取 7
2.2.1 粗多糖的沉取 8
2.2.2sevag法除蛋白 8
2.2.3醇沉多糖 8
2.3 柿叶多糖含量测定方法学的建立 8
2.3.1 标准曲线的绘制 9
2.3.2精密度实验 10
2.3.3稳定性实验 10
2.3.4加样回收率试验 11
2.4柿叶多糖体外抗氧化活性研究 11
2.4.1超氧阴离子自由基清除能力的测定 11
2.4.2 羟基自由基清除能力测定 13
2.4.3 清除DPPH自由基能力的测定 13
2.5结果与分析 14
2.5.1 超氧阴离子的清除能力 14
2.5.2清除羟基自由基的能力 14
2.5.3多糖对DPPH自由基的清除能力 15
2.6讨论与结论 16
3小结 17
参考文献 18
致谢 20
1绪论
柿叶为柿树科柿树属(Diospyros)植物柿(Diospyroskaki L.f.)的新鲜或干燥的叶片[1]。味苦，性寒，其为药载于明代的药籍《滇南本草》 。柿叶含有多种生物活性成分，有助于降低血压，软化血管，增加冠状动脉流量，并且能活血消炎，改善心血管功能，还可以促进血液中乙醇的氧化，帮助机体对酒精的排泄，减少酒精对机体的伤害，柿叶具有生津止渴，抗菌消炎，镇咳止血，抗癌防癌，润肺强心，清热解毒等多种药理作用。柿叶中含有多种对人体健康有益的成分，例如胡萝卜素、多种氨基酸及铁、锌、钙、芦丁、黄酮苷、Vc、胆碱等多种化学成分 [2]。柿叶中的有机酸等有助于胃肠消化，增进食欲，同时有涩肠止血的功效，因此具有重要的研究与开发价值。
1.1 柿叶中化学成分的研究
现代研究表明[3]，柿叶中含有多种生物活性物质：包括黄酮类化合物(Flavonoids)、三萜类化合物（Triterpenoids）、有机酸类化合物(Organic acidcompounds)、多糖类化合物(Polysaccharide compounds)以及多酚类化合物(Polyphenols)等多种物质。这些生物活性物质具有广泛的药理作用。
1.1.1 多糖类化合物
多糖是由糖苷键结合的糖链，是由10个以上的单糖组成的聚合糖的高分子碳水化合物。多糖具有抗衰老、抗肿瘤、调节免疫等功效，因此被广泛地用于医疗和保健行业。冯婷等[4] 提取柿叶多糖，得到它的结构组成包括半乳糖，木糖，鼠李糖，阿拉伯糖等。
1.1.2黄酮类化合物
黄酮类化合物是一类广泛存在于自然界的﹑具有 2苯基色原酮基本结构的化合物。在柿叶的众多化学成分中，黄酮类化合物是最重要的活性物质之一，也是药理作用最广泛的化学成分之一。目前，已发现的黄酮类化合物有芦丁、槲皮素 、黄芪苷、异棚皮素、山萘酚 3OβD 葡萄糖苷、山萘酚 、山萘酚 3OαL 鼠李糖苷、山萘酚 3OαL阿拉伯糖苷、金丝桃苷（槲皮素3半乳糖苷）、山萘酚3βD木糖苷 、杨梅皮苷等。
1.1.3有机酸类化合物
柿叶中含有多种有机酸，主要有VC及其他有机酸。VC又称为L抗坏血酸，是人类和其他高等灵长类动物必须但又不能在体内合成的营养素，是植物维生素类营养的评价标志。柿叶中维生素的含量几乎是所有植物叶片中最高的。其他的有机酸包括对羟基苯甲酸、苯甲酸、苹果酸、原儿茶酚酸、丁香酸、糠酸、琥珀酸、水杨酸和吲哚基醋酸等。
1.1.4 三萜类化合物
三萜类化合物是由多个异戊二烯单位首尾相连构成的化合物。柿叶中含有齐墩果酸﹑熊果苷、桦木酸、乌苏酸、乌苏醇﹑19α羟基乌苏酸、19α,24二羟基乌苏酸 [910] 等多种三萜类化合物。
1.1.5 多酚类化合物
柿叶中含有多种酚类化合物，导致柿叶充满涩味的丹宁就属于多酚类化合物。有人研究表明 [5] 柿叶中含有没食子酸﹑肉桂酸﹑咖啡酸﹑香豆酸﹑绿原酸﹑原儿茶酸﹑阿魏酸﹑丁香酸等多种多酚类化合物。
1.2柿叶多糖的药理作用
中医上认为柿叶微苦，性寒，具有止咳定喘，生津止渴，活血止血，抗癌防癌，润肺强心，清热解毒等多种药理作用[6]。而柿叶多糖是柿叶主要成分之一，已成为近年来研究的热点，许多研究证实，柿叶多糖具有抗菌、增强免疫、延缓衰老，抗氧化等作用。
1.2.1抗氧化作用
经过大量的做实验，整理数据而得出，柿叶总多糖还是有一定能力的还原能力即氧化性，其也表明在超氧自由基清除方面也是有能力的，且多糖类化合物的增加趋势在实验范围内与其体外抗氧化活性呈正相相关性。总之，柿叶具有较强的体外抗氧化活性和自由基清除能力，是品质良好的天然抗氧化剂，可当做食品的添加剂和保健抗衰老功能[7]。我们都知道如果体内的自由基产生过多能够诱发体内的抗氧化体系不足，导致氧化物和抗氧化物平衡失调，从而引发衰老或者其他疾病。有人研究发现柿叶中的多糖成分能够有效的清除体内自由基，能够抑制红细胞膜、肝、脾等器官生物膜遭到氧化破坏。体现出柿叶多糖具有抗氧化作用[8]。
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