5个不同品系绞股蓝茎中总皂苷含量的测定比较(附件)
本人签名__________ 日期___________摘 要绞股蓝(Gynostemma)又名七叶胆，是葫芦科绞股蓝属植物，为多年生蔓生草本，是一种传统药食同源的植物，该属植物全世界约有16种和3变种，我国有14种和2变种，其中9种和2变种为中国特有种，主要分布在长江以南地区，尤其是西南地区。现代药理学证明，绞股蓝皂苷具有抑制肿瘤、防止衰老、降低血脂、增强免疫力、镇静止痛、保护心脏和肝脏，促进细胞新诚代谢、强壮补益等作用。本课题通过建立紫外分光光度法并对其进行方法学考察，结果显示，精密度实验RSD值为0.89%，稳定性实验RSD值为1.60%，重复性实验RSD值为1.79%，加样回收实验RSD值为1.25%，实验数据可以看出方法学考察的每个实验的RSD值均小于2%，说明该方法是一种可靠、稳定的检测方法。课题采用此方法，以安康市平利县5个不同绞股蓝四倍体品系（40201、403、404、405、甜味绞股蓝）为材料，系统地研究了不同生长时期、不同品系的绞股蓝根中总皂苷的含量并加以比较。实验结果表明品系404、405绞股蓝茎中总皂苷的含量相对其他三个品系较高，其最佳采收期为8 月。
目 录
1 绪论 1
1.1 绞股蓝的概况 1
1.2 绞股蓝的主要化学成分 1
1.2.1 绞股蓝皂苷 1
1.2.2氨基酸 2
1.2.3多糖 2
1.2.4黄酮类化合物 2
1.2.5微量元素 2
1.2.6维生素 3
1.3绞股蓝的药理作用 3
1.3.1 提高免疫力，消除亚健康 3
1.3.2 调节内分泌 3
1.3.3 延缓衰老 3
1.3.4 保护心血管 4
1.3.5 降血脂血糖 4
1.3.6抗癌 4
1.3.7 神经系统疾病 5
1.3.8抵消激素类药物副作用 5
1.4 国内研究现状 5
1.5绞股蓝的开发利用 6
1.6研究的意义 5
1.7 研究的内容 7
2 实验研究 7
2.1 实验仪器 9
2. *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
2 实验方法 9
2.3方法学考察 12
2.3.1精密度试验 12
2.3.2稳定性试验 12
2.3.3重现性试验 12
2.3.4加样回收试验 13
2.4 结果与分析 11
结论 17
参考文献 20
致 谢 22
1 绪论
1.1 绞股蓝的概况
绞股蓝为葫芦科绞股蓝属多年生草质藤本植物，茎细弱，具分枝，具纵棱及槽，无毛或疏被短柔毛。日本称之为甘蔓茶。绞股蓝喜阴湿温和的气候，多野生在林下、小溪边等隐蔽处。在中国主要分布在陕西平利、甘肃康县、湖南、湖北，云南、广西等，全草入药，具有很高的药用价值。绞股蓝之名始载于明代公元年朱楠所著的《救荒本草》中，当时并不做药用,而是做为救荒的野菜食用。书中云“生于野中,延蔓而生，叶似小蓝叶,短小软薄、边有锯齿又似痢见草叶、亦软、淡绿[1]。叶味甜。采叶炸熟,水浸去邪味涎沫,淘洗净,油盐调食”。据《中药大辞典》、《中草药通讯》早期的记载,绞股蓝植物性微苦、性寒、无毒主要用于消炎解毒、止咳怯痰、治疗慢性气管炎。绞股蓝学名中的种加词,其意为“五叶”,据文献记载,广布中国长江以南及陕西南部的绞股蓝,有五叶的,也有七叶的[2]。日本名所记载的“甘茶蔓”,其味较甜,而五叶的绞股蓝既有甜味者,也有苦味者,七叶亦然,甜味、苦味均有。
1.2 绞股蓝的主要化学成分
绞股蓝作为五加科之外含有人参皂苷类化学成分的植物之一,近年来,国内外学者对绞股蓝化学成分及生物活性进行了广泛和深入地研究。绞股蓝的化学成分主要有皂苷、氨基酸、多糖、黄酮类化合物、微量元素、维生素等等。
1.2.1 绞股蓝皂苷
绞股蓝皂苷是由苷基与配糖基相结合的大分子，为淡黄色或浅白色无定形粉末，味甘，无毒，有很强的起泡性，酸碱性为中性，易溶于热水，醇溶液，在含水正丁醇中有较大溶解度，几乎不溶于苯、氯仿、丙酮等低极性有机溶剂，熔点约139303℃[2]。林如等利用冰冻切片法和改良的人参皂苷显色剂对绞股蓝中的皂苷进行组织化学研究，显示绞股蓝皂苷主要分布在营养器官的同化组织及韧皮薄壁细胞中为，其基本化学结构是达玛烷型四环三萜类，主要由βD葡萄吡喃糖、βD木吡喃糖和αL鼠李吡喃糖组成，亦有少数皂苷的糖链含有αL阿吡喃糖[3]。 在已经分离出的83种皂苷中,还有许多绞股蓝皂试产生的次生苷、苷元和次级苷元与人参皂苷的水解产物相同。绞股蓝皂苷Rb1具有乳化作用，可代肥皂作为清洁剂或去污剂，醋酐浓硫酸反应可以用于鉴定绞股蓝中皂苷成分[4]。
1.2.2氨基酸
氨基酸是构成生物机体的众多生物活性大分子之一，是构建细胞、修复组织的基础材料。同时，氨基酸也是绞股蓝的主要化学成分之一，根据文献报道，不同品种不同产地的绞股蓝氨基酸含量也是不尽相同的[5],其中不少的氨基酸具有药理活性，如天门冬氨酸具有镇咳作用，绞股蓝全草总氨基酸含量一般在1025%，且不同的部位含量也不同。
1.2.3多糖
绞股蓝总糖含量一般为11.22％13.05％。查阅相关文献得知专家们专门用纸层析法对绞股蓝的多糖进行了分析,结果表明茎和叶均含有果糖、葡萄糖、半乳糖和低聚糖,其水解产物均含有鼠李糖、木搪、阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖成分等[6]。
1.2.4黄酮类化合物
黄酮类化合物是植物界分布较广泛的一大类天然酚性化合物，具有很强的生物学活性，具有调节血管渗透性、抗菌消炎、抗氧化等能力，对氧自由基也有较强的清除作用，目前发现的绞股蓝中的黄酮物质主要为芦丁，檞皮素，商陆素，商路苷，山奈酚，异鼠李素等，其中总黄酮含量可高达百分之三[7]。钱俊臻等研究表明，绞股蓝黄酮主要分布在绞股蓝叶表皮、叶肉细胞、叶的皮毛及腺毛、地上茎的表皮、茎的同化组织等等。
1.2.5微量元素
绞股蓝中含有丰富的矿质元素，据文献报道含有钙、磷、钾、镁、钠等人体必需的常量元素和铁、锌、铜、硒等人体必需的微量元素共23种。绞股蓝中微量元素的含量也因土壤的不同有所差别，如湖北恩施的绞股蓝,其生长地带土壤富含有Zn、Se[8]。其中,Se不仅能清除人体内产生的各种自由基,保护细胞膜蛋白质和细胞内DNA的结构和功能,而且能抑制致癌物质的活性,阻止癌细胞的分裂与生长,抵抗环境污染中Hg、As和Cd的毒性,是一种非常重要的元素。
1.2.6维生素
绞股蓝含有丰富的维生素E，维生素E是一种很强的抗氧化剂,是动物的必需营养物质,它的缺乏会影响到动物的免疫作用,对防止和抑制癌细胞的形成也有一定作用。
1.3绞股蓝的药理作用
绞股蓝活性成份具有提高免疫力、调节内分泌、延缓衰老、保护心血管、降血脂血糖、防抗癌，并对神经系统疾病具有较好的治疗效果，而且还可以减肥、美容、护肤，更可以抵消激素类药物副作用[9]。日本药理试验和临床应用证实，绞股蓝不仅对人体有滋补、镇静、催眠、抗紧张、促食欲、降血脂、降胆固醇、降转氨酶、延缓衰老等作用，而且对改善人体机能一系列代谢，促进人体的机能正常运转有很大的作用。
1.3.1 提高免疫力，消除亚健康
绞股蓝能够提高巨噬能力，明显增高白细胞数，同时增加白细胞自身的吞噬功能，促进体内白介素的分泌，增加血清免疫蛋白的产生。
亚健康是指在健康与疾病之间存在的一种非健康也非疾病的中间状态。指机体虽没有器质性病变指标，但却出现免疫力下降，生理功能低下，活力降低，适应能力减退的一种生理心理状态，而绞股蓝具有提高人体自身免疫力的作用，可以有效地消除亚健康状态[10]。人体某部分机能虚弱，会对某些物质产生过敏，而形成支气管喘息、皮肤丘疹、关节疼痛等，绞股蓝对这些症状有显著的改善作用[11]。
目 录
1 绪论 1
1.1 绞股蓝的概况 1
1.2 绞股蓝的主要化学成分 1
1.2.1 绞股蓝皂苷 1
1.2.2氨基酸 2
1.2.3多糖 2
1.2.4黄酮类化合物 2
1.2.5微量元素 2
1.2.6维生素 3
1.3绞股蓝的药理作用 3
1.3.1 提高免疫力，消除亚健康 3
1.3.2 调节内分泌 3
1.3.3 延缓衰老 3
1.3.4 保护心血管 4
1.3.5 降血脂血糖 4
1.3.6抗癌 4
1.3.7 神经系统疾病 5
1.3.8抵消激素类药物副作用 5
1.4 国内研究现状 5
1.5绞股蓝的开发利用 6
1.6研究的意义 5
1.7 研究的内容 7
2 实验研究 7
2.1 实验仪器 9
2. *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
2 实验方法 9
2.3方法学考察 12
2.3.1精密度试验 12
2.3.2稳定性试验 12
2.3.3重现性试验 12
2.3.4加样回收试验 13
2.4 结果与分析 11
结论 17
参考文献 20
致 谢 22
1 绪论
1.1 绞股蓝的概况
绞股蓝为葫芦科绞股蓝属多年生草质藤本植物，茎细弱，具分枝，具纵棱及槽，无毛或疏被短柔毛。日本称之为甘蔓茶。绞股蓝喜阴湿温和的气候，多野生在林下、小溪边等隐蔽处。在中国主要分布在陕西平利、甘肃康县、湖南、湖北，云南、广西等，全草入药，具有很高的药用价值。绞股蓝之名始载于明代公元年朱楠所著的《救荒本草》中，当时并不做药用,而是做为救荒的野菜食用。书中云“生于野中,延蔓而生，叶似小蓝叶,短小软薄、边有锯齿又似痢见草叶、亦软、淡绿[1]。叶味甜。采叶炸熟,水浸去邪味涎沫,淘洗净,油盐调食”。据《中药大辞典》、《中草药通讯》早期的记载,绞股蓝植物性微苦、性寒、无毒主要用于消炎解毒、止咳怯痰、治疗慢性气管炎。绞股蓝学名中的种加词,其意为“五叶”,据文献记载,广布中国长江以南及陕西南部的绞股蓝,有五叶的,也有七叶的[2]。日本名所记载的“甘茶蔓”,其味较甜,而五叶的绞股蓝既有甜味者,也有苦味者,七叶亦然,甜味、苦味均有。
1.2 绞股蓝的主要化学成分
绞股蓝作为五加科之外含有人参皂苷类化学成分的植物之一,近年来,国内外学者对绞股蓝化学成分及生物活性进行了广泛和深入地研究。绞股蓝的化学成分主要有皂苷、氨基酸、多糖、黄酮类化合物、微量元素、维生素等等。
1.2.1 绞股蓝皂苷
绞股蓝皂苷是由苷基与配糖基相结合的大分子，为淡黄色或浅白色无定形粉末，味甘，无毒，有很强的起泡性，酸碱性为中性，易溶于热水，醇溶液，在含水正丁醇中有较大溶解度，几乎不溶于苯、氯仿、丙酮等低极性有机溶剂，熔点约139303℃[2]。林如等利用冰冻切片法和改良的人参皂苷显色剂对绞股蓝中的皂苷进行组织化学研究，显示绞股蓝皂苷主要分布在营养器官的同化组织及韧皮薄壁细胞中为，其基本化学结构是达玛烷型四环三萜类，主要由βD葡萄吡喃糖、βD木吡喃糖和αL鼠李吡喃糖组成，亦有少数皂苷的糖链含有αL阿吡喃糖[3]。 在已经分离出的83种皂苷中,还有许多绞股蓝皂试产生的次生苷、苷元和次级苷元与人参皂苷的水解产物相同。绞股蓝皂苷Rb1具有乳化作用，可代肥皂作为清洁剂或去污剂，醋酐浓硫酸反应可以用于鉴定绞股蓝中皂苷成分[4]。
1.2.2氨基酸
氨基酸是构成生物机体的众多生物活性大分子之一，是构建细胞、修复组织的基础材料。同时，氨基酸也是绞股蓝的主要化学成分之一，根据文献报道，不同品种不同产地的绞股蓝氨基酸含量也是不尽相同的[5],其中不少的氨基酸具有药理活性，如天门冬氨酸具有镇咳作用，绞股蓝全草总氨基酸含量一般在1025%，且不同的部位含量也不同。
1.2.3多糖
绞股蓝总糖含量一般为11.22％13.05％。查阅相关文献得知专家们专门用纸层析法对绞股蓝的多糖进行了分析,结果表明茎和叶均含有果糖、葡萄糖、半乳糖和低聚糖,其水解产物均含有鼠李糖、木搪、阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖成分等[6]。
1.2.4黄酮类化合物
黄酮类化合物是植物界分布较广泛的一大类天然酚性化合物，具有很强的生物学活性，具有调节血管渗透性、抗菌消炎、抗氧化等能力，对氧自由基也有较强的清除作用，目前发现的绞股蓝中的黄酮物质主要为芦丁，檞皮素，商陆素，商路苷，山奈酚，异鼠李素等，其中总黄酮含量可高达百分之三[7]。钱俊臻等研究表明，绞股蓝黄酮主要分布在绞股蓝叶表皮、叶肉细胞、叶的皮毛及腺毛、地上茎的表皮、茎的同化组织等等。
1.2.5微量元素
绞股蓝中含有丰富的矿质元素，据文献报道含有钙、磷、钾、镁、钠等人体必需的常量元素和铁、锌、铜、硒等人体必需的微量元素共23种。绞股蓝中微量元素的含量也因土壤的不同有所差别，如湖北恩施的绞股蓝,其生长地带土壤富含有Zn、Se[8]。其中,Se不仅能清除人体内产生的各种自由基,保护细胞膜蛋白质和细胞内DNA的结构和功能,而且能抑制致癌物质的活性,阻止癌细胞的分裂与生长,抵抗环境污染中Hg、As和Cd的毒性,是一种非常重要的元素。
1.2.6维生素
绞股蓝含有丰富的维生素E，维生素E是一种很强的抗氧化剂,是动物的必需营养物质,它的缺乏会影响到动物的免疫作用,对防止和抑制癌细胞的形成也有一定作用。
1.3绞股蓝的药理作用
绞股蓝活性成份具有提高免疫力、调节内分泌、延缓衰老、保护心血管、降血脂血糖、防抗癌，并对神经系统疾病具有较好的治疗效果，而且还可以减肥、美容、护肤，更可以抵消激素类药物副作用[9]。日本药理试验和临床应用证实，绞股蓝不仅对人体有滋补、镇静、催眠、抗紧张、促食欲、降血脂、降胆固醇、降转氨酶、延缓衰老等作用，而且对改善人体机能一系列代谢，促进人体的机能正常运转有很大的作用。
1.3.1 提高免疫力，消除亚健康
绞股蓝能够提高巨噬能力，明显增高白细胞数，同时增加白细胞自身的吞噬功能，促进体内白介素的分泌，增加血清免疫蛋白的产生。
亚健康是指在健康与疾病之间存在的一种非健康也非疾病的中间状态。指机体虽没有器质性病变指标，但却出现免疫力下降，生理功能低下，活力降低，适应能力减退的一种生理心理状态，而绞股蓝具有提高人体自身免疫力的作用，可以有效地消除亚健康状态[10]。人体某部分机能虚弱，会对某些物质产生过敏，而形成支气管喘息、皮肤丘疹、关节疼痛等，绞股蓝对这些症状有显著的改善作用[11]。
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