二根龙蛭胶囊中黄芪及丹参的提取工艺研究(附件)
摘 要本实验探讨二根龙蛭胶囊中主要药味丹参和黄芪中有效成分的提取工艺，为二根龙蛭胶囊的产品开发提供科学依据。脂溶性成分的工艺研究，以总黄酮、隐丹参酮、丹参酮ⅡA及毛蕊异黄酮葡萄糖苷为指标，以乙醇浓度、料液比、提取次数、提取时间为因素，设计四因素三水平正交试验，优选最佳醇提工艺；水溶性成分的工艺研究，以总皂苷、总多糖、迷迭香酸及丹酚酸B为指标，以料液比、提取次数、提取时间、提取温度为因素，设计四因素三水平正交试验，优选最佳水提工艺。醇提最佳工艺为A1B1C1D3。即加70%乙醇10倍量，回流提取1次，每次2h。水提最佳工艺为A2B2C3D1，即醇提后药渣加6倍量水60℃提取2次，每次2小时。优选出二根龙蛭胶囊中主要药味丹参和黄芪中脂溶4性成分和水溶性成分的最佳提取工艺，为产品开发及工业化生产提供科学依据。
目 录
1绪论 2
1.2丹参 3
1.2.1丹参的来源及功效 3
1.2.2丹参化学成分及药理作用 3
1.3黄芪 4
1.3.1黄芪的来源及功效 4
1.3.2黄芪化学成分及药理作用 4
2实验部分 6
2.1试药及仪器 6
2.1.1试药 6
2.1.2 仪器 6
2.2方法与结果 7
2.2.1醇溶性成分测定方法建立 7
2.2.2醇溶性成分提取工艺设计 5
2.2.3水溶性成分测定方法建立 8
2.2.4醇溶性成分提取工艺设计 13
2.2.5讨论 16
结论 17
参考文献 19
致谢 21
1 绪论
二根龙蛭胶囊以黄芪、丹参、灯盏细辛、葛根和地龙等药味组成，具有益气活血、利水、化瘀通络等功效。用于治疗气虚血瘀，脉络瘀阻所致的中风恢复期。症见半身不遂，肢体麻木，口眼歪斜，言语不清或不语，感觉减退或消失。现以二根龙蛭胶囊中主要药味丹参和黄芪中有效成分的提取工艺，为二根龙蛭胶囊的产品开发提供科学依据。
1.2丹参
1.2.1丹参的来源及功效
丹参始载于《神农本草经》，被列为草部上品，为唇 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
形科鼠尾草植物丹参Salvia miltiorrhiza a Bunge的干燥根及根茎[4]，是最常用的活血化瘀中药之一。丹参，味苦，性微寒，入心，肝经，用于活血通经、祛瘀止痛、清心除烦、养血安神[5]。中医有“一味丹参，功同四物”之说，补血生血，功过归地；调血敛血，力堪芍药；逐血生新，性倍川芎[6]，表明其活血功能显著。
1.2.2丹参化学成分及药理作用
现代药理研究发现［7],丹参具有扩张冠状动脉、防止心肌缺血和心肌梗死、改善微循环、降低心肌耗氧量等作用，被广泛用于临床各种心血管疾病的治疗。丹参主要通过脂溶性的丹参酮和水溶性的丹酚酸两大类成分发挥作用，其中酚酸类化合物多具有抗心肌缺血活性[8]。研究发现，丹参中的脂溶性成分包括隐丹参酮(cryptotanshinone)、丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA)、丹参酮(tanshinone)等；水溶性酚酸类成分主要有丹酚酸A(salvianolicacid A)、丹酚酸B(salvianolicacid B)、迷迭香酸、原儿茶醛(protocatechualdehyde)、丹参素等［9］。研究表明，丹参中具有药理活性的成分有两部分，本实验研究结果能同时兼顾丹参脂溶性和水溶性成分，使丹参的提取工艺更为科学合理。其水溶性部分在化学成分、药理作用方面已被广泛应用[10]，其中丹酚酸B含量最高，具有强烈的抗氧化和清除氧自由基的活性旧[11]。2015版《中国药典》中丹酚酸B的提取方法采用75％甲醇回流提取l h。报道，丹参饮片中丹酚酸B不稳定，温度对其影响较大，且回流方法比较复杂，费时耗能[12]。
1.3黄芪
1.3.1黄芪的来源及功效
黄芪原名黄耆，是豆科多年生草本植物，是著名的常用滋补中气药材，我国传统中药之一，已有2000多年的应用历史；疗效显著，在国内外享有盛誉[13]。李时珍释其名曰：“耆者，长也，黄耆色黄，为补药之长，故名[14]。”我国药典规定，药用黄芪有2种：豆科植物膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch) Bge.和蒙古黄芪A.membranaceus Bge.var.mongholicus(Bge)Hsiao的干燥根。性味甘, 微温, 归脾、肺经, 具有补气升阳、益卫固表、利水消肿、敛疮生肌等功效。主要生产于山西、黑龙江、辽宁等省，前苏联、朝鲜和蒙古等地也有分布。
1.3.2黄芪化学成分及药理作用
黄芪药用历史悠久，现代药理学研究证实，其具有保肝、利尿、增强免疫、降压、降糖、抗菌、抗肿瘤等药理作用[15]。临床常用于防治免疫功能紊乱性疾病、心脑血管疾病、促智、延缓衰老和抗肿瘤等多种疾病 , 疗效确切且副作用较少[6]。随着对黄芪药理作用研究的不断深入，黄芪单味用药、复方制剂以及提取物等在临床中获得了广泛应用[16]。黄芪为常用中药, 黄芪提取物(extract of astragalus, EA)是从黄芪中提取的有效成分, 主要包括黄芪总苷(astragalosides, AST)和黄芪多糖(astragalus polysaccharides , APS)[17]。以及多种微量元素，其中黄芪多糖是主要成分，具有广泛的药理作用。近年来，黄芪以其出众的免疫调节功效赢得了越来越多的关注[18]。 黄芪具有丰富的化学成分，如黄芪皂苷、黄芪多糖、黄酮类化合物及三萜类物质，还含有多种微量元素［19］。黄芪的药理作用较为广泛，大量研究证实，黄芪及其提取物具有保护心肌、免疫调节、防治缺血再灌注损伤、调节血糖血压等诸多作用，对多种疾病具有独特疗效［20]。黄芪对于循环系统疾病具有显著疗效。其具有扩张血管、强心、利尿以及改善心脏血流动力学等诸多作用，可有效调节患者神经内分泌，改善心肌供氧、供血及能量供给等；其对结缔组织异常增生具有抑制作用，可降低心肌硬度，从而改善患者的心肌舒张功能，对于病毒性心肌炎及其所致心力衰竭具有显著疗效［21］。黄芪具有强效抗氧化活性，可有效抑制自由基生成并清除过剩自由基，从而发挥细胞保护作用，对于神经系统相关性疾病、缺氧缺血性脑病等具有显著疗效［23］。随着临床研究的深入，黄芪的抗癌作用受到广泛关注，并得到了动物实验研究的证实［24］。本研究中，脑血栓、慢性乙型肝炎、Ⅱ型糖尿病、糖尿病肾病及心力衰竭等疾病患者在常规治疗的基础上加用黄芪制剂后，临床疗效获得了显著提高，表明黄芪具有广泛的药理作用，值得临床推广应用。
2实验部分
2.1试药及仪器
2.1.1试药
丹参、黄芪药材(购自陕西康盛堂药业有限公司，经雷国莲教授鉴定为干燥块根)，备用。人参皂苷Rb1对照品（上海源叶生物科技有限公司，批号HJ0607XA13，HPLC≥98%)、无水芦丁（中国食品药品检定研究院，批号100080200707，HPLC≥92.5%）、D无水葡萄糖（上海源叶生物科技有限公司，批号140409，HPLC≥98%）、迷迭香酸对照品（上海源叶生物科技有限公司，批号P26ATF13802，HPLC≥98%）、丹酚酸B对照品（上海源叶生物科技有限公司，批号Y14MTH14804，HPLC≥98%）、隐丹参酮对照品（中国食品药品检定研究院，批号110852200806，HPLC≥98.7%）、丹参酮ⅡA对照品（中国食品药品检定研究院，批号110766200619，HPLC≥100%）、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号111920201304，含量按98.3%计）、香草醛、冰醋酸、高氯酸、正丁醇、氨水、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、蒸馏水、苯酚、浓硫酸、磷酸、、甲酸、纯化水、乙腈（色谱）、甲醇（色谱、分析）、超纯净水。
目 录
1绪论 2
1.2丹参 3
1.2.1丹参的来源及功效 3
1.2.2丹参化学成分及药理作用 3
1.3黄芪 4
1.3.1黄芪的来源及功效 4
1.3.2黄芪化学成分及药理作用 4
2实验部分 6
2.1试药及仪器 6
2.1.1试药 6
2.1.2 仪器 6
2.2方法与结果 7
2.2.1醇溶性成分测定方法建立 7
2.2.2醇溶性成分提取工艺设计 5
2.2.3水溶性成分测定方法建立 8
2.2.4醇溶性成分提取工艺设计 13
2.2.5讨论 16
结论 17
参考文献 19
致谢 21
1 绪论
二根龙蛭胶囊以黄芪、丹参、灯盏细辛、葛根和地龙等药味组成，具有益气活血、利水、化瘀通络等功效。用于治疗气虚血瘀，脉络瘀阻所致的中风恢复期。症见半身不遂，肢体麻木，口眼歪斜，言语不清或不语，感觉减退或消失。现以二根龙蛭胶囊中主要药味丹参和黄芪中有效成分的提取工艺，为二根龙蛭胶囊的产品开发提供科学依据。
1.2丹参
1.2.1丹参的来源及功效
丹参始载于《神农本草经》，被列为草部上品，为唇 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
形科鼠尾草植物丹参Salvia miltiorrhiza a Bunge的干燥根及根茎[4]，是最常用的活血化瘀中药之一。丹参，味苦，性微寒，入心，肝经，用于活血通经、祛瘀止痛、清心除烦、养血安神[5]。中医有“一味丹参，功同四物”之说，补血生血，功过归地；调血敛血，力堪芍药；逐血生新，性倍川芎[6]，表明其活血功能显著。
1.2.2丹参化学成分及药理作用
现代药理研究发现［7],丹参具有扩张冠状动脉、防止心肌缺血和心肌梗死、改善微循环、降低心肌耗氧量等作用，被广泛用于临床各种心血管疾病的治疗。丹参主要通过脂溶性的丹参酮和水溶性的丹酚酸两大类成分发挥作用，其中酚酸类化合物多具有抗心肌缺血活性[8]。研究发现，丹参中的脂溶性成分包括隐丹参酮(cryptotanshinone)、丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA)、丹参酮(tanshinone)等；水溶性酚酸类成分主要有丹酚酸A(salvianolicacid A)、丹酚酸B(salvianolicacid B)、迷迭香酸、原儿茶醛(protocatechualdehyde)、丹参素等［9］。研究表明，丹参中具有药理活性的成分有两部分，本实验研究结果能同时兼顾丹参脂溶性和水溶性成分，使丹参的提取工艺更为科学合理。其水溶性部分在化学成分、药理作用方面已被广泛应用[10]，其中丹酚酸B含量最高，具有强烈的抗氧化和清除氧自由基的活性旧[11]。2015版《中国药典》中丹酚酸B的提取方法采用75％甲醇回流提取l h。报道，丹参饮片中丹酚酸B不稳定，温度对其影响较大，且回流方法比较复杂，费时耗能[12]。
1.3黄芪
1.3.1黄芪的来源及功效
黄芪原名黄耆，是豆科多年生草本植物，是著名的常用滋补中气药材，我国传统中药之一，已有2000多年的应用历史；疗效显著，在国内外享有盛誉[13]。李时珍释其名曰：“耆者，长也，黄耆色黄，为补药之长，故名[14]。”我国药典规定，药用黄芪有2种：豆科植物膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch) Bge.和蒙古黄芪A.membranaceus Bge.var.mongholicus(Bge)Hsiao的干燥根。性味甘, 微温, 归脾、肺经, 具有补气升阳、益卫固表、利水消肿、敛疮生肌等功效。主要生产于山西、黑龙江、辽宁等省，前苏联、朝鲜和蒙古等地也有分布。
1.3.2黄芪化学成分及药理作用
黄芪药用历史悠久，现代药理学研究证实，其具有保肝、利尿、增强免疫、降压、降糖、抗菌、抗肿瘤等药理作用[15]。临床常用于防治免疫功能紊乱性疾病、心脑血管疾病、促智、延缓衰老和抗肿瘤等多种疾病 , 疗效确切且副作用较少[6]。随着对黄芪药理作用研究的不断深入，黄芪单味用药、复方制剂以及提取物等在临床中获得了广泛应用[16]。黄芪为常用中药, 黄芪提取物(extract of astragalus, EA)是从黄芪中提取的有效成分, 主要包括黄芪总苷(astragalosides, AST)和黄芪多糖(astragalus polysaccharides , APS)[17]。以及多种微量元素，其中黄芪多糖是主要成分，具有广泛的药理作用。近年来，黄芪以其出众的免疫调节功效赢得了越来越多的关注[18]。 黄芪具有丰富的化学成分，如黄芪皂苷、黄芪多糖、黄酮类化合物及三萜类物质，还含有多种微量元素［19］。黄芪的药理作用较为广泛，大量研究证实，黄芪及其提取物具有保护心肌、免疫调节、防治缺血再灌注损伤、调节血糖血压等诸多作用，对多种疾病具有独特疗效［20]。黄芪对于循环系统疾病具有显著疗效。其具有扩张血管、强心、利尿以及改善心脏血流动力学等诸多作用，可有效调节患者神经内分泌，改善心肌供氧、供血及能量供给等；其对结缔组织异常增生具有抑制作用，可降低心肌硬度，从而改善患者的心肌舒张功能，对于病毒性心肌炎及其所致心力衰竭具有显著疗效［21］。黄芪具有强效抗氧化活性，可有效抑制自由基生成并清除过剩自由基，从而发挥细胞保护作用，对于神经系统相关性疾病、缺氧缺血性脑病等具有显著疗效［23］。随着临床研究的深入，黄芪的抗癌作用受到广泛关注，并得到了动物实验研究的证实［24］。本研究中，脑血栓、慢性乙型肝炎、Ⅱ型糖尿病、糖尿病肾病及心力衰竭等疾病患者在常规治疗的基础上加用黄芪制剂后，临床疗效获得了显著提高，表明黄芪具有广泛的药理作用，值得临床推广应用。
2实验部分
2.1试药及仪器
2.1.1试药
丹参、黄芪药材(购自陕西康盛堂药业有限公司，经雷国莲教授鉴定为干燥块根)，备用。人参皂苷Rb1对照品（上海源叶生物科技有限公司，批号HJ0607XA13，HPLC≥98%)、无水芦丁（中国食品药品检定研究院，批号100080200707，HPLC≥92.5%）、D无水葡萄糖（上海源叶生物科技有限公司，批号140409，HPLC≥98%）、迷迭香酸对照品（上海源叶生物科技有限公司，批号P26ATF13802，HPLC≥98%）、丹酚酸B对照品（上海源叶生物科技有限公司，批号Y14MTH14804，HPLC≥98%）、隐丹参酮对照品（中国食品药品检定研究院，批号110852200806，HPLC≥98.7%）、丹参酮ⅡA对照品（中国食品药品检定研究院，批号110766200619，HPLC≥100%）、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号111920201304，含量按98.3%计）、香草醛、冰醋酸、高氯酸、正丁醇、氨水、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、蒸馏水、苯酚、浓硫酸、磷酸、、甲酸、纯化水、乙腈（色谱）、甲醇（色谱、分析）、超纯净水。
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