板蓝根颗粒微生物限度检查法适用性试验(附件)
摘 要目的：《中国药典》2015版的颁布与实施，需要针对具体药品的具体检验方法进行验证。保证该方法的科学性和可行性。建立板蓝根颗粒微生物限度检查法适用性试验，确保该方法适用于此药品，并能反应出微生物污染的程度，保证药品的安全、有效。方法：本次依据《中国药典》2015版的1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法进行回收率试验及1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法的验证。结果：5种菌试验回收率均在50%-200%之间，其中金黄色葡萄球菌的回收率为105.6%、166.7% 、133.3%,稀释剂组回收率为166.7%。铜绿假单胞菌的回收率为84.5%、93.1%、91.4 %；稀释剂组回收率为160.3%。枯草芽孢杆菌的回收率为128.6%、104.8%、119.0%；稀释剂组回收率为138.1%。白色念珠菌的回收率为79.4%、117.5%、88.9%；82.3%、113.7%、119.6%稀释剂组回收率为81%；117.6%。黑曲霉菌的回收率为107.3%、111.6%、116.5%；113.5%、114.4%、111.7%稀释剂组回收率为112.8%；108.1%。控制菌检查中，金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌均可检查出试验菌。阴性组均无菌生长。 结论：本文所确立的平皿倾注法检查需氧菌总数、霉菌及酵母菌总数计数方法的验证及常规法检查控制菌的方法可作为板蓝根颗粒的微生物限度检查方法的依据。 目 录
1.前 言
1.1综 述 1
1.1.1板蓝根简介 1
1.1.2处方组成和药理作用 2
1.1.3制备工艺 3
2.材料与方法
2.1材料 4
2.1.1仪器与设备 4
2.1.2培养基、稀释剂及试剂 5
2.1.3菌种 6
2.1.4样品 6
2.2方法 6
2.2.1试验菌液的制备 6
2.2.2金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌菌液制备.. 6
2.2.3白色念珠菌菌液制备 6
2.2.4黑曲霉菌菌液制备 6
2.3供试液的制备 7
2.3.1需氧菌总数、霉菌总数及酵母菌总数计数法
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.3菌种 6
2.1.4样品 6
2.2方法 6
2.2.1试验菌液的制备 6
2.2.2金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌菌液制备.. 6
2.2.3白色念珠菌菌液制备 6
2.2.4黑曲霉菌菌液制备 6
2.3供试液的制备 7
2.3.1需氧菌总数、霉菌总数及酵母菌总数计数法的适用性试验 .7
2.3.1.1试验组 7
2.3.1.2供试液对照组 7
2.3.1.3菌液组 7
2.3.1.4稀释液对照组 8
2.3.1.5阴性对照组 8
2.3.1.6结果判断 9
2.3.2控制菌检验方法的适用性试验 11
2.3.2.1金黄色葡萄球菌 11
2.3.2.2增菌培养 11
2.3.2.3分离培养 12
2.3.2.4结果判断 12
2.3.2.5铜绿假单胞菌 12
2.3.2.6增菌培养 12
2.3.2.7分离培养 12
2.3.2.8氧化酶试验 12
2.3.2.9结果判断 12
3.结果 14
3.1微生物限度检查法的建立 14
3.1.1需氧菌总数、霉菌总数、酵母菌总数计数检查法 14
3.1.2控制菌（金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌）检查法 14
4.讨论 15
参考文献 16
致 谢 18
1 前 言
微生物限度检查法是检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法[1]。检查项目包括需氧菌总数、霉菌总数、酵母菌总数及控制菌检查。
2010版中国药典更新为2015版中国药典中[2]，对微生物限度检查法进行了修订，明确规定进行药品微生物限度检查法，验证目的是确定试验中应选择药典收载的何种供试液制备方法、可以采用何种方法测定以及验证确定的检测系统是否适用于该药品的检验。如果供试品有抑菌性，影响测定结果，则应该采用适当的方法消除供试液的抑菌活性成分后再进行检查。保证所采用方法的科学性和检验结果的准确性。本次依据《中国药典》2015版的1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法[3]。1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法的要求对板蓝根3个批号进行微生物限度检查适用性试验。对该方法进行评价。最后对所得结果进行判断板蓝根颗粒使用该法是否符合药典的规定。
1.1综 述
1.1.1板蓝根简介
板蓝根为十字花科植物菘蓝（Isatis?indigotica?Fort）的干燥根[4]。主产于河北、河南、江苏等地。主要化学成分为吲哚类、喹唑酮类及多糖等，吲哚类化合物有主要有靛蓝、靛玉红，喹唑酮类化合物主要有色胺酮等。
? 板蓝根味苦，性寒，归心、胃经。具有清热解毒、凉血利咽的功效。常用于临床治疗温毒发斑、发热咽痛，痄腮、烂喉丹痧、大头瘟疫、丹毒、痈肿等，对流行性乙型脑炎、流行性腮腺炎、感冒、急慢性肝炎等疾病疗效较好。《日华子本草》:“治天行热毒。”《分类本草》：“解诸毒恶疮，散毒去火，捣汁或服或涂。”《中华本草》：“对温毒时役诸疾，未病可防，已病可治，单用或入复方咸宜。”临床多与玄参、连翘、牛蒡子等配伍，清热解毒治疗大头瘟疫，如普济消毒饮。上述功效的发挥，与板蓝根抗病原微生物、抗毒素、增强免疫等药理作用有关。板蓝根颗粒规格：每袋装5克。用法用量：开水冲服。一次1袋（15克）（含蔗糖），一日3～4次。
1.1.2处方组成和药理作用
处方：主要成分为板蓝根，辅料为蔗糖，糊精。??????????
板蓝根颗粒为棕色或棕褐色的颗粒；味甜，微苦。主要有含糖型和无糖型两种。感冒期间服用板蓝根，有利于增强免疫，杀灭体内病毒和致病菌，有利于康复；流感期间和病毒性疾病期间服用板蓝根，有利于增强抵抗力，避免传染。有清热解毒，凉血利咽功效，用于肺胃热盛所致的咽喉肿痛、口咽干燥；急性扁桃体炎见上述证候者。
药理作用：
1、抗病毒
板蓝根含靛苷，对一些细菌，如枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌等有一定的抑制作用，还有抗病毒作用。可用于流行性腮腺炎、流行性乙型脑炎、传染性肝炎、流行性感冒、单纯性疱疹性口炎、?咽炎以及肺炎等，有预防或治疗作用。
2、清热、退热
板蓝根中的板蓝根有机酸类化学成分，能清除人体内的毒素和过氧化自由基，从而避免了人体体温的不正常升温，能避免发烧?现象的发生，保护机体不受高烧的伤害。
3、生津、清火
板蓝根性寒，味苦，不但可清热解毒，还可祛湿生津、清火、明目、散结、消肿等，可治目赤头痛。许多凉茶即以板蓝根为主要原料。
1.1.3制备工艺
处方：
板蓝根?50g（浓缩浸膏10ml）
糊精?10g
糖粉?30g
乙醇?95%适量
颗粒?50g
工艺：
（1）提取：浸泡30min，煎煮2次，首次45min
1.前 言
1.1综 述 1
1.1.1板蓝根简介 1
1.1.2处方组成和药理作用 2
1.1.3制备工艺 3
2.材料与方法
2.1材料 4
2.1.1仪器与设备 4
2.1.2培养基、稀释剂及试剂 5
2.1.3菌种 6
2.1.4样品 6
2.2方法 6
2.2.1试验菌液的制备 6
2.2.2金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌菌液制备.. 6
2.2.3白色念珠菌菌液制备 6
2.2.4黑曲霉菌菌液制备 6
2.3供试液的制备 7
2.3.1需氧菌总数、霉菌总数及酵母菌总数计数法
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: %3^5`1^9`1^6^0`7^2#
.3菌种 6
2.1.4样品 6
2.2方法 6
2.2.1试验菌液的制备 6
2.2.2金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌菌液制备.. 6
2.2.3白色念珠菌菌液制备 6
2.2.4黑曲霉菌菌液制备 6
2.3供试液的制备 7
2.3.1需氧菌总数、霉菌总数及酵母菌总数计数法的适用性试验 .7
2.3.1.1试验组 7
2.3.1.2供试液对照组 7
2.3.1.3菌液组 7
2.3.1.4稀释液对照组 8
2.3.1.5阴性对照组 8
2.3.1.6结果判断 9
2.3.2控制菌检验方法的适用性试验 11
2.3.2.1金黄色葡萄球菌 11
2.3.2.2增菌培养 11
2.3.2.3分离培养 12
2.3.2.4结果判断 12
2.3.2.5铜绿假单胞菌 12
2.3.2.6增菌培养 12
2.3.2.7分离培养 12
2.3.2.8氧化酶试验 12
2.3.2.9结果判断 12
3.结果 14
3.1微生物限度检查法的建立 14
3.1.1需氧菌总数、霉菌总数、酵母菌总数计数检查法 14
3.1.2控制菌（金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌）检查法 14
4.讨论 15
参考文献 16
致 谢 18
1 前 言
微生物限度检查法是检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法[1]。检查项目包括需氧菌总数、霉菌总数、酵母菌总数及控制菌检查。
2010版中国药典更新为2015版中国药典中[2]，对微生物限度检查法进行了修订，明确规定进行药品微生物限度检查法，验证目的是确定试验中应选择药典收载的何种供试液制备方法、可以采用何种方法测定以及验证确定的检测系统是否适用于该药品的检验。如果供试品有抑菌性，影响测定结果，则应该采用适当的方法消除供试液的抑菌活性成分后再进行检查。保证所采用方法的科学性和检验结果的准确性。本次依据《中国药典》2015版的1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法[3]。1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法的要求对板蓝根3个批号进行微生物限度检查适用性试验。对该方法进行评价。最后对所得结果进行判断板蓝根颗粒使用该法是否符合药典的规定。
1.1综 述
1.1.1板蓝根简介
板蓝根为十字花科植物菘蓝（Isatis?indigotica?Fort）的干燥根[4]。主产于河北、河南、江苏等地。主要化学成分为吲哚类、喹唑酮类及多糖等，吲哚类化合物有主要有靛蓝、靛玉红，喹唑酮类化合物主要有色胺酮等。
? 板蓝根味苦，性寒，归心、胃经。具有清热解毒、凉血利咽的功效。常用于临床治疗温毒发斑、发热咽痛，痄腮、烂喉丹痧、大头瘟疫、丹毒、痈肿等，对流行性乙型脑炎、流行性腮腺炎、感冒、急慢性肝炎等疾病疗效较好。《日华子本草》:“治天行热毒。”《分类本草》：“解诸毒恶疮，散毒去火，捣汁或服或涂。”《中华本草》：“对温毒时役诸疾，未病可防，已病可治，单用或入复方咸宜。”临床多与玄参、连翘、牛蒡子等配伍，清热解毒治疗大头瘟疫，如普济消毒饮。上述功效的发挥，与板蓝根抗病原微生物、抗毒素、增强免疫等药理作用有关。板蓝根颗粒规格：每袋装5克。用法用量：开水冲服。一次1袋（15克）（含蔗糖），一日3～4次。
1.1.2处方组成和药理作用
处方：主要成分为板蓝根，辅料为蔗糖，糊精。??????????
板蓝根颗粒为棕色或棕褐色的颗粒；味甜，微苦。主要有含糖型和无糖型两种。感冒期间服用板蓝根，有利于增强免疫，杀灭体内病毒和致病菌，有利于康复；流感期间和病毒性疾病期间服用板蓝根，有利于增强抵抗力，避免传染。有清热解毒，凉血利咽功效，用于肺胃热盛所致的咽喉肿痛、口咽干燥；急性扁桃体炎见上述证候者。
药理作用：
1、抗病毒
板蓝根含靛苷，对一些细菌，如枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌等有一定的抑制作用，还有抗病毒作用。可用于流行性腮腺炎、流行性乙型脑炎、传染性肝炎、流行性感冒、单纯性疱疹性口炎、?咽炎以及肺炎等，有预防或治疗作用。
2、清热、退热
板蓝根中的板蓝根有机酸类化学成分，能清除人体内的毒素和过氧化自由基，从而避免了人体体温的不正常升温，能避免发烧?现象的发生，保护机体不受高烧的伤害。
3、生津、清火
板蓝根性寒，味苦，不但可清热解毒，还可祛湿生津、清火、明目、散结、消肿等，可治目赤头痛。许多凉茶即以板蓝根为主要原料。
1.1.3制备工艺
处方：
板蓝根?50g（浓缩浸膏10ml）
糊精?10g
糖粉?30g
乙醇?95%适量
颗粒?50g
工艺：
（1）提取：浸泡30min，煎煮2次，首次45min
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