秦皮不同提取部位的制备及其对致腐菌的抑制作用比较
目 录
1 引言 1
1.1 概述 1
1.2 秦皮提取方法 1
1.3 抑菌方法 1
1.4 课题研究内容与目的 2
2 实验方法 2
2.1 实验材料准备 2
2.2 仪器与试剂 2
3 不同部位提取工艺 3
3.1 秦皮纯水提取工艺 3
3.2 秦皮40%乙醇提取工艺 4
3.3 秦皮95%乙醇提取工艺 4
3.4 秦皮正丁醇提取工艺 4
3.5 秦皮氯仿提取工艺 4
3.6 秦皮石油醚提取工艺 4
4 秦皮提取工艺的优化 5
4.1 秦皮纯水提取工艺优化 5
4.2 秦皮40%乙醇提取工艺优化 6
4.3 秦皮95%乙醇提取工艺优化 7
4.4 秦皮正丁醇提取工艺优化 8
4.5 秦皮氯仿提取工艺优化 9
4.6 秦皮石油醚提取工艺优化 10
5 抑菌实验 11
5.1 菌种制备与活化 11
5.2 抑菌实验流程 11
5.3 抑菌作用数据提取 12
6 结果与分析 12
6.1 秦皮不同部位提取最佳条件分析 12
6.2 秦皮不同部位提取物抑菌作用比较结果分析 27
结 论 32
致 谢 33
参 考 文 献 34
1 引言
1.1 概述
秦皮为木犀科植物苦枥白蜡树、白蜡树、尖叶白蜡树或宿柱白蜡树的干燥枝皮或干皮。 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3 5 1 9 1 6 0 7 2
出自《神农本草经》、陶弘景：秦皮，俗云是樊槻皮，而水渍以和墨书，色不脱，微青。且亦殊薄，恐不必耳。俗方惟以疗目。
秦皮的主要成分为马栗树皮素，秦皮素，马栗树皮甙，秦皮甙，东莨菪素等。具有消炎、镇痛、利尿、镇咳、祛痰和平喘等作用。目前，在中药界，秦皮已得到了广泛的应用。从中国古代千年流传的药方经过现代工艺的优化，成就了如今流通市场的千金子饮片，白头翁汤，五皮散，蒙药清热止痛三味散等。临床上主要用于治疗细菌性痢疾、慢性气管、肝热目赤肿痛、目生翳膜等。
目前，对于蔬菜水果保鲜的技术大多集中在短期的保鲜上。例如，刚采摘的蔬菜要保鲜，我们通常都会将它放入冷库中冷藏，即低温冷藏技术。这样可以保证这些蔬菜在食用之前都能保持新鲜。可是，如果要求它能够保存的更久一点，一个月，两个月甚至半年到一年时，低温冷藏技术明显已经没办法满足需要了，我们需要更好的技术来满足这种需求。我将从秦皮着手研究其不同提取部位的制备及其对致腐菌的抑制效果比较。
1.2 秦皮提取方法
秦皮提取跟传统中药提取方法一致，主要是溶剂提取法，渗漉法等。
溶剂提取法即根据中草药中各种成分在溶剂中的溶解性，选用对活性成分溶解度大、对不需要溶出成分溶解度小的溶剂，而将有效成分从药材组织内溶解出来的方法。比如使用纯水对秦皮进行提取，将一定量的纯水与秦皮粗粉混合，在一定温度，压力下提取一定时间并重复一定次数得到提取物。
渗漉法是在药粉在添加浸出溶剂使其渗过药粉，自下部流出浸出液的一种浸出方法。比如使用乙醇提取，将药粉装入特定的容器中，让乙醇自上而下渗入流过该药粉，并从下端流出得到含有提取物的溶液。
1.3 抑菌方法
抑菌方法主要有两种，分别为牛津杯法和滤纸片法。
牛津杯法是将已灭菌的琼脂培养基加热到完全融化，倒在培养皿 内，每皿15 mL，待其凝固。此外，将融化的培养基 冷却到50 ℃左右混入试验菌，将混有菌的培养基5 ml加到已凝固的培养基上待凝固。再以无菌操作 在培养基表面直接垂直放上牛津杯，轻轻加压，使其与培养基接触无空隙，在杯中加入待检样品200 μL。置于30℃恒温培养箱恒温培养，观察得出结果。抑菌作用效果的评定以平行试验相同条件下各浓度使用牛津杯法在相同时间的抑菌圈大小作为依据。
滤纸片法是在超净工作台上，将灭菌滤纸片用无菌镊子放入到含药液的灭菌培养皿中浸泡。用无菌镊子以无菌操作夹取含药滤纸片，将多余药液在内培养皿边上擦掉，贴在含菌平板培养基表面，轻轻按压，使药片与培养基间无空隙。置于30℃恒温培养箱恒温培养，观察得出结果。抑菌作用效果的评定以平行试验相同条件下各浓度使用滤纸片法在相同时间的抑菌圈大小作为依据。
1.4 课题研究内容与目的
我将采用不同极性的溶剂对秦皮进行不同提取部位的制备，以最终产物得率为指标，利用单因素实验与正交实验相结合的方式对秦皮的提取工艺进行优化，进而确定最佳工艺参数。另外，利用牛津杯法，以抑菌圈大小作为指标确定秦皮各部位提取物的抑菌活性大小。最终获得秦皮抑菌活性最强的提取部位及其最佳提取工艺。
2 实验方法
2.1 实验材料准备
2.1.1 实验药材准备
从安徽省安庆市国信大药房购置，原产地：浙江。经粉碎机粉碎，过60目筛，备用。
2.1.2 菌种及培养基
本着实验可行性和方便操作的原则，我们选取现实生活中能够方便获取的致腐菌作为实验菌种。
实验菌种：灰霉菌。
我们选择土豆作为营养源的培养基进行实验。将土豆去皮，切块煮沸并与蔗糖，琼脂粉按10:1:1比例进行配制。
实验培养基：土豆培养基营养液：蔗糖：琼脂粉=10:1:1
2.2 仪器与试剂
本次实验所需要使用的仪器的生产厂家及型号见表1，相关试剂的生产厂家，生产批号等信息见表2：
表1 实验所用仪器
名称 规格 生产厂家
秦皮 浙江
石油醚 AR 上海久亿化学试剂有限公司
三氯甲烷 AR 南京奥佳化工有限公司
m1为总质量；
m0为烧杯质量；
M1为粗粉质量。
4.1 秦皮纯水提取工艺优化
4.1.1 单因素实验
4.1.1.2 考察料液比
精密称取100 g秦皮粗粉，置于2000 mL三口烧瓶中，设置料液比分别为1:8、1:10、1:12、1:14、1:16五个水平，在以上提取时间单因素实验得出的最佳提取时间条件下按提取次数3进行，提取完毕后依据公式（1）计算得出最终结果。
1 引言 1
1.1 概述 1
1.2 秦皮提取方法 1
1.3 抑菌方法 1
1.4 课题研究内容与目的 2
2 实验方法 2
2.1 实验材料准备 2
2.2 仪器与试剂 2
3 不同部位提取工艺 3
3.1 秦皮纯水提取工艺 3
3.2 秦皮40%乙醇提取工艺 4
3.3 秦皮95%乙醇提取工艺 4
3.4 秦皮正丁醇提取工艺 4
3.5 秦皮氯仿提取工艺 4
3.6 秦皮石油醚提取工艺 4
4 秦皮提取工艺的优化 5
4.1 秦皮纯水提取工艺优化 5
4.2 秦皮40%乙醇提取工艺优化 6
4.3 秦皮95%乙醇提取工艺优化 7
4.4 秦皮正丁醇提取工艺优化 8
4.5 秦皮氯仿提取工艺优化 9
4.6 秦皮石油醚提取工艺优化 10
5 抑菌实验 11
5.1 菌种制备与活化 11
5.2 抑菌实验流程 11
5.3 抑菌作用数据提取 12
6 结果与分析 12
6.1 秦皮不同部位提取最佳条件分析 12
6.2 秦皮不同部位提取物抑菌作用比较结果分析 27
结 论 32
致 谢 33
参 考 文 献 34
1 引言
1.1 概述
秦皮为木犀科植物苦枥白蜡树、白蜡树、尖叶白蜡树或宿柱白蜡树的干燥枝皮或干皮。 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3 5 1 9 1 6 0 7 2
出自《神农本草经》、陶弘景：秦皮，俗云是樊槻皮，而水渍以和墨书，色不脱，微青。且亦殊薄，恐不必耳。俗方惟以疗目。
秦皮的主要成分为马栗树皮素，秦皮素，马栗树皮甙，秦皮甙，东莨菪素等。具有消炎、镇痛、利尿、镇咳、祛痰和平喘等作用。目前，在中药界，秦皮已得到了广泛的应用。从中国古代千年流传的药方经过现代工艺的优化，成就了如今流通市场的千金子饮片，白头翁汤，五皮散，蒙药清热止痛三味散等。临床上主要用于治疗细菌性痢疾、慢性气管、肝热目赤肿痛、目生翳膜等。
目前，对于蔬菜水果保鲜的技术大多集中在短期的保鲜上。例如，刚采摘的蔬菜要保鲜，我们通常都会将它放入冷库中冷藏，即低温冷藏技术。这样可以保证这些蔬菜在食用之前都能保持新鲜。可是，如果要求它能够保存的更久一点，一个月，两个月甚至半年到一年时，低温冷藏技术明显已经没办法满足需要了，我们需要更好的技术来满足这种需求。我将从秦皮着手研究其不同提取部位的制备及其对致腐菌的抑制效果比较。
1.2 秦皮提取方法
秦皮提取跟传统中药提取方法一致，主要是溶剂提取法，渗漉法等。
溶剂提取法即根据中草药中各种成分在溶剂中的溶解性，选用对活性成分溶解度大、对不需要溶出成分溶解度小的溶剂，而将有效成分从药材组织内溶解出来的方法。比如使用纯水对秦皮进行提取，将一定量的纯水与秦皮粗粉混合，在一定温度，压力下提取一定时间并重复一定次数得到提取物。
渗漉法是在药粉在添加浸出溶剂使其渗过药粉，自下部流出浸出液的一种浸出方法。比如使用乙醇提取，将药粉装入特定的容器中，让乙醇自上而下渗入流过该药粉，并从下端流出得到含有提取物的溶液。
1.3 抑菌方法
抑菌方法主要有两种，分别为牛津杯法和滤纸片法。
牛津杯法是将已灭菌的琼脂培养基
滤纸片法是在超净工作台上，将灭菌滤纸片用无菌镊子放入到含药液的灭菌培养皿中浸泡。用无菌镊子以无菌操作夹取含药滤纸片，将多余药液在内培养皿边上擦掉，贴在含菌平板培养基表面，轻轻按压，使药片与培养基间无空隙。置于30℃恒温培养箱恒温培养，观察得出结果。抑菌作用效果的评定以平行试验相同条件下各浓度使用滤纸片法在相同时间的抑菌圈大小作为依据。
1.4 课题研究内容与目的
我将采用不同极性的溶剂对秦皮进行不同提取部位的制备，以最终产物得率为指标，利用单因素实验与正交实验相结合的方式对秦皮的提取工艺进行优化，进而确定最佳工艺参数。另外，利用牛津杯法，以抑菌圈大小作为指标确定秦皮各部位提取物的抑菌活性大小。最终获得秦皮抑菌活性最强的提取部位及其最佳提取工艺。
2 实验方法
2.1 实验材料准备
2.1.1 实验药材准备
从安徽省安庆市国信大药房购置，原产地：浙江。经粉碎机粉碎，过60目筛，备用。
2.1.2 菌种及培养基
本着实验可行性和方便操作的原则，我们选取现实生活中能够方便获取的致腐菌作为实验菌种。
实验菌种：灰霉菌。
我们选择土豆作为营养源的培养基进行实验。将土豆去皮，切块煮沸并与蔗糖，琼脂粉按10:1:1比例进行配制。
实验培养基：土豆培养基营养液：蔗糖：琼脂粉=10:1:1
2.2 仪器与试剂
本次实验所需要使用的仪器的生产厂家及型号见表1，相关试剂的生产厂家，生产批号等信息见表2：
表1 实验所用仪器
名称 规格 生产厂家
秦皮 浙江
石油醚 AR 上海久亿化学试剂有限公司
三氯甲烷 AR 南京奥佳化工有限公司
m1为总质量；
m0为烧杯质量；
M1为粗粉质量。
4.1 秦皮纯水提取工艺优化
4.1.1 单因素实验
4.1.1.2 考察料液比
精密称取100 g秦皮粗粉，置于2000 mL三口烧瓶中，设置料液比分别为1:8、1:10、1:12、1:14、1:16五个水平，在以上提取时间单因素实验得出的最佳提取时间条件下按提取次数3进行，提取完毕后依据公式（1）计算得出最终结果。
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