体外消化蚕蛹蛋白对小鼠脾淋巴细胞转化体外消化蚕蛹蛋白对小鼠脾淋巴细胞转化的影响(附件)【字数：7715】
1探究蚕蛹蛋白多肽对于小鼠免疫功能的影响，利用体外消化所得蚕蛹蛋白多肽，配制成不同浓度梯度的培养液（200ug/ml，20ug/ml，2ug/ml，0.2ug/ml），用于体外培养小鼠原代脾细胞，加入刀豆蛋白（ConA）刺激淋巴细胞转化，利用3H-胸腺嘧啶核苷酸(3H-TDR）标记和液体闪烁计数的方法，通过检测3H放射活度来判定淋巴细胞转化率，从而探究免疫功能的变化情况，从而为蚕蛹蛋白在动物医药保健方面的应用提供参考。结果显示加入0.2ug/ml体外消化蚕蛹蛋白的组淋巴细胞的转化率较高，因此一定剂量的蚕蛹蛋白多肽在一定程度上可以提高小鼠的免疫功能。
目 录
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1材料 2
1.1.1实验动物 2
1.1.2试剂 2
1.1.3仪器 2
1.2方法2
1.2.1蚕蛹蛋白脱脂及体外消化2
1.2.1.1蚕蛹蛋白脱脂方法2
1.2.1.2蚕蛹蛋白粉体外消化2
1.2.2小鼠脾细胞淋巴细胞转化率的测定3
1.2.2.1相关溶液的配制3
1.2.2.2小鼠原代脾细胞的制备3
1.2.2.33HTDR掺入法测定小鼠脾淋巴细胞转化率3
1.2.2.4细胞收集及放射性同位素（3H）测定3
1.2.3数据分析处理4
2结果与分析4
2.1蚕蛹蛋白提取效率4
2.2各组样品检测结果4
2.3刀豆蛋白A（ConA）对脾淋巴细胞转化的影响4
2.4体外消化蚕蛹蛋白对脾淋巴细胞转化的影响5
2.5体外消化蚕蛹蛋白与乳清蛋白对脾淋巴细胞转化的影响5
3 讨论5
致谢7
参考文献7
体外消化蚕蛹蛋白对小鼠脾淋巴细胞转化的影响
动物医学专业学生 叶凡
指导教师 杨平
Effects of Vitro Digestion Silkworm Chrysalis on the Splen *好棒文|www.hbsrm.com +Q: &351916072&
ic Lymphocyte Transformation in Mice
Student majoring in Veterinary Medicine YeFan
Tutor YangPing
Abstract：To explore the effects of silkworm chrysalis polypeptide on immune function in mice, using vitro digestion from silkworm chrysalis protein peptide, made into different concentration gradient of culture (200 ug/ml, 20 ug/ml, 2 ug/ml, 0.2 ug/ml), used for vitro culturing primary spleen cells in mice, adding sword bean protein (ConA) stimulate lymphocyte transformation, using 3HTDR tag and liquid scintillation counting method, through testing the 3HTDR radiation quantity to determine the lymphocyte conversion rate, thus to explore the changes of immune function, for the application of silkworm chrysalis protein in animal medical care to provide the reference. The results show that the group of adding 0.2ug/ml silkworm chrysalis protein lymphocyte conversion rate is higher, so the silkworm chrysalis protein peptide can improve the immune function of mice to a certain extent.
Key words: silkworm chrysalis; polypeptide; immune; isotope
蚕蛹(Silkworm pupa)为蚕蛾科昆虫家蚕蛾(Bombyx moilL)的蛹，既是一种高营养的美食，也是一种中药，具有和脾胃、祛风湿、长阳气之功效[1]，自古以来就得到广泛应用。李时珍在《本草纲目》中指出：蚕蛹味辛、性平、无毒，人食可强身健身，入药可医多病，能补气养血、强腰壮肾、滋肺润肠[2]。现代科学试验证明，蚕蛹中含有丰富的蛋白质，占干蛹质量的 45%50%，蚕蛹蛋白的分子量为（75375）kDa，主要为优质球蛋白，含有人体必需的 8 种氨基酸，符合世界卫生组织的理想蛋白质模式[3]。并且大量科学研究发现，蚕蛹蛋白在缓解动物机体运动性疲劳，提高动物免疫力，对抗肿瘤等方面有着积极的作用，在医疗保健方面受到青睐。另外蚕蛹蛋白多肽更是具有降低胆固醇，降血压，提高免疫力等积极作用，所以制备低分子多肽或氨基酸系列产品是开发蚕蛹资源最有效的途径之一，这些多肽或氨基酸具有多种生理功能，特别是小分子寡肽的吸收速度比游离氨基酸更快[4]。因此，对于蚕蛹蛋白及多肽的研究具有一定的积极意义，对于动物饲料以及保健品的开发提供新的物质来源。
脾脏是重要的中枢淋巴样器官，其实质由红髓和白髓构成，具有造血和血液过滤功能，也是淋巴细胞迁移和接受抗原刺激后发生免疫应答、产生免疫效应分子的重要场所［5］。体外培养脾细胞具有在体内脾细胞结构和功能上的某些特点，不受神经、体液因素的调节，可利用此模型方法直接观察各种外源性因素对脾细胞的生物学作用。体外脾细胞模型已广泛应用于病理生理、药理及毒理学等方面的研究[67]。因此脾细胞是理想的体外模拟研究动物免疫功能变化的载体。
刀豆球蛋白A（ConA），作为一种植物血凝素，具有强力的促有丝分裂作用，有较好的促淋巴细胞转化反应作用，对调节机体免疫反应具有重要作用。淋巴细胞转化和分化是机体免疫应答的一个重要阶段。因此，检测淋巴细胞转化水平是细胞免疫研究和临床免疫功能检测的一种常用方法。刀豆蛋白（ConA蛋白）刺激后，淋巴细胞可转化为淋巴母细胞，这种转化在一定程度上代表着机体的细胞免疫功能状态，此时细胞合成DNA量倍增。TDR（胸腺嘧啶核苷酸）是DNA的特殊前体，此时在培养液中加3HTDR，细胞合成的DNA越多，则所掺入的3HTDR就越多，因此，检测掺入3HTDR的量就可以反映细胞增殖的程度。液体闪烁计数是利用盛于容器中的闪烁液将射线能量转为荧光光子，再经光能转换器件转为电信号进行射线量或能量的测量仪器，它目前用以测量低能核素（3H、14C、35S）的主要手段。
目 录
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1材料 2
1.1.1实验动物 2
1.1.2试剂 2
1.1.3仪器 2
1.2方法2
1.2.1蚕蛹蛋白脱脂及体外消化2
1.2.1.1蚕蛹蛋白脱脂方法2
1.2.1.2蚕蛹蛋白粉体外消化2
1.2.2小鼠脾细胞淋巴细胞转化率的测定3
1.2.2.1相关溶液的配制3
1.2.2.2小鼠原代脾细胞的制备3
1.2.2.33HTDR掺入法测定小鼠脾淋巴细胞转化率3
1.2.2.4细胞收集及放射性同位素（3H）测定3
1.2.3数据分析处理4
2结果与分析4
2.1蚕蛹蛋白提取效率4
2.2各组样品检测结果4
2.3刀豆蛋白A（ConA）对脾淋巴细胞转化的影响4
2.4体外消化蚕蛹蛋白对脾淋巴细胞转化的影响5
2.5体外消化蚕蛹蛋白与乳清蛋白对脾淋巴细胞转化的影响5
3 讨论5
致谢7
参考文献7
体外消化蚕蛹蛋白对小鼠脾淋巴细胞转化的影响
动物医学专业学生 叶凡
指导教师 杨平
Effects of Vitro Digestion Silkworm Chrysalis on the Splen *好棒文|www.hbsrm.com +Q: &351916072&
ic Lymphocyte Transformation in Mice
Student majoring in Veterinary Medicine YeFan
Tutor YangPing
Abstract：To explore the effects of silkworm chrysalis polypeptide on immune function in mice, using vitro digestion from silkworm chrysalis protein peptide, made into different concentration gradient of culture (200 ug/ml, 20 ug/ml, 2 ug/ml, 0.2 ug/ml), used for vitro culturing primary spleen cells in mice, adding sword bean protein (ConA) stimulate lymphocyte transformation, using 3HTDR tag and liquid scintillation counting method, through testing the 3HTDR radiation quantity to determine the lymphocyte conversion rate, thus to explore the changes of immune function, for the application of silkworm chrysalis protein in animal medical care to provide the reference. The results show that the group of adding 0.2ug/ml silkworm chrysalis protein lymphocyte conversion rate is higher, so the silkworm chrysalis protein peptide can improve the immune function of mice to a certain extent.
Key words: silkworm chrysalis; polypeptide; immune; isotope
蚕蛹(Silkworm pupa)为蚕蛾科昆虫家蚕蛾(Bombyx moilL)的蛹，既是一种高营养的美食，也是一种中药，具有和脾胃、祛风湿、长阳气之功效[1]，自古以来就得到广泛应用。李时珍在《本草纲目》中指出：蚕蛹味辛、性平、无毒，人食可强身健身，入药可医多病，能补气养血、强腰壮肾、滋肺润肠[2]。现代科学试验证明，蚕蛹中含有丰富的蛋白质，占干蛹质量的 45%50%，蚕蛹蛋白的分子量为（75375）kDa，主要为优质球蛋白，含有人体必需的 8 种氨基酸，符合世界卫生组织的理想蛋白质模式[3]。并且大量科学研究发现，蚕蛹蛋白在缓解动物机体运动性疲劳，提高动物免疫力，对抗肿瘤等方面有着积极的作用，在医疗保健方面受到青睐。另外蚕蛹蛋白多肽更是具有降低胆固醇，降血压，提高免疫力等积极作用，所以制备低分子多肽或氨基酸系列产品是开发蚕蛹资源最有效的途径之一，这些多肽或氨基酸具有多种生理功能，特别是小分子寡肽的吸收速度比游离氨基酸更快[4]。因此，对于蚕蛹蛋白及多肽的研究具有一定的积极意义，对于动物饲料以及保健品的开发提供新的物质来源。
脾脏是重要的中枢淋巴样器官，其实质由红髓和白髓构成，具有造血和血液过滤功能，也是淋巴细胞迁移和接受抗原刺激后发生免疫应答、产生免疫效应分子的重要场所［5］。体外培养脾细胞具有在体内脾细胞结构和功能上的某些特点，不受神经、体液因素的调节，可利用此模型方法直接观察各种外源性因素对脾细胞的生物学作用。体外脾细胞模型已广泛应用于病理生理、药理及毒理学等方面的研究[67]。因此脾细胞是理想的体外模拟研究动物免疫功能变化的载体。
刀豆球蛋白A（ConA），作为一种植物血凝素，具有强力的促有丝分裂作用，有较好的促淋巴细胞转化反应作用，对调节机体免疫反应具有重要作用。淋巴细胞转化和分化是机体免疫应答的一个重要阶段。因此，检测淋巴细胞转化水平是细胞免疫研究和临床免疫功能检测的一种常用方法。刀豆蛋白（ConA蛋白）刺激后，淋巴细胞可转化为淋巴母细胞，这种转化在一定程度上代表着机体的细胞免疫功能状态，此时细胞合成DNA量倍增。TDR（胸腺嘧啶核苷酸）是DNA的特殊前体，此时在培养液中加3HTDR，细胞合成的DNA越多，则所掺入的3HTDR就越多，因此，检测掺入3HTDR的量就可以反映细胞增殖的程度。液体闪烁计数是利用盛于容器中的闪烁液将射线能量转为荧光光子，再经光能转换器件转为电信号进行射线量或能量的测量仪器，它目前用以测量低能核素（3H、14C、35S）的主要手段。
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