饲料中添加海藻粉对湖羊肌肉脂肪酸组成及其相关代谢基因表达的影响
[目的]本试验旨在通过在湖羊饲料中添加海藻粉，研究其对湖羊肌肉脂肪酸组成及脂代谢相关基因表达的影响。[方法]通过在湖羊饲料中添加5%的海藻粉饲喂70 d后，屠宰并采集湖羊背最长肌组织样，利用气相色谱仪分析法对背最长肌脂肪酸组成进行检测，并用RT-PCR的方法对背最长肌脂代谢相关基因 （PPARα、PPARγ、SREBP1、FADS1、FADS2、ELOVL2、ELOVL5、FASN、SCD、H-FABP）表达量进行检测。 [结果] 在湖羊饲料中添加5%的海藻粉均可显著增加背最长肌中n-3 多不饱和脂肪酸（polyunsaturated fatty acids, PUFAs）的含量，显著降低湖羊背最长肌饱和脂肪酸（saturated fatty acid, SFAs）、单不饱和脂肪酸 (monounsaturated fatty acids, MUFAs)和n-6 PUFAs的含量及n-6/n-3的比值（P＜0.05）；在饲料中添加5%的海藻粉增加了PPARα、PPARγ、FADS1、FADS2、ELOVL2、SCD、H-FABP基因的表达量，降低了SREPB1、ELOVL5、FASD基因的表达水平。[结论]通过研究发现海藻粉显著增加了湖羊背最长肌中n-3 PUFAs的含量（P＜0.05），且对脂代谢相关基因的表达产生一定影响，为生产富含不饱和脂肪的高品质羊肉提供理论依据。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words: 1
引言 1
1材料与方法 2
1.1试验材料 2
1.1.1试验动物 2
1.1.2试验仪器及设备 2
1.1.3试验试剂 2
1.2试验设计 2
1.3湖羊肌肉脂肪酸组成的测定 3
1.3.1湖羊背最长肌中脂质的提取 3
1.3.2湖羊背最长肌中脂肪酸组成的测定 3
1.4湖羊肌肉脂代谢相关基因表达量的测定 3
1.4.1湖羊背最长肌中总RNA的提取及检测 3
1.4.1.1 RNA的提取 3
1.4.1.2 RNA浓度及纯度的检测 4
1.4.2反转 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
录 4
1.4.3 PCR引物的设计与合成 4
1.4.4荧光定量PCR检测 5
2结果与分析 5
2.1海藻粉对湖羊肌肉脂肪酸组成的影响 5
2.2海藻粉对湖羊肌肉脂代谢相关基因表达水平的影响 6
3讨论 8
3.1海藻粉对湖羊肌肉脂肪酸组成的影响 8
3.2海藻粉对湖羊肌肉脂代谢相关基因表达水平的影响 8
致谢 10
参考文献 11
饲料中添加海藻粉对湖羊肌肉脂肪酸组成
及其相关代谢基因表达的影响
动物科学 曾涵芳
引言
引言
由于人民生活水平的提高以及自身保健意识的增强，人们对羊肉的需求量逐年增加，肉羊产业已成为世界畜牧业发展的重要组成部分。膳食中脂肪酸的组成与人类健康密切相关，过量摄入脂肪有损人体健康，食物中的饱和脂肪酸（saturated fatty acid, SFAs）含量高可增加人类血液脂蛋白中胆固醇的含量，致使人体易患各种心血管疾病，而多不饱和脂肪酸（polyunsaturated fatty acids, PUFAs）则有降低这种风险的作用，特别是ω3系列PUFAs，不仅可以起到软化血管降低心脏病发生的作用，而且还对一些肿瘤细胞的生长具有抑制作用。在研究通过改变饲料组成来改善动物生长及肉质品质的热潮中，因海藻粉中富含ω3 PUFAs，目前，在奶牛、猪、鸡、鱼虾等饲料中添加不同比例海藻粉均可提高生长速度，改善肉品质，提高饲料转化率，但是，在肉羊育肥中尚未尝试。因此，本试验在湖羊日粮中添加5%海藻粉，探索其对湖羊肌肉中PUFAs含量的影响，以及脂肪酸代谢相关基因表达的影响，为生产高品质羊肉奠定基础。
1材料与方法
1.1试验材料
1.1.1试验动物
选取三月龄、体重接近（18.35±1.39?kg）、健康状况良好的湖羊公羔40只
1.1.2试验仪器及设备
荧光定量PCR仪器（StepOne plus，ABI公司）
PCR扩增仪（美国Biorad公司）
掌上离心机：江苏省海门其林贝尔仪器制造有限公司
电泳仪：南京科宝仪器研究所
凝胶电泳成像系统：上海培清科技有限公司
生物分光光度计：Thermo，NANO DROP ND1000
格兰仕微波炉：Galanz，P7021TP6
八联管：ABI公司
1.1.3试验试剂
Trizol试剂（Invitrogen 公司）
普通PCR试剂盒（2×Taq PCR Master Mix，南京博尔迪）
反转录试剂盒（TaKaRa; No. RR047A）
荧光定量试剂盒（TaKaRa; No.DRR820A）
琼脂糖（南京寿德试剂公司）
1.2试验设计
选取三月龄、体重接近（18.35±1.39?kg）、健康状况良好的湖羊公羔40只，根据体重随机分成4个组：对照组1（C1），对照组1+5%海藻粉（C1+Algae），对照组2（C2），对照组2+5%海藻粉（C2+Algae）。试验对照组日粮参照国内肉羊饲养标准（NY/T8162004）日增重150?g/d的营养需要配制。整个试验周期为70?d，其中预饲期为10?d，正式期60?d。试验前清洗并消毒羊舍，并对羊统一驱虫、健胃，自由采食，每天饲喂两次（07:00、16:00左右进行），自由饮水，环境条件适宜。试验结束后对所有羊只进行屠宰，采集背最长肌组织样，分别利用气相色谱仪分析法和RTPCR的方法对背最长肌组织样进行脂肪酸组成检测和相关基因mRNA表达量的检测。
图1. 试验设计示意图
Figure 1.Schematic representation of the experiment design
1.3湖羊肌肉脂肪酸组成的测定
1.3.1湖羊背最长肌中脂质的提取
分别准确称取冻干且磨碎后的背最长肌0.3 g，加入到25 mL带螺口的消化管底部，加入4 mL氯乙酰—甲醇(甲醇与氯乙酰体积比为10: 1) 和5 mL含1 mg/mL C19:0内标(No.74208, SigmaAldrich Inc., St. Louis, MO, USA)的正己烷溶液，震荡1 min后，80℃水浴2 h，室温冷却后，再加入4 mL 7% (w/v)的K2CO3，漩涡混匀，静置10 min, 1500 r/min离心5 min，移取上清液。
1.3.2湖羊背最长肌中脂肪酸组成的测定
测定采用HP 6890 ( HewlettPackard, Avondale, PA, USA)型高效气相色谱仪，分析样品中脂肪酸组成。混合标准品购自美国Sigma公司，毛细管柱为CPSil 88 (100mX0.25mmX0.25μm)，进样后温度于180℃保持45 min，然后以10℃/min的速度上升至215℃，保持17 min，进样口温度和火焰离子探测器温度均为250℃，分流比为40:1，以高纯氦气为载气。
1.4湖羊肌肉脂代谢相关基因表达量的测定
1.4.1湖羊背最长肌中总RNA的提取及检测
1.4.1.1 RNA的提取
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words: 1
引言 1
1材料与方法 2
1.1试验材料 2
1.1.1试验动物 2
1.1.2试验仪器及设备 2
1.1.3试验试剂 2
1.2试验设计 2
1.3湖羊肌肉脂肪酸组成的测定 3
1.3.1湖羊背最长肌中脂质的提取 3
1.3.2湖羊背最长肌中脂肪酸组成的测定 3
1.4湖羊肌肉脂代谢相关基因表达量的测定 3
1.4.1湖羊背最长肌中总RNA的提取及检测 3
1.4.1.1 RNA的提取 3
1.4.1.2 RNA浓度及纯度的检测 4
1.4.2反转 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
录 4
1.4.3 PCR引物的设计与合成 4
1.4.4荧光定量PCR检测 5
2结果与分析 5
2.1海藻粉对湖羊肌肉脂肪酸组成的影响 5
2.2海藻粉对湖羊肌肉脂代谢相关基因表达水平的影响 6
3讨论 8
3.1海藻粉对湖羊肌肉脂肪酸组成的影响 8
3.2海藻粉对湖羊肌肉脂代谢相关基因表达水平的影响 8
致谢 10
参考文献 11
饲料中添加海藻粉对湖羊肌肉脂肪酸组成
及其相关代谢基因表达的影响
动物科学 曾涵芳
引言
引言
由于人民生活水平的提高以及自身保健意识的增强，人们对羊肉的需求量逐年增加，肉羊产业已成为世界畜牧业发展的重要组成部分。膳食中脂肪酸的组成与人类健康密切相关，过量摄入脂肪有损人体健康，食物中的饱和脂肪酸（saturated fatty acid, SFAs）含量高可增加人类血液脂蛋白中胆固醇的含量，致使人体易患各种心血管疾病，而多不饱和脂肪酸（polyunsaturated fatty acids, PUFAs）则有降低这种风险的作用，特别是ω3系列PUFAs，不仅可以起到软化血管降低心脏病发生的作用，而且还对一些肿瘤细胞的生长具有抑制作用。在研究通过改变饲料组成来改善动物生长及肉质品质的热潮中，因海藻粉中富含ω3 PUFAs，目前，在奶牛、猪、鸡、鱼虾等饲料中添加不同比例海藻粉均可提高生长速度，改善肉品质，提高饲料转化率，但是，在肉羊育肥中尚未尝试。因此，本试验在湖羊日粮中添加5%海藻粉，探索其对湖羊肌肉中PUFAs含量的影响，以及脂肪酸代谢相关基因表达的影响，为生产高品质羊肉奠定基础。
1材料与方法
1.1试验材料
1.1.1试验动物
选取三月龄、体重接近（18.35±1.39?kg）、健康状况良好的湖羊公羔40只
1.1.2试验仪器及设备
荧光定量PCR仪器（StepOne plus，ABI公司）
PCR扩增仪（美国Biorad公司）
掌上离心机：江苏省海门其林贝尔仪器制造有限公司
电泳仪：南京科宝仪器研究所
凝胶电泳成像系统：上海培清科技有限公司
生物分光光度计：Thermo，NANO DROP ND1000
格兰仕微波炉：Galanz，P7021TP6
八联管：ABI公司
1.1.3试验试剂
Trizol试剂（Invitrogen 公司）
普通PCR试剂盒（2×Taq PCR Master Mix，南京博尔迪）
反转录试剂盒（TaKaRa; No. RR047A）
荧光定量试剂盒（TaKaRa; No.DRR820A）
琼脂糖（南京寿德试剂公司）
1.2试验设计
选取三月龄、体重接近（18.35±1.39?kg）、健康状况良好的湖羊公羔40只，根据体重随机分成4个组：对照组1（C1），对照组1+5%海藻粉（C1+Algae），对照组2（C2），对照组2+5%海藻粉（C2+Algae）。试验对照组日粮参照国内肉羊饲养标准（NY/T8162004）日增重150?g/d的营养需要配制。整个试验周期为70?d，其中预饲期为10?d，正式期60?d。试验前清洗并消毒羊舍，并对羊统一驱虫、健胃，自由采食，每天饲喂两次（07:00、16:00左右进行），自由饮水，环境条件适宜。试验结束后对所有羊只进行屠宰，采集背最长肌组织样，分别利用气相色谱仪分析法和RTPCR的方法对背最长肌组织样进行脂肪酸组成检测和相关基因mRNA表达量的检测。
图1. 试验设计示意图
Figure 1.Schematic representation of the experiment design
1.3湖羊肌肉脂肪酸组成的测定
1.3.1湖羊背最长肌中脂质的提取
分别准确称取冻干且磨碎后的背最长肌0.3 g，加入到25 mL带螺口的消化管底部，加入4 mL氯乙酰—甲醇(甲醇与氯乙酰体积比为10: 1) 和5 mL含1 mg/mL C19:0内标(No.74208, SigmaAldrich Inc., St. Louis, MO, USA)的正己烷溶液，震荡1 min后，80℃水浴2 h，室温冷却后，再加入4 mL 7% (w/v)的K2CO3，漩涡混匀，静置10 min, 1500 r/min离心5 min，移取上清液。
1.3.2湖羊背最长肌中脂肪酸组成的测定
测定采用HP 6890 ( HewlettPackard, Avondale, PA, USA)型高效气相色谱仪，分析样品中脂肪酸组成。混合标准品购自美国Sigma公司，毛细管柱为CPSil 88 (100mX0.25mmX0.25μm)，进样后温度于180℃保持45 min，然后以10℃/min的速度上升至215℃，保持17 min，进样口温度和火焰离子探测器温度均为250℃，分流比为40:1，以高纯氦气为载气。
1.4湖羊肌肉脂代谢相关基因表达量的测定
1.4.1湖羊背最长肌中总RNA的提取及检测
1.4.1.1 RNA的提取
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