猪瘟兔化弱毒疫苗耐热冻干保护剂配方的筛选
猪瘟兔化弱毒疫苗耐热冻干保护剂配方的筛选[20200507190945]
摘要：目的：初步筛选出1～2个对猪瘟兔化弱毒疫苗保护作用良好，能在2～8℃保存12～24个月的耐热冻干保护剂配方。方法：在已有耐热冻干保护剂基础方S3的基础上，单因素调配基础方中不同物质（EDTA、L-Glu、BSA、NZA）的质量分数得到9个新配方，筛选出理想的耐热保护剂。结果：新配方S3-E2和S3-T1 的冻干疫苗的物理性状良好，疏松未变形，S3-E2和S3-T1配方的冻干疫苗37℃ 10d加速耐老化后病毒效价分别下降：大于一个滴度和在0.6～1.0之间。结论：在9个新配方中，只有S3-T1合格，新配方S3-T1有待进一步优化。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
关键字:猪瘟兔化弱毒疫苗；冻干；耐热保护剂
目录
摘要.....3
关键词.....3
Abstract...3
Key words...3
引言.............3
1 材料与设备.........4
2 方 法.......................................................................................................................................4
2．1 耐热冻干保护剂的单因素的预选.....................................................................................4
2.1.1 耐热冻干保护剂配方的设计.........................................................................................4 2.1.2 耐热保护剂的配制.....5
2.2 冷冻干燥.5 2.2.1 冻干样品外观形态观察及初步筛选.............................................................................5
2.2.2 冻干样品残余水分测定.........................................5 2.2.3 冻干样品37℃ 10d加速耐老化试验.................................................................... *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
....... 5
3 结 果...................6
3.1 冻干样品外观形态观察及初步筛选.................................................................................6
3.2 冻干样品残余水分测定.............................................7
3.3 冻干样品37℃ 10d加速耐老化试验................................................................................7
4 讨论与分析...........................................................................................................................10
4．1 结果分析............................................................................................................................10
4．2 本试验的优化...................................................................................................................11
致谢...........................................................................................................................................11
参考文献...........11
猪瘟兔化弱毒疫苗耐热冻干保护剂配方的筛选
引言
猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起猪的一种急性、热性、高度接触性和致死性的传染病，给养猪业造成重大损失[1]。1954年周泰冲等用猪瘟强毒经家兔传代减毒, 经继代纯化成功培育出一株能适应家兔的猪瘟病毒变异毒[2]。该毒株具有对猪无致病性、遗传性能稳定、具有良好的免疫原性等优点[3]，这就是国内外广泛使用的中国猪瘟兔化弱毒株（Chinese strain, 简称“C“ 株）。目前中国广泛使用 C 株来生产猪瘟活疫苗[4]。我国在1956年开始推广猪瘟兔化弱毒疫苗，最初提倡就地制苗，就地使用[5]。随着真空冷冻干燥疫苗的成功研制，集中生产，统一供应，制成的猪瘟冻干苗具有便于保存的优点，并成为我国防制猪瘟的重要防疫工具[6，7]。发达国家在20世纪80年代就已开始进行耐热保护剂的研究，目前国外进口活疫苗多采用耐热冻干保护剂，其活疫苗冻干制品在2～8℃条件下保存期为12～36个月，我国对耐热冻干保护剂的研究起步较晚，但近来十分活跃。近几年，我国在耐热保护剂活疫苗的开发上取得了一些成绩，研制成功的耐热冻干活疫苗可在2～8℃保质24个月。张云浦等[8]完成了 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
鸡传染性法氏囊，鸡传染性支气管炎，鸡传染性喉气管炎，鸡痘等多种冻干活疫苗的耐热保护剂所配制的动物疫苗，在2～8℃条件保存2年以上，其疫苗效价稳定和对动物免疫效果均达到国外同类疫苗的水平。林泽培等[9]以鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂冻干活疫苗的冷冻干燥试验为例，描述了冻干耐热保护剂冻干活疫苗时的工艺改进过程，获得了较佳冻干工艺曲线。在疫苗的冻干过程中，疫苗的耐热保护剂能提高其耐热程度，延长其在高温下的保存时间[10]。而目前我国生产的猪瘟兔化弱毒冻干活疫苗在2-8℃保存期仅为6个月,因此，制备出一种常温保存期长的猪瘟兔化弱毒冻干疫苗耐热保护剂对猪瘟的防控意义重大。
1 材料与设备
1.1 材料
1．1．1 毒种：猪瘟兔化弱毒株(细胞苗)，原毒初始兔体反应量：RID=2×105RID/mL，南京天邦生物技术公司提供。
1．1．2 实验动物：新西兰大白兔 南京金陵种兔场提供
1．1．3 保护剂基质：蔗糖、明胶、牛血清蛋白、L-谷氨酸、EDTA、酶解酪蛋白等。
1．1．4 冻干程序：按照如下冻干程序进行：（整个过程约48h左右）
（1）预冻：干燥箱从4℃降至-40℃，450min
（2）一次干燥：待隔板达到-40℃后，冷井降至-40℃以下，开启真空达到500mTorr，开始一次干燥：①隔板快速升温至4℃，维持960min，真空降至0 mTor；②隔板快速升温至12℃，维持220min，真空维持0 mTor；③隔板快速升温至20℃，维持220min，真空维持0 mTor；④隔板快速升温至28℃，维持330min，真空维持0 mTor；
S3-N1 1.0 3.0 0 2.0
S3-N2 1.0 3.0 1.0 2.0
9
A2 5×104 12
13
1～20 S3-E2 0.50～2.00 100% 合格
对S3-T1 、S3-E2配方的20个冻干样品进行残水量的测定,冻干苗的残水量均在行业标准规定的3%以下，残水量合格率为100%。进一步进行两配方的2.2.4试验。
摘要：目的：初步筛选出1～2个对猪瘟兔化弱毒疫苗保护作用良好，能在2～8℃保存12～24个月的耐热冻干保护剂配方。方法：在已有耐热冻干保护剂基础方S3的基础上，单因素调配基础方中不同物质（EDTA、L-Glu、BSA、NZA）的质量分数得到9个新配方，筛选出理想的耐热保护剂。结果：新配方S3-E2和S3-T1 的冻干疫苗的物理性状良好，疏松未变形，S3-E2和S3-T1配方的冻干疫苗37℃ 10d加速耐老化后病毒效价分别下降：大于一个滴度和在0.6～1.0之间。结论：在9个新配方中，只有S3-T1合格，新配方S3-T1有待进一步优化。
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关键字:猪瘟兔化弱毒疫苗；冻干；耐热保护剂
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摘要.....3
关键词.....3
Abstract...3
Key words...3
引言.............3
1 材料与设备.........4
2 方 法.......................................................................................................................................4
2．1 耐热冻干保护剂的单因素的预选.....................................................................................4
2.1.1 耐热冻干保护剂配方的设计.........................................................................................4 2.1.2 耐热保护剂的配制.....5
2.2 冷冻干燥.5 2.2.1 冻干样品外观形态观察及初步筛选.............................................................................5
2.2.2 冻干样品残余水分测定.........................................5 2.2.3 冻干样品37℃ 10d加速耐老化试验.................................................................... *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
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3 结 果...................6
3.1 冻干样品外观形态观察及初步筛选.................................................................................6
3.2 冻干样品残余水分测定.............................................7
3.3 冻干样品37℃ 10d加速耐老化试验................................................................................7
4 讨论与分析...........................................................................................................................10
4．1 结果分析............................................................................................................................10
4．2 本试验的优化...................................................................................................................11
致谢...........................................................................................................................................11
参考文献...........11
猪瘟兔化弱毒疫苗耐热冻干保护剂配方的筛选
引言
猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起猪的一种急性、热性、高度接触性和致死性的传染病，给养猪业造成重大损失[1]。1954年周泰冲等用猪瘟强毒经家兔传代减毒, 经继代纯化成功培育出一株能适应家兔的猪瘟病毒变异毒[2]。该毒株具有对猪无致病性、遗传性能稳定、具有良好的免疫原性等优点[3]，这就是国内外广泛使用的中国猪瘟兔化弱毒株（Chinese strain, 简称“C“ 株）。目前中国广泛使用 C 株来生产猪瘟活疫苗[4]。我国在1956年开始推广猪瘟兔化弱毒疫苗，最初提倡就地制苗，就地使用[5]。随着真空冷冻干燥疫苗的成功研制，集中生产，统一供应，制成的猪瘟冻干苗具有便于保存的优点，并成为我国防制猪瘟的重要防疫工具[6，7]。发达国家在20世纪80年代就已开始进行耐热保护剂的研究，目前国外进口活疫苗多采用耐热冻干保护剂，其活疫苗冻干制品在2～8℃条件下保存期为12～36个月，我国对耐热冻干保护剂的研究起步较晚，但近来十分活跃。近几年，我国在耐热保护剂活疫苗的开发上取得了一些成绩，研制成功的耐热冻干活疫苗可在2～8℃保质24个月。张云浦等[8]完成了 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
鸡传染性法氏囊，鸡传染性支气管炎，鸡传染性喉气管炎，鸡痘等多种冻干活疫苗的耐热保护剂所配制的动物疫苗，在2～8℃条件保存2年以上，其疫苗效价稳定和对动物免疫效果均达到国外同类疫苗的水平。林泽培等[9]以鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂冻干活疫苗的冷冻干燥试验为例，描述了冻干耐热保护剂冻干活疫苗时的工艺改进过程，获得了较佳冻干工艺曲线。在疫苗的冻干过程中，疫苗的耐热保护剂能提高其耐热程度，延长其在高温下的保存时间[10]。而目前我国生产的猪瘟兔化弱毒冻干活疫苗在2-8℃保存期仅为6个月,因此，制备出一种常温保存期长的猪瘟兔化弱毒冻干疫苗耐热保护剂对猪瘟的防控意义重大。
1 材料与设备
1.1 材料
1．1．1 毒种：猪瘟兔化弱毒株(细胞苗)，原毒初始兔体反应量：RID=2×105RID/mL，南京天邦生物技术公司提供。
1．1．2 实验动物：新西兰大白兔 南京金陵种兔场提供
1．1．3 保护剂基质：蔗糖、明胶、牛血清蛋白、L-谷氨酸、EDTA、酶解酪蛋白等。
1．1．4 冻干程序：按照如下冻干程序进行：（整个过程约48h左右）
（1）预冻：干燥箱从4℃降至-40℃，450min
（2）一次干燥：待隔板达到-40℃后，冷井降至-40℃以下，开启真空达到500mTorr，开始一次干燥：①隔板快速升温至4℃，维持960min，真空降至0 mTor；②隔板快速升温至12℃，维持220min，真空维持0 mTor；③隔板快速升温至20℃，维持220min，真空维持0 mTor；④隔板快速升温至28℃，维持330min，真空维持0 mTor；
S3-N1 1.0 3.0 0 2.0
S3-N2 1.0 3.0 1.0 2.0
9
A2 5×104 12
13
1～20 S3-E2 0.50～2.00 100% 合格
对S3-T1 、S3-E2配方的20个冻干样品进行残水量的测定,冻干苗的残水量均在行业标准规定的3%以下，残水量合格率为100%。进一步进行两配方的2.2.4试验。
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