迷迭香酸对肝细胞抗氧化的影响
本文旨在研究迷迭香酸对肝细胞的抗氧化能力。试验选用了ABTS和DPPH自由基清除法研究了迷迭香酸体外的抗氧化活性；再以人正常肝细胞(Lo2)为实验材料，通过实验分组，建立氧化模型等分析肝细胞的超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量，并利用免疫印迹法(Western blot)检测SOD2的表达水平来说明迷迭香酸的体内抗氧化能力。结果表明，随着加入迷迭香酸质量浓度的提高，其ABTS、DPPH的清除率也逐渐提高；并且高浓度的迷迭香酸能显著提高肝细胞的SOD活力(P<0.01)、GSH-Px活性(P<0.05)，降低MDA含量(P<0.01)。说明迷迭香酸具有很强的抗氧化能力，可以清除自由基，显著提高机体抗氧化酶的活性并降低机体脂质过氧化物的生成，其作为一种天然抗氧化剂具有广阔的开发和应用前景。
目录
摘要 4
关键词 4
Abstract 4
Key words 4
引言 4
1材料与方法 5
1.1 实验材料 5
1.2 主要仪器与设备 5
1.3 迷迭香酸的抗氧化活性检测 5
1.3.1 ABTS检测 5
1.3.2 清除DPPH能力的测定 5
1.4迷迭香酸在细胞上的抗氧化活性检测 6
1.4.1 细胞培养 6
1.4.2 实验分组 6
1.4.3 氧化模型的建立 6
1.4.4 抗氧化活性检测 6
1.4.5 免疫印迹 6
1.5 数据处理与分析方法 7
2 结果 7
2.1 迷迭香酸的抗氧化作用 7
2.2 细胞培养 8
2.3 迷迭香酸在细胞上的抗氧化作用 8
2.3.1 细胞氧化模型 8
2.3.2 SOD活性检测 8
2.3.3 GSHPx活性检测 9
2.3.4 MDA含量检测 9
2.3.5 免疫印迹检测SOD2蛋白的表达 10
3 讨论 10
3.1 迷迭香酸的抗氧化能力 10
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
3.2 迷迭香酸在细胞上的抗氧化能力 10
致谢 11
参考文献 12
迷迭香酸对肝细胞抗氧化的影响
引言
抗氧化剂(Antioxidants)是一类能帮助机体捕获并中和自由基，从而防止或减缓自由基对人体伤害的一类物质[1]。向食品中添加抗氧化剂可以防止食品成分因氧化而导致变质，对生物机体来说，可以一定程度地预防疾病，保护细胞组织和延缓衰老[2]。抗氧化剂按其来源可分为合成抗氧化剂（如BHT、BHA等）和天然抗氧化剂（如茶多酚、迷迭香等）。某些合成抗氧化剂尽管性质稳定、价格便宜，但具有一定的毒性，因此而被禁止使用，于是人们越来越倾向于天然抗氧剂的开发。研究表明，很多天然抗氧化剂对食品具有比合成抗氧化剂更强的抗氧化能力。不仅如此，天然抗氧化剂还具有安全性高，无副作用的特点，因而受到国内外的重视。其中应用最好的当属迷迭香，而迷迭香的抗氧化活性主要归功于迷迭香酸。
迷迭香酸（rosmarinic acid, RA）是一种天然的具有水溶性的多酚羟基化合物，1958年因首次从迷迭香植物中分离提取而得以命名。迷迭香酸在自然界中广泛分布，从低等苔藓到高等双子叶植均有报道[3]，尤其在唇型科植物和紫草科植物中含量最高。与其他天然抗氧化剂相比，迷迭香酸清除体内自由基的活性很强，高于叶酸、咖啡酸等。迷迭香酸还具有极强的多方面生物活性功能，包括抗炎、抗血小板凝聚、抗菌、抗紫外线、抗过敏和抗血栓等[4]，可作为抗癌抗菌素、抗病毒药和止血药。因此，迷迭香酸在医药、化妆品等领域也具有重要意义。
随着迷迭香酸研究领域的不断深入，国内外有多篇关于迷迭香酸的抗氧化能力的报道，然而从建立动物氧化模型测定迷迭香酸的体内抗氧化能力较少。本实验就是从这个方面展开，研究迷迭香酸在动物机体内外的抗氧化活性，从而进一步完善对动物抗氧化机理的认识，揭示迷迭香酸在体内外细胞中的作用，为迷迭香酸的合理利用提供可靠的依据。
1材料与方法
1.1 实验材料
迷迭香酸、Lo2细胞、培养基、过硫酸钾(K2S2O8)溶液、ABTS分析纯、无水乙醇、磷酸盐（PBS）缓冲液、DPPH分析纯、DMEM高糖培养液、谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）、噻唑蓝（MTT）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒均来自于南京建成生物有限公司、ECL显影液、12%预制胶、电泳槽、SDS、甘氨酸、Tris。
1.2 主要仪器与设备
培养箱、移液枪（200ul、1000ul）、酶标仪、离心管（1.5mL、2mL、15mL、50mL）、离心机、酶标板，超声波细胞破碎仪。
1.3 迷迭香酸的抗氧化活性检测
1.3.1 ABTS检测
将0.2mL的7.4mmol/L ABTS溶液与0.2mL的2.6mmol/L K2S2O8溶液分别加入试管中混合，在黑暗、室温条件下放置12小时，取出后用pH=7.4的磷酸盐缓冲液稀释4050倍。于734nm波长测吸光值，配成ABTS+工作液。
先取0.8mL的ABTS+工作液于烧杯中，加入0.2mL的95%乙醇溶液后，振摇10s，以充分混合，再静置6min后于734nm波长测吸光值A0。然后再取0.8mL的ABTS+工作液于另一只烧杯中，加入0.2mL不同浓度（2、4、6、8、10μg/mL）的样品溶液后，振摇10s，以充分混合，同样，再静置6min后于734nm波长测吸光值A1。
ABTS自由基清除率=(1A1/A0)×100%
1.3.2 清除DPPH能力的测定
准确称取分析纯DPPH，用无水乙醇配制成0.04 mg/mL的DPPH溶液，试管中加入2mL DPPH乙醇溶液和2mL乙醇，摇匀后静置30min，于517nm波长测吸光值。分别取2mL不同浓度（2、4、6、8、10μg/mL）的样品溶液，加入2mL DPPH 溶液，混合均匀，室温放置30 min后，以5000rpm离心10min。取上清液于517nm波长测吸光值。再分别吸取2 mL样品和无水乙醇于试管中，摇匀，在室温下反应 30 min后在517nm处测定吸光度。迷迭香酸对DPPH 自由基的清除率用公式计算：
DPPH 自由基清除率= {1（A1A2）/A0}×100%
A0: 2mL无水乙醇吸光值 + 2mL DPPH 溶液吸光值；
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摘要 4
关键词 4
Abstract 4
Key words 4
引言 4
1材料与方法 5
1.1 实验材料 5
1.2 主要仪器与设备 5
1.3 迷迭香酸的抗氧化活性检测 5
1.3.1 ABTS检测 5
1.3.2 清除DPPH能力的测定 5
1.4迷迭香酸在细胞上的抗氧化活性检测 6
1.4.1 细胞培养 6
1.4.2 实验分组 6
1.4.3 氧化模型的建立 6
1.4.4 抗氧化活性检测 6
1.4.5 免疫印迹 6
1.5 数据处理与分析方法 7
2 结果 7
2.1 迷迭香酸的抗氧化作用 7
2.2 细胞培养 8
2.3 迷迭香酸在细胞上的抗氧化作用 8
2.3.1 细胞氧化模型 8
2.3.2 SOD活性检测 8
2.3.3 GSHPx活性检测 9
2.3.4 MDA含量检测 9
2.3.5 免疫印迹检测SOD2蛋白的表达 10
3 讨论 10
3.1 迷迭香酸的抗氧化能力 10
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
3.2 迷迭香酸在细胞上的抗氧化能力 10
致谢 11
参考文献 12
迷迭香酸对肝细胞抗氧化的影响
引言
抗氧化剂(Antioxidants)是一类能帮助机体捕获并中和自由基，从而防止或减缓自由基对人体伤害的一类物质[1]。向食品中添加抗氧化剂可以防止食品成分因氧化而导致变质，对生物机体来说，可以一定程度地预防疾病，保护细胞组织和延缓衰老[2]。抗氧化剂按其来源可分为合成抗氧化剂（如BHT、BHA等）和天然抗氧化剂（如茶多酚、迷迭香等）。某些合成抗氧化剂尽管性质稳定、价格便宜，但具有一定的毒性，因此而被禁止使用，于是人们越来越倾向于天然抗氧剂的开发。研究表明，很多天然抗氧化剂对食品具有比合成抗氧化剂更强的抗氧化能力。不仅如此，天然抗氧化剂还具有安全性高，无副作用的特点，因而受到国内外的重视。其中应用最好的当属迷迭香，而迷迭香的抗氧化活性主要归功于迷迭香酸。
迷迭香酸（rosmarinic acid, RA）是一种天然的具有水溶性的多酚羟基化合物，1958年因首次从迷迭香植物中分离提取而得以命名。迷迭香酸在自然界中广泛分布，从低等苔藓到高等双子叶植均有报道[3]，尤其在唇型科植物和紫草科植物中含量最高。与其他天然抗氧化剂相比，迷迭香酸清除体内自由基的活性很强，高于叶酸、咖啡酸等。迷迭香酸还具有极强的多方面生物活性功能，包括抗炎、抗血小板凝聚、抗菌、抗紫外线、抗过敏和抗血栓等[4]，可作为抗癌抗菌素、抗病毒药和止血药。因此，迷迭香酸在医药、化妆品等领域也具有重要意义。
随着迷迭香酸研究领域的不断深入，国内外有多篇关于迷迭香酸的抗氧化能力的报道，然而从建立动物氧化模型测定迷迭香酸的体内抗氧化能力较少。本实验就是从这个方面展开，研究迷迭香酸在动物机体内外的抗氧化活性，从而进一步完善对动物抗氧化机理的认识，揭示迷迭香酸在体内外细胞中的作用，为迷迭香酸的合理利用提供可靠的依据。
1材料与方法
1.1 实验材料
迷迭香酸、Lo2细胞、培养基、过硫酸钾(K2S2O8)溶液、ABTS分析纯、无水乙醇、磷酸盐（PBS）缓冲液、DPPH分析纯、DMEM高糖培养液、谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）、噻唑蓝（MTT）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒均来自于南京建成生物有限公司、ECL显影液、12%预制胶、电泳槽、SDS、甘氨酸、Tris。
1.2 主要仪器与设备
培养箱、移液枪（200ul、1000ul）、酶标仪、离心管（1.5mL、2mL、15mL、50mL）、离心机、酶标板，超声波细胞破碎仪。
1.3 迷迭香酸的抗氧化活性检测
1.3.1 ABTS检测
将0.2mL的7.4mmol/L ABTS溶液与0.2mL的2.6mmol/L K2S2O8溶液分别加入试管中混合，在黑暗、室温条件下放置12小时，取出后用pH=7.4的磷酸盐缓冲液稀释4050倍。于734nm波长测吸光值，配成ABTS+工作液。
先取0.8mL的ABTS+工作液于烧杯中，加入0.2mL的95%乙醇溶液后，振摇10s，以充分混合，再静置6min后于734nm波长测吸光值A0。然后再取0.8mL的ABTS+工作液于另一只烧杯中，加入0.2mL不同浓度（2、4、6、8、10μg/mL）的样品溶液后，振摇10s，以充分混合，同样，再静置6min后于734nm波长测吸光值A1。
ABTS自由基清除率=(1A1/A0)×100%
1.3.2 清除DPPH能力的测定
准确称取分析纯DPPH，用无水乙醇配制成0.04 mg/mL的DPPH溶液，试管中加入2mL DPPH乙醇溶液和2mL乙醇，摇匀后静置30min，于517nm波长测吸光值。分别取2mL不同浓度（2、4、6、8、10μg/mL）的样品溶液，加入2mL DPPH 溶液，混合均匀，室温放置30 min后，以5000rpm离心10min。取上清液于517nm波长测吸光值。再分别吸取2 mL样品和无水乙醇于试管中，摇匀，在室温下反应 30 min后在517nm处测定吸光度。迷迭香酸对DPPH 自由基的清除率用公式计算：
DPPH 自由基清除率= {1（A1A2）/A0}×100%
A0: 2mL无水乙醇吸光值 + 2mL DPPH 溶液吸光值；
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