猪脂肪沉积相关糖皮质受体基因表达调控猪脂肪沉积相关糖皮质受体基因表达调控序列变异分析(附件)【字数：7352】
1糖皮质激素受体（GR）可以影响脂肪沉积，对肌内脂肪含量具有潜在调节作用。编码GR的基因NR3C1第一外显子有十种变体[1]，其中E1-C变体对GR的表达量具有重要影响，因此作为本课题的主要研究对象。本实验对10头二花脸猪和10头四元外种杂交猪的NR3C1 E1-C启动子区分别进行扩增、测序，比较个体之间的序列差异，得到了一个等位基因分布模式存在差异的SNP位点。通过双荧光素酶活性报告实验检测GG型启动子与TT型启动子的启动子活性，结果发现两者之间的差异不显著（P >0.05）。虽然本实验没有得出理想的结果，但仍然可以为今后的研究提供参考数据。
目 录
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 材料 2
1.1.1 实验样品 2
1.1.2 主要实验试剂 2
1.1.3 主要仪器及实验器械2
1.1.4 数据库与引物设计网站2
1.2 方法 2
1.2.1 GR编码基因NR3C1启动子区SNP的筛选2
1.2.2 构建pGL3G双荧光素酶报告载体3
1.2.3 构建点突变双荧光素酶报告载体6
1.2.4 分析双荧光素酶报告载体启动子活性8
2 结果与分析8
2.1 GR编码基因NR3C1启动子区SNP位点筛选8
2.2 菌液PCR鉴定重组载体9
2.3 双酶切鉴定重组载体10
2.4 测序验证点突变重组载体10
2.5 NR3C1不同单倍型启动子活性分析10
3 讨论 11
致谢11
参考文献12
猪脂肪沉积相关糖皮质受体基因表达调控序列变异分析
动物科学专业学生 彭烽益
指导教师 韦伟
Identification of single nucleotide polymorphisms in GR promoter and related activity analysis
Student majoring in anim *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
al science Fengyi Peng
Tutor Wei Wei
Abstract：Glucocorticoid receptor (GR) plays a underlying role in intramuscular fat deposition. There are 10 variants for GR gene exon 1, and E1C is the vital variant for the gene expression. In this experiment, we amplified E1C promoter from 10 Erhualian pigs and 10 crossbred pigs for sequencing. A SNP with the different allele distribution pattern was identified through sequence comparison. Dualluciferase activity analysis indicated that there was no significant difference (P > 0.05) between the G promoter and T promoter promoter activity. Although the unsatisfactory result was obtained from our present experiment, it could still provide valuable data for future study.
Key words: GR; SNP, promoter activity
引言 目前，在中国的传统肉类之中，猪肉占据主导的地位。改革开放以来，经济的火箭式发展成为常态。发展带来的不仅仅是人民生活水平的提高，人们观念也在改变，体现在以前的追求数量的消费观念转变为追求质量的消费观念。对食品的质量与安全的高要求近年来表现得尤为突出，人们不再满足于猪肉从过去的奢侈品成为日常生活的常客这一转变，而是要求猪肉质量提高进而提高大家的饮食质量。然而，自从贰拾世纪柒拾年代以来，由于受到当时的社会现状和世界研究氛围的影响，全国育种研究的主要目标还是保持饲料转化率的同时降低商品猪体脂的含量，这一追求在很长一段时间内是适合我国国情的，提高了我国的人均可支配猪肉量，但客观上也使得猪肉质量的问题日益突出，猪肉整体风味更加恶化。 如今，人们的理念已发生转变，市场变得越来越欢迎肉质较佳的土猪肉便是明证，因此，为适应市场的需求，如何使皮下脂肪沉积减少的情况下，同时又保证肌肉内脂肪的含量，这是我们今后的培育工作中值得思考的问题[2]。
糖皮质激素受体（Glucocorticoid Receptor，GR）是一种约含800多个氨基酸组成的由可溶性单链多肽组成的磷蛋白[3]。组织内GR主要存在于细胞胞浆中，根据是否与激素结合和是否激活分为四种形式存在。GR是一个复核体，分子量为三十万道尔顿，它由两个组分构成，分别是激素结合亚单位和两个热休克蛋白90（heat shock protein90，HSP90），蛋白的分子量为90kd。糖皮质激素受体构型由热休克蛋白维持，并借助成对的热休克蛋白的作用而处于未被激活的状态[4]。
GR由NR3C1（nuclear receptor subfamily 3, group C, member1）基因编码，其基因结构比较复杂，包括壹个不编码蛋白的、选择性转录的外显子（Exon 1）和捌个可翻译的外显子（Exon 2~9）。有多个转录起始位点位于5’非翻译区（5’ untranslated regions, 5’ UTR），多个不同外显子的mRNA变体可以通过非翻译区转录而成。另外，Exon1通过不同的剪切方式，可产生多种GR蛋白亚型，它们功能各异[5]。多重因素调控了GR选择性Exon 1变体的表达，且这一过程和GR蛋白亚型的表达相关[6]。
目 录
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 材料 2
1.1.1 实验样品 2
1.1.2 主要实验试剂 2
1.1.3 主要仪器及实验器械2
1.1.4 数据库与引物设计网站2
1.2 方法 2
1.2.1 GR编码基因NR3C1启动子区SNP的筛选2
1.2.2 构建pGL3G双荧光素酶报告载体3
1.2.3 构建点突变双荧光素酶报告载体6
1.2.4 分析双荧光素酶报告载体启动子活性8
2 结果与分析8
2.1 GR编码基因NR3C1启动子区SNP位点筛选8
2.2 菌液PCR鉴定重组载体9
2.3 双酶切鉴定重组载体10
2.4 测序验证点突变重组载体10
2.5 NR3C1不同单倍型启动子活性分析10
3 讨论 11
致谢11
参考文献12
猪脂肪沉积相关糖皮质受体基因表达调控序列变异分析
动物科学专业学生 彭烽益
指导教师 韦伟
Identification of single nucleotide polymorphisms in GR promoter and related activity analysis
Student majoring in anim *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
al science Fengyi Peng
Tutor Wei Wei
Abstract：Glucocorticoid receptor (GR) plays a underlying role in intramuscular fat deposition. There are 10 variants for GR gene exon 1, and E1C is the vital variant for the gene expression. In this experiment, we amplified E1C promoter from 10 Erhualian pigs and 10 crossbred pigs for sequencing. A SNP with the different allele distribution pattern was identified through sequence comparison. Dualluciferase activity analysis indicated that there was no significant difference (P > 0.05) between the G promoter and T promoter promoter activity. Although the unsatisfactory result was obtained from our present experiment, it could still provide valuable data for future study.
Key words: GR; SNP, promoter activity
引言 目前，在中国的传统肉类之中，猪肉占据主导的地位。改革开放以来，经济的火箭式发展成为常态。发展带来的不仅仅是人民生活水平的提高，人们观念也在改变，体现在以前的追求数量的消费观念转变为追求质量的消费观念。对食品的质量与安全的高要求近年来表现得尤为突出，人们不再满足于猪肉从过去的奢侈品成为日常生活的常客这一转变，而是要求猪肉质量提高进而提高大家的饮食质量。然而，自从贰拾世纪柒拾年代以来，由于受到当时的社会现状和世界研究氛围的影响，全国育种研究的主要目标还是保持饲料转化率的同时降低商品猪体脂的含量，这一追求在很长一段时间内是适合我国国情的，提高了我国的人均可支配猪肉量，但客观上也使得猪肉质量的问题日益突出，猪肉整体风味更加恶化。 如今，人们的理念已发生转变，市场变得越来越欢迎肉质较佳的土猪肉便是明证，因此，为适应市场的需求，如何使皮下脂肪沉积减少的情况下，同时又保证肌肉内脂肪的含量，这是我们今后的培育工作中值得思考的问题[2]。
糖皮质激素受体（Glucocorticoid Receptor，GR）是一种约含800多个氨基酸组成的由可溶性单链多肽组成的磷蛋白[3]。组织内GR主要存在于细胞胞浆中，根据是否与激素结合和是否激活分为四种形式存在。GR是一个复核体，分子量为三十万道尔顿，它由两个组分构成，分别是激素结合亚单位和两个热休克蛋白90（heat shock protein90，HSP90），蛋白的分子量为90kd。糖皮质激素受体构型由热休克蛋白维持，并借助成对的热休克蛋白的作用而处于未被激活的状态[4]。
GR由NR3C1（nuclear receptor subfamily 3, group C, member1）基因编码，其基因结构比较复杂，包括壹个不编码蛋白的、选择性转录的外显子（Exon 1）和捌个可翻译的外显子（Exon 2~9）。有多个转录起始位点位于5’非翻译区（5’ untranslated regions, 5’ UTR），多个不同外显子的mRNA变体可以通过非翻译区转录而成。另外，Exon1通过不同的剪切方式，可产生多种GR蛋白亚型，它们功能各异[5]。多重因素调控了GR选择性Exon 1变体的表达，且这一过程和GR蛋白亚型的表达相关[6]。
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