氟喹诺酮药物沙拉沙星在鱼体内代谢消除规律
氟喹诺酮药物沙拉沙星在鱼体内代谢消除规律[20200510204152]
摘要：在24-26℃水温条件下，研究沙拉沙星口服灌药和尾静脉注射给药后在乌鳢体内血液中药物浓度的变化规律。高效液相色谱仪（HPLC）测定给药后不同时间点的乌鳢血液中的沙拉沙星的血药浓度。然后用excel对得到的数据进行分析。乌鳢口服给药后，血药浓度先上升达到一个最大浓度，12h时达最大血药浓度0.862±0.138ug/ml，然后再逐渐下降，处于一个缓慢消除的过程。乌鳢尾静脉注射给药后，血药浓度迅速达到最大浓度13.501±3.213 ug/ml，然后在短时间内急速下降，最后达到一个缓慢消除的过程。沙拉沙星抗菌效果好，可以用于治疗乌鳢细菌性疾病。根据本实验结果，可以推断出：病害乌鳢以10mg/kg剂量单次口服给药下，为了确保食品安全，沙拉沙星在乌鳢体内的休药期在5d以上。为了保证药效，给药时间间隔可以超过2d。口服给药下沙拉沙星在乌鳢体内的生物利用度为24.00%。
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关键字:沙拉沙星；乌鳢；高效液相色谱；药代动力学；生物利用度
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1实验动物 2
1.2药品和试剂 2
1.3给药方式及采样2
1.3.1静脉注射2
1.3.2口服灌药2
1.3.3样品采样2
1.4样品前处理 2
1.5分析方法 2
1.6标准曲线和回收率2
2结果与分析3
2.1血药浓度与时间曲线3
3讨论 4
3.1沙拉沙星在乌鳢体内的吸收、分布以及消除规律4
3.2沙拉沙星在乌鳢体内的休药期5
3.3沙拉沙星在乌鳢体内的有效时间间隔5
3.4沙拉沙星在乌鳢体内的生物利用度5
致谢6
参考文献6
图1 乌鳢单次口服沙拉沙星血药浓度—时间曲线3
图2 乌鳢尾静脉注射沙拉沙星血药浓度—时间曲线4
表1乌鳢单次口服沙拉沙星不同时间的血药浓度3
表2乌鳢尾静脉注射沙拉沙星不同时间血药浓度4
氟喹诺酮药物沙拉沙星在鱼体内代谢消除规律
引言
乌鳢又名“财鱼”、“黑鱼”、“生鱼”、“乌鱼”等，肌肉嫩味美，含肉率高，骨刺少，营养丰富，鱼肉中含有丰富的蛋白质、多种氨基酸、维生素和多种微量元素，是一种含有全价营养成分的优质鱼类。乌鳢的肌肉中蛋白质、必须氨基酸（EAA）和一些主要微量元素均高于常见的养殖鱼类，而脂肪含量比较低。乌鳢除使用外，且有较高的药理作用。我国中医始祖李时珍在《本草纲目》中有记载：乌鳢肌肉、肝、肠、胆均可入药，鱼 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
肉主治痔、湿痹、面目浮肿、下大水等。国内外文献有报道：在人体手术后或产妇“坐月子”期间使用，再生肌补血加速伤口愈合功效。《中国自然资源手册》中记载，乌鳢有祛风湿、利尿及收敛等药效作用 [1-2]。因此，乌鳢是一种很受欢迎的经济类鱼，畅销国内外，在东南亚各国、日本市场需求日益增加，价格昂贵，成为我国外贸出口的主要水产品之一。在国内市场上，属较高档次的水产品，价格远在家鱼之上。改革开放以来，我国经济也突飞猛进，人民经济收入和生活水平不断提高，人们对乌鳢的需求量日益增加[3]。伴随着人们对乌鳢需求的增加，养殖规模不断扩大，养殖密度不断增加，养殖环境不断恶化，造成乌鳢鱼病多发，特别是细菌性鱼病，危害程度越来越大，已经成为乌鳢养殖发展的一大障碍[4]。
沙拉沙星（Sarafloxacin）是第一个被美国FDA批准用于食品动物的氟喹诺酮类药物，具有抗菌谱广、抗菌活性强、与其他抗菌药物无交叉耐药性、吸收快、生物利用度高、组织分布广、办衰期长等特点。沙拉沙星对大多数细菌（尤其是革兰氏阴性菌）和霉形体均表现出良好的抗菌作用[5]。是一种用于乌鳢细菌性疾病治疗的良好药物，本研究通过给乌鳢口服和尾静脉注射沙拉沙星，一定时间后测定乌鳢体内血药浓度，绘出血药浓度—时间曲线图。研究沙拉沙星在鱼体内血液中吸收，分布，消除的规律，为养殖户用沙拉沙星治疗鱼病提供理论参考。
1 材料与方法
1．1 实验动物
健康乌鳢(Ophiocephalus argus Cantor)，重约190-210g，饲养于玻璃水族箱中，水温控制在24-26℃，盐度低于1‰，持续充气。实验开始前，暂养15d，期间饲喂商品饵料，不添加任何药物。
1．2 药品和试剂
沙拉沙星标准品，纯度≥99.5％，中国兽药监察所生产。沙拉沙星针剂，河南惠通天下生物工程有限公司，批准文号：兽药字（2011）162232153。乙腈为色谱级，购自美国Tedia公司，磷酸、正己烷、三乙胺均为化学纯，超纯水自制（美国Milli-Q系统）。
1．3 给药方式及采样
1．3．1 静脉注射 每尾乌鳢通过尾静脉注射给药，注射量0.2 mL/100 g（体重），给药剂量10mg/kg。给药前，实验鱼用三卡因甲基磺酸盐（MS-222）深度麻醉， 称重，并以湿毛巾包裹，注射使用1ml一次性注射器，先回血定位，注射过程中，若针尖移动，则另换实验鱼重新操作。
1．3．2 口灌给药 使用1ml注射器（去针头）将含有药物的糜状饲料灌入实验鱼前肠，灌入饲料量0.4 g/100g体重，给药剂量10mg/kg。操作前，同样进行麻醉、称重，并以湿毛巾包裹，给药后，将实验鱼放入一个单独的水族箱，观察有无回吐，若有回吐，则另换实验鱼重新灌服。
1．3．3 样品采集 静脉注射后第0.083, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8, 24, 48, 72, 96, 和120h，口灌给药后第1, 2, 4, 8, 12, 24, 48, 72, 96, 和120h，采集血液样本，经离心（1665g，10min）后取血浆，置入-70冰箱待检测。
1．4 样品前处理
组织样本室温下解冻，准确吸取1ml血浆，置入10ml离心管，分两次加入6ml二氯甲烷，高速匀浆， *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
静置后离心（3500g, 10min），取上清液，40℃水浴氮气吹干，残渣用1ml流动相溶解，正己烷去脂肪，经0.22μm微孔滤膜过滤待测。
1．5 分析方法
检测仪器选用日立高效液相色谱仪，配备二元泵、手动进样器、荧光检测器等，检测波长：激发波长280 nm，发射波长450 nm；色谱柱：Waters SunFire C18反相色谱柱(4.6×250 mm)；流动相：3 ml/L磷酸缓冲盐（三乙胺调pH至3.0）与乙腈体积比为84:16，进样量10μL，流速1mL/min。
1．6 标准曲线、回收率
准确称取0.01g 沙拉沙星标准品溶于100 mL0.03M氢氧化钠溶液中，配成100μg/mL的母液，再依次用流动相稀释成20，10，5，1，0.5，0.2，0.1，0.05，0.02，0.01μg/mL的标准溶液，于冰箱中4℃保存。
将配制的标准品溶液分别加入空白组织（血液）中，使组织药物浓度分别为20，10，5，1，0.5，0.2，0.1，0.05，0.02，0.01μg/mL的按样品处理方法处理后进行HPLC测定，以浓度为纵坐标，峰面积为横坐标做标准曲线，分别求出回归方程和相关系数。
往空白组织中（血液）按5个浓度梯度（0.05，0.1，1，10，50μg/mL）加入标准液，然后按样品处理方法处理，并测定。按照公式进行计算：回收率（%）=（测定值/标准液样品浓度）×100%。
2．1 血药质量浓度与药物—时间曲线
健康乌鳢单次口服灌药沙拉沙星（10mg/kg）后，不同时间点的血药浓度见表1。乌鳢单次口服灌药后，随着时间的推移，血药浓度慢慢上升，到12h时达到最大浓度。然后血药浓度开始下降，120h时血药浓度降为0.026±0.007ug/ml。图1是乌鳢单次口服灌药的血药浓度—时间曲线图。
图1 乌鳢单次口服沙拉沙星血药浓度—时间曲线
Figure 1 Sarafloxacin concentration-time curve of single oral administration
摘要：在24-26℃水温条件下，研究沙拉沙星口服灌药和尾静脉注射给药后在乌鳢体内血液中药物浓度的变化规律。高效液相色谱仪（HPLC）测定给药后不同时间点的乌鳢血液中的沙拉沙星的血药浓度。然后用excel对得到的数据进行分析。乌鳢口服给药后，血药浓度先上升达到一个最大浓度，12h时达最大血药浓度0.862±0.138ug/ml，然后再逐渐下降，处于一个缓慢消除的过程。乌鳢尾静脉注射给药后，血药浓度迅速达到最大浓度13.501±3.213 ug/ml，然后在短时间内急速下降，最后达到一个缓慢消除的过程。沙拉沙星抗菌效果好，可以用于治疗乌鳢细菌性疾病。根据本实验结果，可以推断出：病害乌鳢以10mg/kg剂量单次口服给药下，为了确保食品安全，沙拉沙星在乌鳢体内的休药期在5d以上。为了保证药效，给药时间间隔可以超过2d。口服给药下沙拉沙星在乌鳢体内的生物利用度为24.00%。
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关键字:沙拉沙星；乌鳢；高效液相色谱；药代动力学；生物利用度
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摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1实验动物 2
1.2药品和试剂 2
1.3给药方式及采样2
1.3.1静脉注射2
1.3.2口服灌药2
1.3.3样品采样2
1.4样品前处理 2
1.5分析方法 2
1.6标准曲线和回收率2
2结果与分析3
2.1血药浓度与时间曲线3
3讨论 4
3.1沙拉沙星在乌鳢体内的吸收、分布以及消除规律4
3.2沙拉沙星在乌鳢体内的休药期5
3.3沙拉沙星在乌鳢体内的有效时间间隔5
3.4沙拉沙星在乌鳢体内的生物利用度5
致谢6
参考文献6
图1 乌鳢单次口服沙拉沙星血药浓度—时间曲线3
图2 乌鳢尾静脉注射沙拉沙星血药浓度—时间曲线4
表1乌鳢单次口服沙拉沙星不同时间的血药浓度3
表2乌鳢尾静脉注射沙拉沙星不同时间血药浓度4
氟喹诺酮药物沙拉沙星在鱼体内代谢消除规律
引言
乌鳢又名“财鱼”、“黑鱼”、“生鱼”、“乌鱼”等，肌肉嫩味美，含肉率高，骨刺少，营养丰富，鱼肉中含有丰富的蛋白质、多种氨基酸、维生素和多种微量元素，是一种含有全价营养成分的优质鱼类。乌鳢的肌肉中蛋白质、必须氨基酸（EAA）和一些主要微量元素均高于常见的养殖鱼类，而脂肪含量比较低。乌鳢除使用外，且有较高的药理作用。我国中医始祖李时珍在《本草纲目》中有记载：乌鳢肌肉、肝、肠、胆均可入药，鱼 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
肉主治痔、湿痹、面目浮肿、下大水等。国内外文献有报道：在人体手术后或产妇“坐月子”期间使用，再生肌补血加速伤口愈合功效。《中国自然资源手册》中记载，乌鳢有祛风湿、利尿及收敛等药效作用 [1-2]。因此，乌鳢是一种很受欢迎的经济类鱼，畅销国内外，在东南亚各国、日本市场需求日益增加，价格昂贵，成为我国外贸出口的主要水产品之一。在国内市场上，属较高档次的水产品，价格远在家鱼之上。改革开放以来，我国经济也突飞猛进，人民经济收入和生活水平不断提高，人们对乌鳢的需求量日益增加[3]。伴随着人们对乌鳢需求的增加，养殖规模不断扩大，养殖密度不断增加，养殖环境不断恶化，造成乌鳢鱼病多发，特别是细菌性鱼病，危害程度越来越大，已经成为乌鳢养殖发展的一大障碍[4]。
沙拉沙星（Sarafloxacin）是第一个被美国FDA批准用于食品动物的氟喹诺酮类药物，具有抗菌谱广、抗菌活性强、与其他抗菌药物无交叉耐药性、吸收快、生物利用度高、组织分布广、办衰期长等特点。沙拉沙星对大多数细菌（尤其是革兰氏阴性菌）和霉形体均表现出良好的抗菌作用[5]。是一种用于乌鳢细菌性疾病治疗的良好药物，本研究通过给乌鳢口服和尾静脉注射沙拉沙星，一定时间后测定乌鳢体内血药浓度，绘出血药浓度—时间曲线图。研究沙拉沙星在鱼体内血液中吸收，分布，消除的规律，为养殖户用沙拉沙星治疗鱼病提供理论参考。
1 材料与方法
1．1 实验动物
健康乌鳢(Ophiocephalus argus Cantor)，重约190-210g，饲养于玻璃水族箱中，水温控制在24-26℃，盐度低于1‰，持续充气。实验开始前，暂养15d，期间饲喂商品饵料，不添加任何药物。
1．2 药品和试剂
沙拉沙星标准品，纯度≥99.5％，中国兽药监察所生产。沙拉沙星针剂，河南惠通天下生物工程有限公司，批准文号：兽药字（2011）162232153。乙腈为色谱级，购自美国Tedia公司，磷酸、正己烷、三乙胺均为化学纯，超纯水自制（美国Milli-Q系统）。
1．3 给药方式及采样
1．3．1 静脉注射 每尾乌鳢通过尾静脉注射给药，注射量0.2 mL/100 g（体重），给药剂量10mg/kg。给药前，实验鱼用三卡因甲基磺酸盐（MS-222）深度麻醉， 称重，并以湿毛巾包裹，注射使用1ml一次性注射器，先回血定位，注射过程中，若针尖移动，则另换实验鱼重新操作。
1．3．2 口灌给药 使用1ml注射器（去针头）将含有药物的糜状饲料灌入实验鱼前肠，灌入饲料量0.4 g/100g体重，给药剂量10mg/kg。操作前，同样进行麻醉、称重，并以湿毛巾包裹，给药后，将实验鱼放入一个单独的水族箱，观察有无回吐，若有回吐，则另换实验鱼重新灌服。
1．3．3 样品采集 静脉注射后第0.083, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8, 24, 48, 72, 96, 和120h，口灌给药后第1, 2, 4, 8, 12, 24, 48, 72, 96, 和120h，采集血液样本，经离心（1665g，10min）后取血浆，置入-70冰箱待检测。
1．4 样品前处理
组织样本室温下解冻，准确吸取1ml血浆，置入10ml离心管，分两次加入6ml二氯甲烷，高速匀浆， *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
静置后离心（3500g, 10min），取上清液，40℃水浴氮气吹干，残渣用1ml流动相溶解，正己烷去脂肪，经0.22μm微孔滤膜过滤待测。
1．5 分析方法
检测仪器选用日立高效液相色谱仪，配备二元泵、手动进样器、荧光检测器等，检测波长：激发波长280 nm，发射波长450 nm；色谱柱：Waters SunFire C18反相色谱柱(4.6×250 mm)；流动相：3 ml/L磷酸缓冲盐（三乙胺调pH至3.0）与乙腈体积比为84:16，进样量10μL，流速1mL/min。
1．6 标准曲线、回收率
准确称取0.01g 沙拉沙星标准品溶于100 mL0.03M氢氧化钠溶液中，配成100μg/mL的母液，再依次用流动相稀释成20，10，5，1，0.5，0.2，0.1，0.05，0.02，0.01μg/mL的标准溶液，于冰箱中4℃保存。
将配制的标准品溶液分别加入空白组织（血液）中，使组织药物浓度分别为20，10，5，1，0.5，0.2，0.1，0.05，0.02，0.01μg/mL的按样品处理方法处理后进行HPLC测定，以浓度为纵坐标，峰面积为横坐标做标准曲线，分别求出回归方程和相关系数。
往空白组织中（血液）按5个浓度梯度（0.05，0.1，1，10，50μg/mL）加入标准液，然后按样品处理方法处理，并测定。按照公式进行计算：回收率（%）=（测定值/标准液样品浓度）×100%。
2．1 血药质量浓度与药物—时间曲线
健康乌鳢单次口服灌药沙拉沙星（10mg/kg）后，不同时间点的血药浓度见表1。乌鳢单次口服灌药后，随着时间的推移，血药浓度慢慢上升，到12h时达到最大浓度。然后血药浓度开始下降，120h时血药浓度降为0.026±0.007ug/ml。图1是乌鳢单次口服灌药的血药浓度—时间曲线图。
图1 乌鳢单次口服沙拉沙星血药浓度—时间曲线
Figure 1 Sarafloxacin concentration-time curve of single oral administration
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