高浓度葡萄糖对Caco2细胞P糖蛋白mRNA表达的影响
高浓度葡萄糖对Caco2细胞P糖蛋白mRNA表达的影响[20200507190842]
摘要：P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）为ATP结合盒(ATP-binding cassette)膜转运系统超家族成员之一，在人和啮齿类动物正常组织中有广泛分布，主要作用是保护机体免受外源化合物的影响。目前认为机体肠上皮细胞膜上P-gp的外排作用对口服药物的跨膜转运和药物的生物利用度可产生重大影响，对P-pg的调控能影响药物的体内过程，本文以此为切入点，拟研究不同浓度的葡萄糖对Caco-2细胞(the human colon carcinoma cell line) P-gp mRNA表达的影响，为临床中糖尿病机体临床合理用药提供参考。试验首先通过MTT法测定了不同浓度葡萄糖对Caco-2细胞生长影响，确定所选用的葡萄糖浓度范围用以培养Caco-2细胞；然后通过实时荧光定量PCR方法（real-time fluorescent quantitative PCR，real-time RT PCR）检测不同浓度的葡萄糖处理不同时间后对Caco-2细胞中Abcb1 mRNA表达的影响。结果表明，较高浓度的葡萄糖对Caco-2细胞Abcb1 mRNA的表达会产生影响，葡萄糖浓度达到25 μM以上随处理时间延长（12 h和24 h），Caco-2细胞中Abcb1 mRNA的表达量会显著增加（P<0.05），但处理6 h时，各浓度葡萄糖对Caco-2细胞Abcb1 mRNA的表达未产生显著影响（P>0.05）。结果提示：高糖水平可在转录水平影响机体P-gp的表达，故患有糖尿病的动物在临床用药时可能会影响一些P-gp底物药物在体内的药动学过程，值得临床重视。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
关键字:P-糖蛋白；葡萄糖；Caco-2细胞；Abcb1；实时荧光定量
目录
摘要 3
关键词 3
Abstract. 4
Key words 4
引言 4
1 材料与方法 6
1.1 材料 6
1.2 方法 7
1.2.1 主要溶液的配制 7
1.2.2 MTT比色法测定不同浓度葡萄糖对Caco-2细胞生长的影响 7
1.2.3 Caco-2细胞总RNA的提取 7
1.2.4 RNA浓度、纯度及完整性的鉴定 8
1.2.5 real-time RT PCR 8
2 结果 9
2.1 MTT法测定不同浓度葡萄糖对Caco-2细胞生长的影响 9
2.2 RNA完整性鉴定 10
2.3 RNA及cDNA检测 11
2.4 不同葡糖糖浓度对Caco-2细胞Abcb1 mRNA相对表达量的影响 12
2.4.1 Abcb1和gapdh扩增曲线、熔解曲线和扩增效率 12
2.4.2 不同浓度葡萄糖处理Caco-2细胞不同时间后Abcb1 mRNA相对表达量的变化 13
3 讨论 14
致谢 15
参考文献： 16
高浓度葡萄糖对Caco-2细胞P-糖蛋白mRNA表达的影响
摘要：P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）为ATP结合盒(ATP-binding cassette)膜转运系统超家族成员之一，在人和啮齿类动物正常组织中有广泛分布，主要作用是保护机体免受外源化合物的影响。目前认为机体肠上皮细胞膜上P-gp的外排作用对口服药物的跨膜转运和药物的生物利用度可产生重大影响，对P-pg的调控能影响药物的体内过程，本文以此为切入点，拟研究不同浓度的葡萄糖对Caco-2细胞(the human colon carcinoma cell line) P-gp mRNA表达的影响，为临床中糖尿病机体临床合理用药提供参考。试验首先通过MTT法测定了不同浓度葡萄糖对Caco-2细胞生长影响，确定所选用的葡萄糖浓度范围用以培养Caco-2细胞；然后通过实时荧光定量PCR方法（real-time fluorescent quantitative PCR，real-time RT PCR）检测不同浓度的葡萄糖处理不同时间后对Caco-2细胞中Abcb1 mRNA表达的影响。结果表明，较高浓度的葡萄糖对Caco-2细胞Abcb1 mRNA的表达会产生影响，葡萄糖浓度达到25 μM以上随处理时间延长（12 h和24 h），Caco-2细胞中Abcb1 mRNA的表达量会显著增加（P<0.05），但处理6 h时，各浓度葡萄糖对Caco-2细胞Abcb1 mRNA的表达未产生显著影响（P>0.05）。结果提示：高糖水平可在转录水平影响机体P-gp的表达，故患有糖尿病的动物在临床用药时可能会影响一些P-gp底物药物在体内的药动学过程，值得临床重视。
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引言 4
1 材料与方法 6
1.1 材料 6
1.2 方法 7
1.2.1 主要溶液的配制 7
1.2.2 MTT比色法测定不同浓度葡萄糖对Caco-2细胞生长的影响 7
1.2.3 Caco-2细胞总RNA的提取 7
1.2.4 RNA浓度、纯度及完整性的鉴定 8
1.2.5 real-time RT PCR 8
2 结果 9
2.1 MTT法测定不同浓度葡萄糖对Caco-2细胞生长的影响 9
2.2 RNA完整性鉴定 10
2.3 RNA及cDNA检测 11
2.4 不同葡糖糖浓度对Caco-2细胞Abcb1 mRNA相对表达量的影响 12
2.4.1 Abcb1和gapdh扩增曲线、熔解曲线和扩增效率 12
2.4.2 不同浓度葡萄糖处理Caco-2细胞不同时间后Abcb1 mRNA相对表达量的变化 13
3 讨论 14
致谢 15
参考文献： 16
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