铁棒锤生品中3种双酯生物碱的含量测定(附件)
摘 要本文研究铁棒锤中双酯型生物碱的含量测定后，为铁棒锤的合理使用及质量控制提供依据。色谱条件为：色谱柱：Diamonsil 5μm C18柱（250mm×4.6mm）；流动相：以乙腈-四氢呋喃（25:15）为流动相A，以0.1mol/L醋酸铵溶液(每1000ml加冰乙酸0.5ml)为流动相B；梯度洗脱；流速：1.0ml/min；检测波长为235nm。在此色谱条件下，3种双酯型生物碱可以完全分离，乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的线性范围分别为：0.13～1.33μg（R2=0.9980）、0.34～3.41μg（R2=0.9964）、0.34～3.41μg（R2=0.9963），回收率分别为：97.04%，RSD=1.290%；96.99%，RSD=1.174%；96.27%，RSD=1.521%。该检测方法操作简便，结果准确可靠，具有重现性，能用于铁棒锤中3种双酯型生物碱的含量测定。甘肃产铁棒锤中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的平均含量分别为0.181%、0.013%、0.041%，酯碱含量高，在临床使用时应减少用量或炮制后使用。目 录
1 绪论
1.1铁棒锤的文献研究 1
1.2化学成分研究 1
1.3毒性及炮制研究 2
1.4药理作用研究 3
1.4.1抗炎作用 3
1.4.2镇痛作用 3
1.4.3局部麻醉作用 4
1.4.4抗肿瘤作用 4
1.4.5对心血管系统的作用 4
1.4.6其他作用 5
1.5临床应用研究 5
2 实验部分
2.1仪器与试药 7
2.1.1实验试药 7
2.1.2实验仪器 7
2.2方法与结果 7
2.2.1色谱条件 7
2.2.2对照品溶液的制备 8
2.2.3供试品溶液的制备 8
2.2.4线性关系考察 8
2.2.5精密度试验 10
2.2.6重复性试验 11
2.2.7稳定性试验 12
2.2.8回收率试验 13
2.2.9含量测定 14
2.3讨论 15
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3_5_1_9_1_6_0_7_2
2.2.1色谱条件 7
2.2.2对照品溶液的制备 8
2.2.3供试品溶液的制备 8
2.2.4线性关系考察 8
2.2.5精密度试验 10
2.2.6重复性试验 11
2.2.7稳定性试验 12
2.2.8回收率试验 13
2.2.9含量测定 14
2.3讨论 15
结论 16
参考文献 17
致谢 19
1 绪论
1.1铁棒锤的文献研究
铁棒锤又名小草乌、两头尖、磨三转、乌药、一枝蒿、草芽子、门青、八百棒、铁牛七[1]、雪上一枝蒿[2]、断肠草、黑乌草、榜那、旁阿那保等，来源于毛茛科乌头属植物铁棒锤（A.pendulum Busch）和伏毛铁棒锤(A.flavum Hand.Mazz)的干燥块根[3]。秋季采集，去须根，洗净晒干。伏毛铁棒锤主产于四川西北部,西藏北部，陕西、青海、甘肃、宁夏南部，内蒙古南部等地。铁棒锤主产于西藏、云南西北部、四川西部、青海、甘肃南部、陕西南部及河南西部等地，生于海拔2800～4500m的山地、草坡或林边[4]，为藏、羌、回等民族的习用药。
根据《陕西中草药》中记载铁棒锤是以其块根入药，味辛、苦，性热，有大毒，具有“活血祛瘀，祛风湿，止痛，止血，去腐生肌，消肿败毒，治疗跌打损伤，风湿性关节炎，腰腿疼痛，恶疮，劳伤，无名肿毒，痈肿，冻疮，毒蛇咬伤”等作用[5]。在《北方常用中草药手册》中也记载铁棒锤具有“活血祛瘀，止痛。治风湿关节痛，月经痛”。在《全国中草药名鉴》、《中华本草》、《中药大辞典》、《全国中草药汇编》中均有记载，并有着显著的临床治疗和药理作用。
1.2化学成分研究
关于铁棒锤化学成分的研究，我国20世纪80年代就开始有相关报道，1980年，朱子清等[6]先后从伏毛铁棒锤块根中分离得到两种结晶性生物碱,其一经红外、紫外、核磁共振及其他物理常数证明为乌头碱(Aconitine)；其二为一新生物碱,经理化分析,初步推断其结构应为3乙酰乌头碱(3acetylaconitine),该碱系在乌头属植物中首次被发现。随后去氧乌头碱、雪乌碱（3,13去氧乌头碱)、钠派林碱、华北乌头碱、8去乙酰氧基8乙氧基3乙酰乌头碱、牛七碱、欧乌头碱、尼奥灵、宋果灵、3脱氧乌头碱、3脱氧乌头原碱8亚油酸酯、乌头原碱8亚油酸酯、12表欧乌头碱、6O去甲基尼奥灵等成分也相继被分离鉴定[7]。
在铁棒锤中除了生物碱，还提取分离了多种黄酮苷，其中大部分为新化合物。还有文献报道从乌头属植物中分离得到了黄酮、香豆素、酚性类化合物、酰胺及尿嘧啶等生物碱、多糖、甾体以及脂肪酸类化合物[8]。
1.3毒性及炮制研究
铁棒锤有剧毒，在诸多文献中均有记载，如《陕西中草药》载,铁棒锤“苦辛,热,有大毒”；《中华本草》载，铁棒锤茎叶“苦、辛、温、有毒”，因其所含主要成分的化学结构C18和C14上含酯基，构成了剧毒的双酯型二萜生物碱，而呈现强烈的毒性。乌头碱的中毒剂量因个体不同而存在差异，有的人口服0.2mg即出现中毒症状，中毒量一般为1~2mg，致死量为2~5mg[9]，中毒症状主要表现为口、舌、四肢及全身麻木，痛觉迟钝或消失、流涎、恶心、呕吐、腹痛、心率加快、心律失常、血压下降。重者瞳孔散大、昏迷、休克、呼吸衰竭等。严重者可出现心源性脑缺血综合症[10]。药理学研究表明，乌头碱作用于神经系统和心血管系统，对神经系统的毒性表现为先兴奋后抑制，可降低和抑制窦房结的兴奋性；乌头碱对心肌细胞损伤严重，开放钠离子通道促进细胞膜去极化，提高自律组织快反应细胞的自律性，引起心律失常，对中枢和末梢神经系统也是先兴奋后抑制，使血管运动中枢受抑制，引起血压下降，呼吸抑制，心律失常[11]。
《晶珠本草》记载：“庞阿那保为不流动毒之首,若不炮制去毒,入药甚险”[12]。因其治疗量与中毒剂量非常接近，用量难以掌握，使用中稍有不慎便会引起中毒，因此铁棒锤药材必需经过炮制之后才能用于临床，铁棒锤生品中所含的乌头碱、次乌头碱、新乌头碱等双酯型生物碱，毒性较为猛烈，经炮制后，通过加水、加热处理，使毒性极强的双酯型乌头碱C8位上的乙酰基水解，失去1分子的醋酸，得到苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱等单酯型生物碱，其毒性为双酯型乌头碱的1/50~1/500，达到降低毒性的作用。
铁棒锤为民族习用药，各地炮制方法不尽相同，其藏药传统炮制方法一般是先采用流水漂洗，然后取适量，放入等量的青稞酒中，研磨成粉，放置1天，进行发酵，第2天取出，晒干后称定质量后入药[13]。回药中伏毛铁棒锤的炮制为：(鲜用：取鲜药材置柴草灰中煨热；(干品：除去杂质，用时搞细粉。羌药铁棒锤炮制最优工艺为：取适量干净的河沙(粒度为药典1号筛与2号筛之间，河沙用量以可以完全淹没药材为度)在滚筒式炒药机中加热至200℃，转速约10r/min，
1 绪论
1.1铁棒锤的文献研究 1
1.2化学成分研究 1
1.3毒性及炮制研究 2
1.4药理作用研究 3
1.4.1抗炎作用 3
1.4.2镇痛作用 3
1.4.3局部麻醉作用 4
1.4.4抗肿瘤作用 4
1.4.5对心血管系统的作用 4
1.4.6其他作用 5
1.5临床应用研究 5
2 实验部分
2.1仪器与试药 7
2.1.1实验试药 7
2.1.2实验仪器 7
2.2方法与结果 7
2.2.1色谱条件 7
2.2.2对照品溶液的制备 8
2.2.3供试品溶液的制备 8
2.2.4线性关系考察 8
2.2.5精密度试验 10
2.2.6重复性试验 11
2.2.7稳定性试验 12
2.2.8回收率试验 13
2.2.9含量测定 14
2.3讨论 15
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3_5_1_9_1_6_0_7_2
2.2.1色谱条件 7
2.2.2对照品溶液的制备 8
2.2.3供试品溶液的制备 8
2.2.4线性关系考察 8
2.2.5精密度试验 10
2.2.6重复性试验 11
2.2.7稳定性试验 12
2.2.8回收率试验 13
2.2.9含量测定 14
2.3讨论 15
结论 16
参考文献 17
致谢 19
1 绪论
1.1铁棒锤的文献研究
铁棒锤又名小草乌、两头尖、磨三转、乌药、一枝蒿、草芽子、门青、八百棒、铁牛七[1]、雪上一枝蒿[2]、断肠草、黑乌草、榜那、旁阿那保等，来源于毛茛科乌头属植物铁棒锤（A.pendulum Busch）和伏毛铁棒锤(A.flavum Hand.Mazz)的干燥块根[3]。秋季采集，去须根，洗净晒干。伏毛铁棒锤主产于四川西北部,西藏北部，陕西、青海、甘肃、宁夏南部，内蒙古南部等地。铁棒锤主产于西藏、云南西北部、四川西部、青海、甘肃南部、陕西南部及河南西部等地，生于海拔2800～4500m的山地、草坡或林边[4]，为藏、羌、回等民族的习用药。
根据《陕西中草药》中记载铁棒锤是以其块根入药，味辛、苦，性热，有大毒，具有“活血祛瘀，祛风湿，止痛，止血，去腐生肌，消肿败毒，治疗跌打损伤，风湿性关节炎，腰腿疼痛，恶疮，劳伤，无名肿毒，痈肿，冻疮，毒蛇咬伤”等作用[5]。在《北方常用中草药手册》中也记载铁棒锤具有“活血祛瘀，止痛。治风湿关节痛，月经痛”。在《全国中草药名鉴》、《中华本草》、《中药大辞典》、《全国中草药汇编》中均有记载，并有着显著的临床治疗和药理作用。
1.2化学成分研究
关于铁棒锤化学成分的研究，我国20世纪80年代就开始有相关报道，1980年，朱子清等[6]先后从伏毛铁棒锤块根中分离得到两种结晶性生物碱,其一经红外、紫外、核磁共振及其他物理常数证明为乌头碱(Aconitine)；其二为一新生物碱,经理化分析,初步推断其结构应为3乙酰乌头碱(3acetylaconitine),该碱系在乌头属植物中首次被发现。随后去氧乌头碱、雪乌碱（3,13去氧乌头碱)、钠派林碱、华北乌头碱、8去乙酰氧基8乙氧基3乙酰乌头碱、牛七碱、欧乌头碱、尼奥灵、宋果灵、3脱氧乌头碱、3脱氧乌头原碱8亚油酸酯、乌头原碱8亚油酸酯、12表欧乌头碱、6O去甲基尼奥灵等成分也相继被分离鉴定[7]。
在铁棒锤中除了生物碱，还提取分离了多种黄酮苷，其中大部分为新化合物。还有文献报道从乌头属植物中分离得到了黄酮、香豆素、酚性类化合物、酰胺及尿嘧啶等生物碱、多糖、甾体以及脂肪酸类化合物[8]。
1.3毒性及炮制研究
铁棒锤有剧毒，在诸多文献中均有记载，如《陕西中草药》载,铁棒锤“苦辛,热,有大毒”；《中华本草》载，铁棒锤茎叶“苦、辛、温、有毒”，因其所含主要成分的化学结构C18和C14上含酯基，构成了剧毒的双酯型二萜生物碱，而呈现强烈的毒性。乌头碱的中毒剂量因个体不同而存在差异，有的人口服0.2mg即出现中毒症状，中毒量一般为1~2mg，致死量为2~5mg[9]，中毒症状主要表现为口、舌、四肢及全身麻木，痛觉迟钝或消失、流涎、恶心、呕吐、腹痛、心率加快、心律失常、血压下降。重者瞳孔散大、昏迷、休克、呼吸衰竭等。严重者可出现心源性脑缺血综合症[10]。药理学研究表明，乌头碱作用于神经系统和心血管系统，对神经系统的毒性表现为先兴奋后抑制，可降低和抑制窦房结的兴奋性；乌头碱对心肌细胞损伤严重，开放钠离子通道促进细胞膜去极化，提高自律组织快反应细胞的自律性，引起心律失常，对中枢和末梢神经系统也是先兴奋后抑制，使血管运动中枢受抑制，引起血压下降，呼吸抑制，心律失常[11]。
《晶珠本草》记载：“庞阿那保为不流动毒之首,若不炮制去毒,入药甚险”[12]。因其治疗量与中毒剂量非常接近，用量难以掌握，使用中稍有不慎便会引起中毒，因此铁棒锤药材必需经过炮制之后才能用于临床，铁棒锤生品中所含的乌头碱、次乌头碱、新乌头碱等双酯型生物碱，毒性较为猛烈，经炮制后，通过加水、加热处理，使毒性极强的双酯型乌头碱C8位上的乙酰基水解，失去1分子的醋酸，得到苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱等单酯型生物碱，其毒性为双酯型乌头碱的1/50~1/500，达到降低毒性的作用。
铁棒锤为民族习用药，各地炮制方法不尽相同，其藏药传统炮制方法一般是先采用流水漂洗，然后取适量，放入等量的青稞酒中，研磨成粉，放置1天，进行发酵，第2天取出，晒干后称定质量后入药[13]。回药中伏毛铁棒锤的炮制为：(鲜用：取鲜药材置柴草灰中煨热；(干品：除去杂质，用时搞细粉。羌药铁棒锤炮制最优工艺为：取适量干净的河沙(粒度为药典1号筛与2号筛之间，河沙用量以可以完全淹没药材为度)在滚筒式炒药机中加热至200℃，转速约10r/min，
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