不同品种绞股蓝叶中皂苷的含量比较(附件)
绞股蓝Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino为葫芦科Cucurbitaceae绞股蓝属Gynostemma的多年生草质藤本植物，全草均可入药，性寒、味甘，有清热解毒、止咳祛痰、降压降脂以及提高免疫力等功能。绞股蓝皂苷作为绞股蓝中较高活性成分之一，具有显著的抗氧化、抗肿瘤、提高免疫力作用。本实验在绞股蓝总皂苷提取方法优化的基础上，以安康市平利县不同品系的四倍体绞股蓝（40201、403、404、405、甜味绞股蓝）为材料，利用超声提取技术对其叶中总皂苷进行提取，确定最佳超声提取工艺。 最佳的优化提取工艺为：超声功率300W，提取时间50min ，提取温度60℃，乙醇体积分数60%。该提取方法具有操作简便、提取效率高等优点；五个品种绞股蓝皂苷含量比较：40201＞404＞405＞甜味绞股蓝＞403，表明40201绞股蓝叶皂苷含量最高。 目 录
1 引言
1.1实验目的意义 1 1.2绞股蓝的研究动态 1
1.3绞股蓝的成分 2
1.3.1皂苷 2 1.3.2黄酮 2
1.3.3多糖 2 1.3.4氨基酸与微量元素 2 1.4绞股蓝临床应用进展 3
1.5绞股蓝的药理作用及药用历史. 3 1.5.1绞股蓝的药理作用. 3
1.5.2绞股蓝的药用历史 3 1.6响应面法 4 1.7常见的溶剂提取法 4
1.8超声法 4
2 实验设计
2.1 仪器与设备 5
2.2 实验材料 5
2.3试验方法 5
2.3.1绞股蓝叶总皂苷的提取 5
2.3.2标准曲线的绘制 6
2.4方法学考察 6
2.4.1重复性实验 6
2.4.2稳定性实验 6
2.4.3精密度实验 6
2.4.4加样回收率实验 6
2.5单因素实验 6
2.5.1超声功率对绞股蓝中皂苷提取率的影响 6
2.5.2 提取时间对绞股蓝中皂苷提取率的影响 7
2.5.3温度对绞股蓝中皂苷提取率的影响 7
2.5.4乙醇体积分数对绞股蓝中皂苷提取
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/> 2.4.2稳定性实验 6
2.4.3精密度实验 6
2.4.4加样回收率实验 6
2.5单因素实验 6
2.5.1超声功率对绞股蓝中皂苷提取率的影响 6
2.5.2 提取时间对绞股蓝中皂苷提取率的影响 7
2.5.3温度对绞股蓝中皂苷提取率的影响 7
2.5.4乙醇体积分数对绞股蓝中皂苷提取率的影响 7
2.6响应面法对绞股蓝中皂苷提取条件进行优化 7
2.7测定并比较不同品种绞股蓝叶中皂苷含量 7
2.7.1对照品溶液制备 8
2.7.2供试品溶液制备 8
2.7.3统计学分析 8
3 实验结果
3.1标准曲线 9
3.2方法学考察结果 9 3.2.1重复性实验结果分析 9 3.2.2稳定性实验结果分析 9
3.2.3精密度实验结果分析 9
3.2.4加样回收率实验结果分析 10
3.3单因素实验 10 3.3.1超声功率对皂苷提取率的影响 10
3.3.2提取时间对皂苷提取率的影响 11
3.3.3温度对皂苷提取率的影响 11 3.3.4乙醇体积分数对皂苷提取率的影响 12
3.4响应面法结果 12 3.5响应面法分析 15 3.6不同品种绞股蓝叶中皂苷含量 17 结论 19
参考文献 20
致谢 22
1 引言
1.1实验目的意义
目前，关于不同品种间绞股蓝总皂苷含量比较的研究尚未见文献报道。为进一步评价绞股蓝药材的质量，本实验采用超声提取法，测定绞股蓝叶中总皂苷含量。确定绞股蓝叶中总皂苷超声辅助提取的最佳工艺条件，在最佳工艺条件下，比较不同品种绞股蓝叶中皂苷的含量差异，为考察药材内在质量及资源的开发利用提供依据。
1.2绞股蓝的研究动态
目前全世界绞股蓝属植物有16种2变种[1]，分属于喙果藤亚属（Subgen. Triostellum）和绞股蓝亚属（Subgen. Gynostemma）[2]。我国总共有绞股蓝亚属14种和2变种，特有的有9种和2变种[3]，长梗绞股蓝、绞股蓝、心籽绞股蓝分布比较广，用得最多的是绞股蓝和长梗绞股蓝[4]。国内外均注重研究绞股蓝的多种生物学功效，以体现其广泛的医疗保健价值。
研究绞股蓝种植资源，使中药变得现代化，使中药产业发展的基础性工作变得更快，使中药材生产的规范化、道地性、产业化和可持续发展战略得到实施。育种能否成功，中药材的产量和质量能否提高取决于种植资源的数量和质量[5]。
绞股蓝属植物的分布区域类型属于热带亚洲类型，主要分布于老挝、缅甸、孟加拉、越南、尼泊尔、印尼、朝鲜、新几内亚、日本以及我国秦岭至淮河以南的亚热带和热带地区，如陕西、湖北、福建、河南、江苏、浙江、湖南、甘肃、贵州、四川、云南、海南、山西等地[6]。海拔200 m至3200 m的常绿阔叶林、带雨林、针叶林、、针阔叶混交林、季雨林和山地灌丛是绞股蓝主要生长的地方。与绞股蓝伴生的植物主要有荨麻属、蓼属、乌蔹莓、葎草、千里光以及一些蕨类植物等[78]。
绞股蓝有许多品种，各种绞股蓝所含的有效成分含量各不相同，总皂苷的含量相差很大，绞股蓝的产量也与其所属品种有关。因此，选育优良绞股蓝品种及类型相当重要。
生产优质绞股蓝药材，首先要选择优良的绞股蓝品种，开发绞股蓝产品的过程中，全国已大面积栽培野生绞股蓝。并经多年研究，出现了许多地方品系和栽培类型。陕西安康平利县绞股蓝研究所研究的绞股蓝最为突出，率先在全国选育绞股蓝品种，培育当地的几个优质绞股蓝野生类型，最后形成四倍体系列绞股蓝，因为其抗逆性强、生长速度快、产量高、皂苷含量高和无病虫害等优点而被推广至全国进行大面积种植。
1.3绞股蓝的成分
绞股蓝含有多种药用成分：皂苷、氨基酸、多糖、黄酮、微量元素、甾体和有机酸等，其中对绞股蓝中皂苷，黄酮，多糖，氨基酸与微量元素的分析如下。
1.3.1皂苷
通过对绞股蓝的化学成分的充分研究,目前发现绞股蓝总共含有136种皂苷 。绞股蓝中皂苷的成分和含量与绞股蓝的品种有很大关系，绞股蓝中的皂苷含量是评价绞股蓝质量的一个重要指标[9]，因为绞股蓝皂苷具有较好的药理疗效,因此,国内外都注重绞股蓝皂苷成分的研究。
1.3.2黄酮
黄酮类化合物是绞股蓝中另一大类活性成分，具有抗菌消炎、抗氧化、调节血管渗透性等功效，可治疗心血管疾病[10]。研究表明，黄酮类化合物主要存在于绞股蓝叶肉细胞、叶表皮、地上茎的表皮、叶脉维管束的韧皮部[1112]。
1.3.3多糖
多糖的复杂结构产生多方面生物免疫活性。绞股蓝的叶和茎中都含有半乳糖低聚糖、果糖和葡萄糖，且绞股蓝多糖没有任何毒副作用。研究表明，多糖成分在绞股蓝
1 引言
1.1实验目的意义 1 1.2绞股蓝的研究动态 1
1.3绞股蓝的成分 2
1.3.1皂苷 2 1.3.2黄酮 2
1.3.3多糖 2 1.3.4氨基酸与微量元素 2 1.4绞股蓝临床应用进展 3
1.5绞股蓝的药理作用及药用历史. 3 1.5.1绞股蓝的药理作用. 3
1.5.2绞股蓝的药用历史 3 1.6响应面法 4 1.7常见的溶剂提取法 4
1.8超声法 4
2 实验设计
2.1 仪器与设备 5
2.2 实验材料 5
2.3试验方法 5
2.3.1绞股蓝叶总皂苷的提取 5
2.3.2标准曲线的绘制 6
2.4方法学考察 6
2.4.1重复性实验 6
2.4.2稳定性实验 6
2.4.3精密度实验 6
2.4.4加样回收率实验 6
2.5单因素实验 6
2.5.1超声功率对绞股蓝中皂苷提取率的影响 6
2.5.2 提取时间对绞股蓝中皂苷提取率的影响 7
2.5.3温度对绞股蓝中皂苷提取率的影响 7
2.5.4乙醇体积分数对绞股蓝中皂苷提取
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
/> 2.4.2稳定性实验 6
2.4.3精密度实验 6
2.4.4加样回收率实验 6
2.5单因素实验 6
2.5.1超声功率对绞股蓝中皂苷提取率的影响 6
2.5.2 提取时间对绞股蓝中皂苷提取率的影响 7
2.5.3温度对绞股蓝中皂苷提取率的影响 7
2.5.4乙醇体积分数对绞股蓝中皂苷提取率的影响 7
2.6响应面法对绞股蓝中皂苷提取条件进行优化 7
2.7测定并比较不同品种绞股蓝叶中皂苷含量 7
2.7.1对照品溶液制备 8
2.7.2供试品溶液制备 8
2.7.3统计学分析 8
3 实验结果
3.1标准曲线 9
3.2方法学考察结果 9 3.2.1重复性实验结果分析 9 3.2.2稳定性实验结果分析 9
3.2.3精密度实验结果分析 9
3.2.4加样回收率实验结果分析 10
3.3单因素实验 10 3.3.1超声功率对皂苷提取率的影响 10
3.3.2提取时间对皂苷提取率的影响 11
3.3.3温度对皂苷提取率的影响 11 3.3.4乙醇体积分数对皂苷提取率的影响 12
3.4响应面法结果 12 3.5响应面法分析 15 3.6不同品种绞股蓝叶中皂苷含量 17 结论 19
参考文献 20
致谢 22
1 引言
1.1实验目的意义
目前，关于不同品种间绞股蓝总皂苷含量比较的研究尚未见文献报道。为进一步评价绞股蓝药材的质量，本实验采用超声提取法，测定绞股蓝叶中总皂苷含量。确定绞股蓝叶中总皂苷超声辅助提取的最佳工艺条件，在最佳工艺条件下，比较不同品种绞股蓝叶中皂苷的含量差异，为考察药材内在质量及资源的开发利用提供依据。
1.2绞股蓝的研究动态
目前全世界绞股蓝属植物有16种2变种[1]，分属于喙果藤亚属（Subgen. Triostellum）和绞股蓝亚属（Subgen. Gynostemma）[2]。我国总共有绞股蓝亚属14种和2变种，特有的有9种和2变种[3]，长梗绞股蓝、绞股蓝、心籽绞股蓝分布比较广，用得最多的是绞股蓝和长梗绞股蓝[4]。国内外均注重研究绞股蓝的多种生物学功效，以体现其广泛的医疗保健价值。
研究绞股蓝种植资源，使中药变得现代化，使中药产业发展的基础性工作变得更快，使中药材生产的规范化、道地性、产业化和可持续发展战略得到实施。育种能否成功，中药材的产量和质量能否提高取决于种植资源的数量和质量[5]。
绞股蓝属植物的分布区域类型属于热带亚洲类型，主要分布于老挝、缅甸、孟加拉、越南、尼泊尔、印尼、朝鲜、新几内亚、日本以及我国秦岭至淮河以南的亚热带和热带地区，如陕西、湖北、福建、河南、江苏、浙江、湖南、甘肃、贵州、四川、云南、海南、山西等地[6]。海拔200 m至3200 m的常绿阔叶林、带雨林、针叶林、、针阔叶混交林、季雨林和山地灌丛是绞股蓝主要生长的地方。与绞股蓝伴生的植物主要有荨麻属、蓼属、乌蔹莓、葎草、千里光以及一些蕨类植物等[78]。
绞股蓝有许多品种，各种绞股蓝所含的有效成分含量各不相同，总皂苷的含量相差很大，绞股蓝的产量也与其所属品种有关。因此，选育优良绞股蓝品种及类型相当重要。
生产优质绞股蓝药材，首先要选择优良的绞股蓝品种，开发绞股蓝产品的过程中，全国已大面积栽培野生绞股蓝。并经多年研究，出现了许多地方品系和栽培类型。陕西安康平利县绞股蓝研究所研究的绞股蓝最为突出，率先在全国选育绞股蓝品种，培育当地的几个优质绞股蓝野生类型，最后形成四倍体系列绞股蓝，因为其抗逆性强、生长速度快、产量高、皂苷含量高和无病虫害等优点而被推广至全国进行大面积种植。
1.3绞股蓝的成分
绞股蓝含有多种药用成分：皂苷、氨基酸、多糖、黄酮、微量元素、甾体和有机酸等，其中对绞股蓝中皂苷，黄酮，多糖，氨基酸与微量元素的分析如下。
1.3.1皂苷
通过对绞股蓝的化学成分的充分研究,目前发现绞股蓝总共含有136种皂苷 。绞股蓝中皂苷的成分和含量与绞股蓝的品种有很大关系，绞股蓝中的皂苷含量是评价绞股蓝质量的一个重要指标[9]，因为绞股蓝皂苷具有较好的药理疗效,因此,国内外都注重绞股蓝皂苷成分的研究。
1.3.2黄酮
黄酮类化合物是绞股蓝中另一大类活性成分，具有抗菌消炎、抗氧化、调节血管渗透性等功效，可治疗心血管疾病[10]。研究表明，黄酮类化合物主要存在于绞股蓝叶肉细胞、叶表皮、地上茎的表皮、叶脉维管束的韧皮部[1112]。
1.3.3多糖
多糖的复杂结构产生多方面生物免疫活性。绞股蓝的叶和茎中都含有半乳糖低聚糖、果糖和葡萄糖，且绞股蓝多糖没有任何毒副作用。研究表明，多糖成分在绞股蓝
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