黄芪多糖的提取工艺研究
摘 要本实验采用复合酶法提取黄芪多糖，考察了酶用量、提取时间、提取温度及溶液的PH对黄芪多糖的得率的影响，并在此基础上进行了正交试验，确定其最佳提取工艺为：酶用量为80%，提取时间为45min，提取温度为45℃，pH为5时黄芪多糖得率最高，可达到6.31%。 目 录
1 概论
1.1 研究背景 1
1.2 研究目的意义 1
1.3 黄芪多糖的药理作用 1
1.3.1对免疫系统的作用 1
1.3.2对机体代谢的影响 2
1.3.3对心血管系统的作用 3
1.3.4对应激反应的影响 3
1.3.5抗衰老作用长期服用 4
1.3.6对泌尿系统的作用 4
1.3.7抗肿瘤的作用 4
1.3.8增强免疫功能 4
1.4 黄芪多糖的研究方法 5
1.4.1水提取法 5
1.4.2碱水提取法 5
1.4.3酶提取法 5
1.4.4超声波提取法 5
1.4.5微波提取法 6
2 实验部分
2.2 对照品溶液的制备 7
2.3 供试品溶液的制备 7
2.4 标准曲线的绘制 8
2.5 方法学考察 8
2.5.1精密度考察 8
2.5.2重现性考察 8
2.5.3回收率考察 8
2.5.4含量测定 9
2.6 黄芪多糖提取工艺流程 9
2.6.1黄芪多糖的提取 9
2.7 单因素实验 10
2.7.1酶用量对黄芪多糖得率的影响 10
2.7.2酶作用pH值对黄芪多糖得率的影响 10
2.7.3酶作用温度对黄芪多糖得率的影响 10
2.7.4酶作用时间对黄芪多糖得率的影响 10
2.7.5复合酶提取的正交实验 10
2.8 黄芪多糖得率计算 11
3 实验结果与分析
3.1 多糖含量的测定 12
3.1.1多糖
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
2.7.2酶作用pH值对黄芪多糖得率的影响 10
2.7.3酶作用温度对黄芪多糖得率的影响 10
2.7.4酶作用时间对黄芪多糖得率的影响 10
2.7.5复合酶提取的正交实验 10
2.8 黄芪多糖得率计算 11
3 实验结果与分析
3.1 多糖含量的测定 12
3.1.1多糖含量标准曲线的绘制 12
3.2 单因素试验结果和总结 12
3.2.1酶用量对黄芪多糖得率的影响 12
3.2.2酶作用pH对黄芪多糖得率的影响 13
3.2.3酶作用温度对黄芪多糖得率的影响 14
3.2.4酶作用时间对黄芪多糖得率的影响 15
3.3 复合酶法提取黄芪多糖的正交试验结果与分析 16
3.4 正交试验结果验证 18
3.5 总结 18
结论 19
参考文献 20
致谢 22
1 概论
1.1 研究背景
黄芪为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根。其主要活性成分为多糖、皂苷、黄酮类成分[1]，这些活性成分均有促进抗体生成和免疫反应的作用，黄芪味甘，性温，具有补气固表、利水腿肿、脱毒排脓、生肌等功效[2]。现代医学发现黄芪的药理作用很广，其能增强免疫功能，加强细胞代谢，调节DNA复制、RNA和蛋白质的合成，具有固肾，降压，保肝，抗炎的功能[3]。经现代医学研究表明，黄芪多糖具有多种生物活性，作为免疫增强剂和抗病毒药物在动物养殖业中已广泛应用。
1.2 研究目的意义
从蒙古黄芪中提取的黄芪多糖是一种杂聚糖，由葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖等单糖组成[4]，具有促进免疫提高巨噬细胞活性，抑制EAS，双向调节血糖作用。其分子量小于8万级的多糖可制成静脉注射液，适用于化疗后的滋补，提高人体免疫力。本实验立足于对黄芪研究的同时，采用正交试验方法研究复合酶法在黄芪多糖提取中的应用，并筛选出提取的最佳工艺条件。从而提高黄芪多糖的提取效率，提高产率，降低黄芪多糖的开发成本。
1.3 黄芪多糖的药理作用
1.3.1 对免疫系统的作用
1.3.1.1 对非特异性免疫功能的影响
黄芪多糖可显著增强非特异性免疫功能和体液免疫功能，使小白鼠吞噬绵羊红细胞百分率及指数明显增强，促进血清溶血素形成，提高空斑形成细胞的溶血功能和明显的碳离廓作用、明显增加脾重量。黄芪能促进小鼠淋巴细胞对羊血球的免疫特异玫瑰花结的形成。黄芪多糖能明显提高小鼠的脾脏生成、抗体细胞数、半数溶血值及巨噬细胞吞噬功能[5]。因此可以提示免疫激活剂和环氧化酶抑制剂的组合,可望成为创伤感染药物治疗的新方案。
1.3.1.2 对体液免疫作用
黄芪对正常机体的抗体生成功能有明显促进作用。黄芪在体液免疫，增强单核巨噬细胞的吞噬活性，对体细胞，自然杀伤细胞释放免疫活性物质,诱生干扰素，白细胞介素等多方面表现出多种生理活性。黄芪能增强网状内皮系统的吞噬功能，使巨噬细胞吞噬率及吞噬指数显著上升，对体液免疫、细胞免疫均有促进作用[6]。
1.3.1.3 对细胞免疫的作用黄芪可促进体细胞免疫功能
黄芪多糖可通过调节含量以及促进磷脂酰肌醇代谢，进而提高创伤后活化T淋巴细胞内IL2mRNA及IL2RmRNA的基因转录表达，这可能是黄芪多糖纠正创伤后细胞免疫功能低下的机理之一。黄芪对T细胞及其分泌的细胞因子的调节作用可能与其调节IgG亚类的产生有关。
1.3.1.4 对自然杀伤细胞的影响
黄芪可保护靶细胞抵抗T细胞活性，但其程度不如对T细胞活性的促进作用强。它提高的NK细胞活性效果是通过诱导淋巴细胞产生Ⅱ型干扰素介导素。因而认为NK细胞可能是T细胞的前体细胞，黄芪对NK细胞的影响同它对T细胞的活化作用是一致的。
1.3.1.5 对诱生干扰素的影响
黄芪对干扰素系统有明显的刺激作用，包括自身诱生、促进诱生和活性发挥等3个方面。黄芪自身有一定的抗肿瘤的作用,黄芪多糖(5mg/kg)与IL2/LAK的抗肿瘤作用相似，对IL2/LAK的抗肿瘤效应具有明显的增强作用。
1.3.2 对机体代谢的影响
1.3.2.1 对细胞代谢的影响
通
1 概论
1.1 研究背景 1
1.2 研究目的意义 1
1.3 黄芪多糖的药理作用 1
1.3.1对免疫系统的作用 1
1.3.2对机体代谢的影响 2
1.3.3对心血管系统的作用 3
1.3.4对应激反应的影响 3
1.3.5抗衰老作用长期服用 4
1.3.6对泌尿系统的作用 4
1.3.7抗肿瘤的作用 4
1.3.8增强免疫功能 4
1.4 黄芪多糖的研究方法 5
1.4.1水提取法 5
1.4.2碱水提取法 5
1.4.3酶提取法 5
1.4.4超声波提取法 5
1.4.5微波提取法 6
2 实验部分
2.2 对照品溶液的制备 7
2.3 供试品溶液的制备 7
2.4 标准曲线的绘制 8
2.5 方法学考察 8
2.5.1精密度考察 8
2.5.2重现性考察 8
2.5.3回收率考察 8
2.5.4含量测定 9
2.6 黄芪多糖提取工艺流程 9
2.6.1黄芪多糖的提取 9
2.7 单因素实验 10
2.7.1酶用量对黄芪多糖得率的影响 10
2.7.2酶作用pH值对黄芪多糖得率的影响 10
2.7.3酶作用温度对黄芪多糖得率的影响 10
2.7.4酶作用时间对黄芪多糖得率的影响 10
2.7.5复合酶提取的正交实验 10
2.8 黄芪多糖得率计算 11
3 实验结果与分析
3.1 多糖含量的测定 12
3.1.1多糖
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2.7.2酶作用pH值对黄芪多糖得率的影响 10
2.7.3酶作用温度对黄芪多糖得率的影响 10
2.7.4酶作用时间对黄芪多糖得率的影响 10
2.7.5复合酶提取的正交实验 10
2.8 黄芪多糖得率计算 11
3 实验结果与分析
3.1 多糖含量的测定 12
3.1.1多糖含量标准曲线的绘制 12
3.2 单因素试验结果和总结 12
3.2.1酶用量对黄芪多糖得率的影响 12
3.2.2酶作用pH对黄芪多糖得率的影响 13
3.2.3酶作用温度对黄芪多糖得率的影响 14
3.2.4酶作用时间对黄芪多糖得率的影响 15
3.3 复合酶法提取黄芪多糖的正交试验结果与分析 16
3.4 正交试验结果验证 18
3.5 总结 18
结论 19
参考文献 20
致谢 22
1 概论
1.1 研究背景
黄芪为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根。其主要活性成分为多糖、皂苷、黄酮类成分[1]，这些活性成分均有促进抗体生成和免疫反应的作用，黄芪味甘，性温，具有补气固表、利水腿肿、脱毒排脓、生肌等功效[2]。现代医学发现黄芪的药理作用很广，其能增强免疫功能，加强细胞代谢，调节DNA复制、RNA和蛋白质的合成，具有固肾，降压，保肝，抗炎的功能[3]。经现代医学研究表明，黄芪多糖具有多种生物活性，作为免疫增强剂和抗病毒药物在动物养殖业中已广泛应用。
1.2 研究目的意义
从蒙古黄芪中提取的黄芪多糖是一种杂聚糖，由葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖等单糖组成[4]，具有促进免疫提高巨噬细胞活性，抑制EAS，双向调节血糖作用。其分子量小于8万级的多糖可制成静脉注射液，适用于化疗后的滋补，提高人体免疫力。本实验立足于对黄芪研究的同时，采用正交试验方法研究复合酶法在黄芪多糖提取中的应用，并筛选出提取的最佳工艺条件。从而提高黄芪多糖的提取效率，提高产率，降低黄芪多糖的开发成本。
1.3 黄芪多糖的药理作用
1.3.1 对免疫系统的作用
1.3.1.1 对非特异性免疫功能的影响
黄芪多糖可显著增强非特异性免疫功能和体液免疫功能，使小白鼠吞噬绵羊红细胞百分率及指数明显增强，促进血清溶血素形成，提高空斑形成细胞的溶血功能和明显的碳离廓作用、明显增加脾重量。黄芪能促进小鼠淋巴细胞对羊血球的免疫特异玫瑰花结的形成。黄芪多糖能明显提高小鼠的脾脏生成、抗体细胞数、半数溶血值及巨噬细胞吞噬功能[5]。因此可以提示免疫激活剂和环氧化酶抑制剂的组合,可望成为创伤感染药物治疗的新方案。
1.3.1.2 对体液免疫作用
黄芪对正常机体的抗体生成功能有明显促进作用。黄芪在体液免疫，增强单核巨噬细胞的吞噬活性，对体细胞，自然杀伤细胞释放免疫活性物质,诱生干扰素，白细胞介素等多方面表现出多种生理活性。黄芪能增强网状内皮系统的吞噬功能，使巨噬细胞吞噬率及吞噬指数显著上升，对体液免疫、细胞免疫均有促进作用[6]。
1.3.1.3 对细胞免疫的作用黄芪可促进体细胞免疫功能
黄芪多糖可通过调节含量以及促进磷脂酰肌醇代谢，进而提高创伤后活化T淋巴细胞内IL2mRNA及IL2RmRNA的基因转录表达，这可能是黄芪多糖纠正创伤后细胞免疫功能低下的机理之一。黄芪对T细胞及其分泌的细胞因子的调节作用可能与其调节IgG亚类的产生有关。
1.3.1.4 对自然杀伤细胞的影响
黄芪可保护靶细胞抵抗T细胞活性，但其程度不如对T细胞活性的促进作用强。它提高的NK细胞活性效果是通过诱导淋巴细胞产生Ⅱ型干扰素介导素。因而认为NK细胞可能是T细胞的前体细胞，黄芪对NK细胞的影响同它对T细胞的活化作用是一致的。
1.3.1.5 对诱生干扰素的影响
黄芪对干扰素系统有明显的刺激作用，包括自身诱生、促进诱生和活性发挥等3个方面。黄芪自身有一定的抗肿瘤的作用,黄芪多糖(5mg/kg)与IL2/LAK的抗肿瘤作用相似，对IL2/LAK的抗肿瘤效应具有明显的增强作用。
1.3.2 对机体代谢的影响
1.3.2.1 对细胞代谢的影响
通
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