女贞子中总黄酮提取工艺的研究
摘 要本论文的目的为了优化中药女贞子（Fructus Ligustri Lucidi）中总黄酮的提取工艺。采用的方法是设计单因素试验，然后通过正交试验、方差分析对乙醇回流法提取女贞子总黄酮的工艺进行优化。最后得出的最佳提取工艺条件为：5.0g干燥女贞子粉末，乙醇体积分数60%，料液比1:50（M/V），提取温度80℃，提取时间2.0h。在这个提取工艺条件下，总黄酮提取率最高，为6.195%。目 录
1 文献综述
1.1 本草考证 1
1.2 资源分布 1
1.3 主要化学成分及生物活性 2
1.3.1 黄酮类 2
1.3.2 三萜类 3
1.3.3 多糖类 3
1.4 本课题研究的意义 4
2 实验研究
2.1 实验药材、试剂与仪器 5
2.1.1 药材 5
2.1.2 试剂、仪器 5
2.2 试验方法 5
2.2.1 女贞子黄酮提取液的制备 5
2.2.2 女贞子总黄酮类化合物的定性鉴定 5
2.2.3 单因素试验 6
2.2.4 正交试验 7
2.2.5 优化条件的验证试验 7
2.2.6 女贞子总黄酮类化合物的定量鉴定 8
2.3 结果与分析 9
2.3.1 黄酮类化合物的定性鉴定 9
2.3.2 单因素试验结果 9
2.3.3 正交试验结果 11
2.3.4 实验结果分析 12
2.3.5 方法学考察 13
结论 16
参考文献 16
致 谢 18
1 文献综述
1.1 本草考证
中药女贞子（Fructus Ligustri Lucidi）又称女贞实、冬青子、白蜡树子、鼠梓子和虫树，为木犀科常绿乔木女贞（Ligustrum lucidum Ait.）的干燥成熟果实。（见图1.1）味甘苦，性凉，归肝、肾经。具有滋补肝肾、乌须明目，用于肝肾阴虚、腰酸耳鸣、须发早白、视物昏暗、阴虚发热等病症[1]。女贞子作为中药应用已有2000多
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述
1.1 本草考证
中药女贞子（Fructus Ligustri Lucidi）又称女贞实、冬青子、白蜡树子、鼠梓子和虫树，为木犀科常绿乔木女贞（Ligustrum lucidum Ait.）的干燥成熟果实。（见图1.1）味甘苦，性凉，归肝、肾经。具有滋补肝肾、乌须明目，用于肝肾阴虚、腰酸耳鸣、须发早白、视物昏暗、阴虚发热等病症[1]。女贞子作为中药应用已有2000多年的历史，始载于《神农本草经》：“主补中、安五脏、养精神、除百疾，久服肥健，轻身不老。”《本草纲目》载：“强阴、健腰膝，交白发，明目。”《中国医药大辞典》载：“女贞享天地至阴之气，阴中之阴，入肾经，为除效益精之良品。”现代医学研究表明，女贞子含有抗癌、抗肿瘤及提高机体耐力、耐缺氧力和增强机体免疫力的活性物质，主要用于治疗头晕耳鸣、腰膝酸痛、视物昏花、须发早白、失眠多梦及慢性支气管炎等疾病。还可以抑制幽门螺杆菌的作用，可以治疗胃病，还具有抑制嘌呤代谢异常，主要用于痛风和高尿酸血症的治疗。
图1.1 女贞子
1.2 资源分布
女贞子在我国主要为野生药材，资源丰富，分布地区较广，主产于华东、中南、西南等地区。全国除野生药材资源外也有栽培品，湖南、河南、四川、江苏和浙江等地均能种植，主产于浙江金华、兰溪，江苏淮阴、镇江，湖南衡阳，四川简阳、安岳等地区。其中四川简阳、安岳两地所产女贞子品质较好，其它产区虽然也有资源，但其采摘加工还没有形成规模，可供商品较少。
1.3 主要化学成分及生物活性
女贞子中含有的生物活性成分十分丰富，可以分为黄酮类、多糖类、女贞苷类、三萜类、挥发油、氨基酸蛋白质类、矿物元素和部分其他生物活性物质等[2]。其中研究比较多的成分主要有下列几种。
1.3.1 黄酮类
女贞子中的黄酮类物质主要有木犀草素（luteolin）、木犀草素7OβD葡萄糖苷（luteolin7OβDglucoside）、芦丁（rutin）、芹菜素（apigenin）、槲皮素（quercetin）、芹菜素7OβD吡喃葡萄糖苷（cosmossin）六类[3]。大量研究和实验表明，黄酮类化合物具有抗自由基、抗氧化、抗癌、抗菌、抗病毒、抗炎症、抗过敏、抗糖尿病并发症等多种生理活性及药理作用，并且无毒无害，对人类的肿瘤，衰老，心血管疾病的治疗和预防有重要意义[45]。
1.3.1.1 抗氧化作用
大量的研究发现，天然植物中的黄酮类化合物具有抗氧化的作用。王静和刘大川研究还发现紫苏叶中的黄酮类化合物对超氧阴离子和过氧化氢有很好的清除的能力，并且还有较好的还原能力[6]。
1.3.1.2 抗肿瘤功能
黄酮类化合物具有抗肿瘤的作用。李伟东等对人体重的肝癌细胞进行体外实验，结果发现刺果甘草重的活性成分美迪紫檀素、莫紫檀素都具有较好的杀灭人肝癌细胞的作用，并且美迪紫檀素的杀灭作用要强于莫紫檀素[7]。黄酮类化合物抗肿瘤的机制主要有三种：一是通过直接杀灭肿瘤细胞，阻止肿瘤细胞分裂繁殖而达到抗肿瘤的作用；二是通过增强其他物质的活性间接地杀死肿瘤细胞，从而发挥抗肿瘤作用；三是减小甚至消除一些化学致癌物质的致癌毒性来发挥抗肿瘤作用。
1.3.1.3 抗菌消炎作用
银杏叶中的黄酮提取物具有抗菌、消炎的作用，可用于烧伤、烫伤、脓毒病胰腺炎的急救作用。
1.3.1.4 对心血管方面的作用
1929年发现槐花中含有的芦丁是降低血管通透性，防止毛细血管脆性的活性化合物。从银杏叶中提取的黄酮类化合物用于豚鼠离体心脏灌流，会引起冠状血管扩张，并对大鼠后肢血管有扩张作用[8]。
1.3.2 三萜类
女贞子三萜类物质中的代表活性成分为齐墩果酸，是五环三萜类化合物，又名土当归酸。纯品为白色针状结晶，无色、无味、无臭、不溶于水，可溶于甲醇、乙醇、氯仿、乙醚、丙酮等,主要是以游离的形式存在于女贞子中[9],是我国首次从植物中提取出来的、用于治疗急性黄疸型肝炎和慢性病毒性肝炎效果较好的药物。
1.3.2.1 保肝作用
齐
1 文献综述
1.1 本草考证 1
1.2 资源分布 1
1.3 主要化学成分及生物活性 2
1.3.1 黄酮类 2
1.3.2 三萜类 3
1.3.3 多糖类 3
1.4 本课题研究的意义 4
2 实验研究
2.1 实验药材、试剂与仪器 5
2.1.1 药材 5
2.1.2 试剂、仪器 5
2.2 试验方法 5
2.2.1 女贞子黄酮提取液的制备 5
2.2.2 女贞子总黄酮类化合物的定性鉴定 5
2.2.3 单因素试验 6
2.2.4 正交试验 7
2.2.5 优化条件的验证试验 7
2.2.6 女贞子总黄酮类化合物的定量鉴定 8
2.3 结果与分析 9
2.3.1 黄酮类化合物的定性鉴定 9
2.3.2 单因素试验结果 9
2.3.3 正交试验结果 11
2.3.4 实验结果分析 12
2.3.5 方法学考察 13
结论 16
参考文献 16
致 谢 18
1 文献综述
1.1 本草考证
中药女贞子（Fructus Ligustri Lucidi）又称女贞实、冬青子、白蜡树子、鼠梓子和虫树，为木犀科常绿乔木女贞（Ligustrum lucidum Ait.）的干燥成熟果实。（见图1.1）味甘苦，性凉，归肝、肾经。具有滋补肝肾、乌须明目，用于肝肾阴虚、腰酸耳鸣、须发早白、视物昏暗、阴虚发热等病症[1]。女贞子作为中药应用已有2000多
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3 5 1 9 1 6 0 7 2
述
1.1 本草考证
中药女贞子（Fructus Ligustri Lucidi）又称女贞实、冬青子、白蜡树子、鼠梓子和虫树，为木犀科常绿乔木女贞（Ligustrum lucidum Ait.）的干燥成熟果实。（见图1.1）味甘苦，性凉，归肝、肾经。具有滋补肝肾、乌须明目，用于肝肾阴虚、腰酸耳鸣、须发早白、视物昏暗、阴虚发热等病症[1]。女贞子作为中药应用已有2000多年的历史，始载于《神农本草经》：“主补中、安五脏、养精神、除百疾，久服肥健，轻身不老。”《本草纲目》载：“强阴、健腰膝，交白发，明目。”《中国医药大辞典》载：“女贞享天地至阴之气，阴中之阴，入肾经，为除效益精之良品。”现代医学研究表明，女贞子含有抗癌、抗肿瘤及提高机体耐力、耐缺氧力和增强机体免疫力的活性物质，主要用于治疗头晕耳鸣、腰膝酸痛、视物昏花、须发早白、失眠多梦及慢性支气管炎等疾病。还可以抑制幽门螺杆菌的作用，可以治疗胃病，还具有抑制嘌呤代谢异常，主要用于痛风和高尿酸血症的治疗。
图1.1 女贞子
1.2 资源分布
女贞子在我国主要为野生药材，资源丰富，分布地区较广，主产于华东、中南、西南等地区。全国除野生药材资源外也有栽培品，湖南、河南、四川、江苏和浙江等地均能种植，主产于浙江金华、兰溪，江苏淮阴、镇江，湖南衡阳，四川简阳、安岳等地区。其中四川简阳、安岳两地所产女贞子品质较好，其它产区虽然也有资源，但其采摘加工还没有形成规模，可供商品较少。
1.3 主要化学成分及生物活性
女贞子中含有的生物活性成分十分丰富，可以分为黄酮类、多糖类、女贞苷类、三萜类、挥发油、氨基酸蛋白质类、矿物元素和部分其他生物活性物质等[2]。其中研究比较多的成分主要有下列几种。
1.3.1 黄酮类
女贞子中的黄酮类物质主要有木犀草素（luteolin）、木犀草素7OβD葡萄糖苷（luteolin7OβDglucoside）、芦丁（rutin）、芹菜素（apigenin）、槲皮素（quercetin）、芹菜素7OβD吡喃葡萄糖苷（cosmossin）六类[3]。大量研究和实验表明，黄酮类化合物具有抗自由基、抗氧化、抗癌、抗菌、抗病毒、抗炎症、抗过敏、抗糖尿病并发症等多种生理活性及药理作用，并且无毒无害，对人类的肿瘤，衰老，心血管疾病的治疗和预防有重要意义[45]。
1.3.1.1 抗氧化作用
大量的研究发现，天然植物中的黄酮类化合物具有抗氧化的作用。王静和刘大川研究还发现紫苏叶中的黄酮类化合物对超氧阴离子和过氧化氢有很好的清除的能力，并且还有较好的还原能力[6]。
1.3.1.2 抗肿瘤功能
黄酮类化合物具有抗肿瘤的作用。李伟东等对人体重的肝癌细胞进行体外实验，结果发现刺果甘草重的活性成分美迪紫檀素、莫紫檀素都具有较好的杀灭人肝癌细胞的作用，并且美迪紫檀素的杀灭作用要强于莫紫檀素[7]。黄酮类化合物抗肿瘤的机制主要有三种：一是通过直接杀灭肿瘤细胞，阻止肿瘤细胞分裂繁殖而达到抗肿瘤的作用；二是通过增强其他物质的活性间接地杀死肿瘤细胞，从而发挥抗肿瘤作用；三是减小甚至消除一些化学致癌物质的致癌毒性来发挥抗肿瘤作用。
1.3.1.3 抗菌消炎作用
银杏叶中的黄酮提取物具有抗菌、消炎的作用，可用于烧伤、烫伤、脓毒病胰腺炎的急救作用。
1.3.1.4 对心血管方面的作用
1929年发现槐花中含有的芦丁是降低血管通透性，防止毛细血管脆性的活性化合物。从银杏叶中提取的黄酮类化合物用于豚鼠离体心脏灌流，会引起冠状血管扩张，并对大鼠后肢血管有扩张作用[8]。
1.3.2 三萜类
女贞子三萜类物质中的代表活性成分为齐墩果酸，是五环三萜类化合物，又名土当归酸。纯品为白色针状结晶，无色、无味、无臭、不溶于水，可溶于甲醇、乙醇、氯仿、乙醚、丙酮等,主要是以游离的形式存在于女贞子中[9],是我国首次从植物中提取出来的、用于治疗急性黄疸型肝炎和慢性病毒性肝炎效果较好的药物。
1.3.2.1 保肝作用
齐
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