铁筷子总皂苷提取工艺研究(附件)
摘 要铁筷子为毛茛科铁筷子属植物，是秦巴山区特有的药用植物资源。本文对铁筷子的化学成分进行了深入系统的研究，总结了铁筷子属药用植物的化学成分，并对其药理研究进展做了简要综述。本文实验分别对超声波提取铁筷子总皂苷以及LSA-30型大孔吸附树脂分离铁筷子总皂苷两种方法进行了研究比较，其中超声波提取铁筷子总皂苷采用的是正交设计的方法，LSA-30型大孔吸附树脂采用的是高氯酸法进行的研究。结果表明：（1）LSA-30型大孔吸附树脂具有较佳的吸附能力，比超声波提取铁筷子总皂苷的方法更为优异；（2）其吸附分离铁筷子总皂苷的适宜条件为：上样浓度60mg/mL，吸附流速2.0BV/h，洗脱剂为体积分数30%-95%的乙醇，洗脱速度1.0BV/h，NaCl为0.5mol/mL。95%乙醇洗脱物的总皂苷含量大于60%。 目 录
1 绪论
2 铁筷子研究现状
2.1 国内外研究发展现状 2
2.2 铁筷子的化学成分研究 2
2.3 铁筷子皂苷的药理作用 3
2.4 中药皂苷的提取工艺 3
2.5 研究内容的目的及意义 4
2.6 前景展望 4
3 实验内容与方法
3.1 材料、试剂与仪器 5
3.1.1植物材料 5
3.1.2试剂 5
3.1.3仪器 5
3.2 铁筷子化学成分的预试验 5
3.2.1冷水提取物 5
3.2.2热水提取物 5
3.2.3石油醚提取液和乙酸乙酯提取液 5
3.2.4乙醇提取物 6
3.2.5酸性乙醇溶液 6
3.3 大孔树脂分离铁筷子总皂苷的研究 7
3.3.1甾体皂苷测定方法的研究 7
3.3.2大孔树脂分离铁筷子中甾体皂苷的研究 7
3.4 正交设计优选铁筷子甾体皂苷成分的超声提取工艺 8
3.4.1超声提取方法 8
3.4.2铁筷子总皂苷含量测定 8
3.4.3正交试验结果分析 9
3.5
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
> 3.3 大孔树脂分离铁筷子总皂苷的研究 7
3.3.1甾体皂苷测定方法的研究 7
3.3.2大孔树脂分离铁筷子中甾体皂苷的研究 7
3.4 正交设计优选铁筷子甾体皂苷成分的超声提取工艺 8
3.4.1超声提取方法 8
3.4.2铁筷子总皂苷含量测定 8
3.4.3正交试验结果分析 9
3.5 铁筷子化学成分的预试结果 10
3.6 大孔吸附树脂分离富集铁筷子总皂苷的研究 10
3.6.1甾体皂苷定量测定方法的研究 10
3.6.2显色稳定性试验 11
3.7 大孔吸附树脂的分离及富集铁筷子中的甾体皂苷的研究 11
3.7.1大孔吸附树脂类型的选择 11
3.7.2LSA30大孔树脂动态吸附解吸影响因素的考察 13
3.8 单因素对铁筷子总皂苷提取量的影响 15
3.8.1乙醇的浓度对总皂苷提取量的影响 15
3.8.2液料比对总皂苷提取量的影响 16
3.8.3提取温度对总皂苷提取量的影响 16
3.8.4提取时间对总皂苷提取量的影响 16
4 分析与讨论
4.1 乙醇的浓度对总皂苷提取量的影响 17
4.2 液料比对总皂苷提取量的影响 17
4.3 提取温度对总皂苷提取量的影响 17
4.4 提取时间对总皂苷提取量的影响 17
结论 18
参考文献 19
致谢 21
1 绪论
铁筷子是毛茛科铁筷子属多年生草本植物。其根茎呈圆柱形，稍扁，长2.54.5cm，形状较粗的通常会有分枝。铁筷子断面常有裂隙，横截面可以看出维管束点呈环状排列，它的根茎上附着有多数圆柱形细根，细根的表面是黑褐色，形态均匀，直径约在0.62.0mm左右。铁筷子在早春2月开花，4月结果，5月种子成熟。铁筷子主要生长区为秦岭山区的南北坡海拔为11003100m的灌木丛中，是陕西太白山地区特有的药物[1]。
铁筷子性寒味苦，有小毒，具有清热解毒，活血化瘀，消肿止痛功效，常用于治疗尿路疾病及跌打损伤等症。此外，它颜色美丽，也一直被用来作为观赏花卉。陕产铁筷子是陕西太白著名的“七药"之一，常被当地药农采集入药，疗效显著，倍受用药者喜爱。民间常将铁筷子根及根茎入药来治疗跌打损伤，活血化瘀、散结止痛[2]。经导师走访调研，在西安周边的县、市，特别是在太白县、眉县、周至县等部分地区，民间常用它来治疗泌尿系统疾病及癌症，效果显著[3]。人们正是看中了铁筷子的这些奇特功效，想要继续加大发挥它的功效，开始了进一步研究和利用这一珍贵资源，本课题对陕西太白的铁筷子主要活性成分一铁筷子皂苷的提取工艺进行了研究。
2 铁筷子研究现状
2.1 国内外研究发展现状
毛茛科铁筷子Hellebours属铁筷子全球约有25种，其主要分布在亚洲的西部地区以及欧洲的东南部地区。原本该药物属于野生药材，在最近一段时间当中已经转变为家种，并作为观赏植物进行种植。对于铁筷子当中化学成分方面的研究，最早起步于上世纪六十年代的时候。当时国外有文章称 [4]同属植物嚏根草的根部，存在着多种成分，包括强心甙嚏根草甙、嚏根草甙元、嚏根草毒甙和嚏根草毒素；杨建等[5，6]人通过大孔树脂进行研究，从而在根茎当中成功的分离出来铁筷子里面的皂苷，同时发现其中包括了十二个化合物成本，具体而言有下列几项：其一为β谷甾醇；其二为正十八烷酸；其三为4苹果酸乙脂；其四为2正丁基3甲基琥珀酸；其五为嚏根草因；其六为4羟基3甲氧基苯甲酸；其七为4羟基苯乙醇；其八为槲皮素；其九为琥珀酸；其十为葡萄糖；其十一为5羟甲基糠醛；最后一个则是嚏根草因3OαL鼠李糖苷。张艳红等人[7]针对铁筷子的格局进行提取研究，从中间发现了九个化合物。而最近一段时间当中，针对其药理方面的探讨日益增加。有文章称[8，9]同属植物嚏根草中嚏根草毒甙其具备着标准的洋地黄样方面的强心效果，对于粘膜有着较强的刺激，在离心蛙体之上，其可以进一步提升毒性。国外的有关研究结论显示，嚏根草甙和嚏根草甙元可以在相当程度上防止皮癌的进一步扩散，同时使得整体的动脉以及血管进一步收缩。但是使用剂量过大，则会带来胃部炎症以及眩晕的出现，甚至会导致痉挛以及死亡等等；而新鲜的嚏根草若是在手足部位进行施用，那么则会带来皮炎以及肿泡；杨永健[10]的研究结论显示，铁筷子的萃取物对于胃癌以及白细胞有着良好的辅助治疗效果；刘昕等人[11，12]对于铁筷子在肿瘤方面的应用进行详细的探讨，并明确其优良的免疫状况；程绍瑜[13]等人研究报道铁筷子甙具有强心作用，其生物活性比其他的国产强心甙高。在上述研究的基础上，能够确定该药材可以治疗肿瘤、抗病毒，并在着强心等方面具有很好的疗效[14]。
1 绪论
2 铁筷子研究现状
2.1 国内外研究发展现状 2
2.2 铁筷子的化学成分研究 2
2.3 铁筷子皂苷的药理作用 3
2.4 中药皂苷的提取工艺 3
2.5 研究内容的目的及意义 4
2.6 前景展望 4
3 实验内容与方法
3.1 材料、试剂与仪器 5
3.1.1植物材料 5
3.1.2试剂 5
3.1.3仪器 5
3.2 铁筷子化学成分的预试验 5
3.2.1冷水提取物 5
3.2.2热水提取物 5
3.2.3石油醚提取液和乙酸乙酯提取液 5
3.2.4乙醇提取物 6
3.2.5酸性乙醇溶液 6
3.3 大孔树脂分离铁筷子总皂苷的研究 7
3.3.1甾体皂苷测定方法的研究 7
3.3.2大孔树脂分离铁筷子中甾体皂苷的研究 7
3.4 正交设计优选铁筷子甾体皂苷成分的超声提取工艺 8
3.4.1超声提取方法 8
3.4.2铁筷子总皂苷含量测定 8
3.4.3正交试验结果分析 9
3.5
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
> 3.3 大孔树脂分离铁筷子总皂苷的研究 7
3.3.1甾体皂苷测定方法的研究 7
3.3.2大孔树脂分离铁筷子中甾体皂苷的研究 7
3.4 正交设计优选铁筷子甾体皂苷成分的超声提取工艺 8
3.4.1超声提取方法 8
3.4.2铁筷子总皂苷含量测定 8
3.4.3正交试验结果分析 9
3.5 铁筷子化学成分的预试结果 10
3.6 大孔吸附树脂分离富集铁筷子总皂苷的研究 10
3.6.1甾体皂苷定量测定方法的研究 10
3.6.2显色稳定性试验 11
3.7 大孔吸附树脂的分离及富集铁筷子中的甾体皂苷的研究 11
3.7.1大孔吸附树脂类型的选择 11
3.7.2LSA30大孔树脂动态吸附解吸影响因素的考察 13
3.8 单因素对铁筷子总皂苷提取量的影响 15
3.8.1乙醇的浓度对总皂苷提取量的影响 15
3.8.2液料比对总皂苷提取量的影响 16
3.8.3提取温度对总皂苷提取量的影响 16
3.8.4提取时间对总皂苷提取量的影响 16
4 分析与讨论
4.1 乙醇的浓度对总皂苷提取量的影响 17
4.2 液料比对总皂苷提取量的影响 17
4.3 提取温度对总皂苷提取量的影响 17
4.4 提取时间对总皂苷提取量的影响 17
结论 18
参考文献 19
致谢 21
1 绪论
铁筷子是毛茛科铁筷子属多年生草本植物。其根茎呈圆柱形，稍扁，长2.54.5cm，形状较粗的通常会有分枝。铁筷子断面常有裂隙，横截面可以看出维管束点呈环状排列，它的根茎上附着有多数圆柱形细根，细根的表面是黑褐色，形态均匀，直径约在0.62.0mm左右。铁筷子在早春2月开花，4月结果，5月种子成熟。铁筷子主要生长区为秦岭山区的南北坡海拔为11003100m的灌木丛中，是陕西太白山地区特有的药物[1]。
铁筷子性寒味苦，有小毒，具有清热解毒，活血化瘀，消肿止痛功效，常用于治疗尿路疾病及跌打损伤等症。此外，它颜色美丽，也一直被用来作为观赏花卉。陕产铁筷子是陕西太白著名的“七药"之一，常被当地药农采集入药，疗效显著，倍受用药者喜爱。民间常将铁筷子根及根茎入药来治疗跌打损伤，活血化瘀、散结止痛[2]。经导师走访调研，在西安周边的县、市，特别是在太白县、眉县、周至县等部分地区，民间常用它来治疗泌尿系统疾病及癌症，效果显著[3]。人们正是看中了铁筷子的这些奇特功效，想要继续加大发挥它的功效，开始了进一步研究和利用这一珍贵资源，本课题对陕西太白的铁筷子主要活性成分一铁筷子皂苷的提取工艺进行了研究。
2 铁筷子研究现状
2.1 国内外研究发展现状
毛茛科铁筷子Hellebours属铁筷子全球约有25种，其主要分布在亚洲的西部地区以及欧洲的东南部地区。原本该药物属于野生药材，在最近一段时间当中已经转变为家种，并作为观赏植物进行种植。对于铁筷子当中化学成分方面的研究，最早起步于上世纪六十年代的时候。当时国外有文章称 [4]同属植物嚏根草的根部，存在着多种成分，包括强心甙嚏根草甙、嚏根草甙元、嚏根草毒甙和嚏根草毒素；杨建等[5，6]人通过大孔树脂进行研究，从而在根茎当中成功的分离出来铁筷子里面的皂苷，同时发现其中包括了十二个化合物成本，具体而言有下列几项：其一为β谷甾醇；其二为正十八烷酸；其三为4苹果酸乙脂；其四为2正丁基3甲基琥珀酸；其五为嚏根草因；其六为4羟基3甲氧基苯甲酸；其七为4羟基苯乙醇；其八为槲皮素；其九为琥珀酸；其十为葡萄糖；其十一为5羟甲基糠醛；最后一个则是嚏根草因3OαL鼠李糖苷。张艳红等人[7]针对铁筷子的格局进行提取研究，从中间发现了九个化合物。而最近一段时间当中，针对其药理方面的探讨日益增加。有文章称[8，9]同属植物嚏根草中嚏根草毒甙其具备着标准的洋地黄样方面的强心效果，对于粘膜有着较强的刺激，在离心蛙体之上，其可以进一步提升毒性。国外的有关研究结论显示，嚏根草甙和嚏根草甙元可以在相当程度上防止皮癌的进一步扩散，同时使得整体的动脉以及血管进一步收缩。但是使用剂量过大，则会带来胃部炎症以及眩晕的出现，甚至会导致痉挛以及死亡等等；而新鲜的嚏根草若是在手足部位进行施用，那么则会带来皮炎以及肿泡；杨永健[10]的研究结论显示，铁筷子的萃取物对于胃癌以及白细胞有着良好的辅助治疗效果；刘昕等人[11，12]对于铁筷子在肿瘤方面的应用进行详细的探讨，并明确其优良的免疫状况；程绍瑜[13]等人研究报道铁筷子甙具有强心作用，其生物活性比其他的国产强心甙高。在上述研究的基础上，能够确定该药材可以治疗肿瘤、抗病毒，并在着强心等方面具有很好的疗效[14]。
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