决明子中大黄酸和芦荟大黄素的含量测定
摘 要决明子是一种常用的中药材，其主要成分为蒽醌类化合物。本实验建立高效液相色谱法（HPLC）同时测定决明子中蒽醌类成分大黄酸和芦荟大黄素含量的方法。以甲醇为溶剂回流提取，经液相色谱分离，与混合对照品进入高效液相色谱仪检测，绘制标准曲线，进行精密度、重复性、稳定性、加样回收率实验，同时对已建立的定量方法进行验证。结果表明大黄酸和芦荟大黄素基本达到基线分离；大黄酸和芦荟大黄素的浓度分别在4.00~24.00μg·ml-1，6.00~36.00μg·ml-1范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9987，r=0.9995)；大黄酸和芦荟大黄素的平均加样回收率分别为100.39%(RSD1.4%)，99.48%(RSD1.1%)。本论文所建立的高效液相色谱法稳定可靠，简便可行，可用于决明子中蒽醌类成分的定量分析，为决明子药材的质量评价和质量控制奠定良好的基础。目 录
引 言 1
1 概述 2
1.1 决明子的化学成分 3
1.2 决明子的药理作用 3
1.2.1 护眼作用 3
1.2.2 泻下作用 3
1.2.3 降压作用 4
1.2.4 调脂作用 4
1.2.5 保肝作用 4
1.2.6 抗菌作用 5
1.2.7 免疫作用 5
1.3 决明子蒽醌类含量测定的方法 6
1.3.1 紫外可见分光光度法 6
1.3.2 薄层色谱扫描法(TLC) 6
1.3.3 高效毛细管电泳法 6
1.3.4 高效液相色谱法(HPLC) 7
1.3.5 超临界CO2流体萃取法（SFE） 7
1.4 小结 7
2 实验内容
2.1 仪器与试药 9
2.2 方法与结果 9
2.2.1 混合对照品储备液的配制 9
2.2.2 供试品溶液的配制 9
2.2.3 色谱条件 9
2.2.4 线性关系考察 10
2.2.5 精密度试验 11
2.2.6 重复性试验 12
2.2.7 稳定性试验 12
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
/> 2.1 仪器与试药 9
2.2 方法与结果 9
2.2.1 混合对照品储备液的配制 9
2.2.2 供试品溶液的配制 9
2.2.3 色谱条件 9
2.2.4 线性关系考察 10
2.2.5 精密度试验 11
2.2.6 重复性试验 12
2.2.7 稳定性试验 12
2.2.8 加样回收率试验 13
2.2.9 样品含量测定 14
2.3 小结 14
结 论 15
参考文献 16
致 谢 18
引 言
中医药与中华民族的历史一样悠久,为中华民族的繁衍生息做出了不可磨灭的贡献，是中华民族优秀历史文化宝库中的一枚珍宝。
决明子是一种常用的中药材，以其有明目之功而名之。有清热明目，润肠通便的功效，用于目赤涩痛，羞明多泪，头痛眩晕，目暗不明，大便秘结。现代医学研究认为决明子具有降压、调脂，保肝和改善肾功能等功效，是中医药治疗心脑血管疾病、高脂血症的代表性药物。
目前文献报道的蒽醌类含量测定主要是对大黄素、大黄酸等的研究，本课题建立同时测定决明子中大黄酸和芦荟大黄素的方法，以甲醇为溶剂回流提取，经液相色谱分离，与混合对照品进入高效液相色谱仪检测，绘制标准曲线，进行精密度、重复性、稳定性、加样回收率实验，同时对已建立定量方法进行验证。可以更加准确地反映决明子及其制剂质量，而且又能为临床上确定给药剂量提供依据，为进一步决明子质量评价与控制研究奠定基础。
1 概 述
决明子(Catsia tora Linn)为豆科植物决明(Cassia obtusifolia L.)或小决明(Cassia tora L. )的干燥成熟种子，见图1.1。味甘、苦、咸，微寒。归肝、大肠经。清热明目，润肠通便。主要用于目赤涩痛，羞明多泪，头痛眩晕，目暗不明，大便秘结[1]。草决明为一年生、直立、粗壮草本，高1~2米。决明花黄色，荚果细长，四棱柱形；小决明植株较小，荚果较短，见图1.2。生于山坡、路边和旷野等处，喜高温、温湿气候。适宜于沙质壤土。腐殖质土或肥分中等的土中生长。秋季采收成熟果实，晒干，打下种子，除去杂质。决明略呈菱方形或短圆柱形，两端平行倾斜，长3~7mm，宽2~4mm。表面绿棕色或暗棕色，平滑有光泽。一端较平坦，另端斜尖，背腹面各有1条突起的棱线，棱线两侧各有1条斜向对称而色较浅的线形凹纹。质坚硬，不易破碎。种皮薄，子叶2，黄色，呈“S”形折曲并重叠。气微，味微苦。小决明呈短圆柱形，较小，长3~5mm，宽2~3mm。表面棱线两侧各有1片宽广的浅黄棕色带。
图1.1 决明子药材图
图1.2 决明子植株图
1.1 决明子的化学成分
决明子含有多种化学成分，主要为蒽醌类、萘骈吡咯酮类、脂肪酸类、氨基酸和无机元素，其中主要成分为蒽醌类成分，主要以游离蒽醌和蒽醌苷衍生物形式存在，含量约占1％[2]。游离蒽醌主要包括大黄酚（chrysophanol）、大黄酸（rhein）、芦荟大黄素（aloeemodin）、大黄素甲醚（physcion）、美决明子素（obtusifolin）、黄决明素（chrysoobtusin）、决明素（obtusin）、橙黄决明素（aruantioobtusin）、大黄素（emodin）；蒽醌苷衍生物主要包括意大利鼠李蒽醌1O葡萄糖苷（alatenin1OβDglucopy ranoside）、1去甲基橙黄决明素（1desmethylchryso obtusin）、黄决明素、2OβD葡萄糖苷、葡萄糖基美决明子素、葡萄糖基黄决明素、葡萄糖基橙黄决明素、大黄素甲醚8O葡萄糖苷、1去甲基决明素、大黄酚10,10′联蒽酮、大黄素8甲醚、大黄酚9蒽酮、大黄酚1O三葡萄糖苷、大黄酚1O四葡萄糖苷、美决明子素2O葡萄糖苷[3]。
1.2 决明子的药理作用
1.2.1 护眼作用
决明子自古有清热明目作用，服用决明子可预防近视眼[4]。陈依雨等[5]研究决明子乙醇提取物（Semen Cassiae extract，SCE）对非酒精性脂肪肝模型大鼠眼晶状体抗氧化能力的影响。正常对照组给予普通饲料，饮用蒸馏水；模型组大鼠给予高脂饲料，饮用10%果糖水。饲养至第6周末，将模型组大鼠随机分为模型对照组、二甲双胍组(0.2 gkg1)、决明子乙醇提取物（SCE）高(2 gkg1)、中(1 gkg1)、低(0.5 gkg1)剂量组。连续灌胃给药4周后，测定大鼠血清和眼晶状体超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）、晚期糖基化终末产物（AGEs）含量的变化。结果与正常对照组比较,模型组大鼠血清和晶状体SOD活性降低（P<.01，P<.05）MDA、AGEs含量升高（P<.01）。SCE各剂量组和二甲双胍组大鼠血清和晶状体内SOD活性明显升高（P<.01，P<.05），MDA、AGEs的含量明显降低（P<.01，P<.05）。实验得出决明子对脂肪肝大鼠眼睛有一定的保护作用，其机制可能与增强机体和眼晶状体抗氧化能力以及调节糖基化代谢水平有关。
1.2.2 泻下作用
决明子具有缓泻作用。张加雄等[6]研究决明子系统溶剂提取物对实验性便秘小鼠的泻下作用，采用燥结便秘模型小鼠，观察决明子生品及炒品各溶剂提取物的泻下作用。分别用决明子的石油醚提取物、正丁醇提取物和炒决明子提取物对燥结便秘小鼠进行治疗，并以麻仁丸作为阳性药对照，各组均静脉注射10％碳末混悬液，连续观察8?h，
引 言 1
1 概述 2
1.1 决明子的化学成分 3
1.2 决明子的药理作用 3
1.2.1 护眼作用 3
1.2.2 泻下作用 3
1.2.3 降压作用 4
1.2.4 调脂作用 4
1.2.5 保肝作用 4
1.2.6 抗菌作用 5
1.2.7 免疫作用 5
1.3 决明子蒽醌类含量测定的方法 6
1.3.1 紫外可见分光光度法 6
1.3.2 薄层色谱扫描法(TLC) 6
1.3.3 高效毛细管电泳法 6
1.3.4 高效液相色谱法(HPLC) 7
1.3.5 超临界CO2流体萃取法（SFE） 7
1.4 小结 7
2 实验内容
2.1 仪器与试药 9
2.2 方法与结果 9
2.2.1 混合对照品储备液的配制 9
2.2.2 供试品溶液的配制 9
2.2.3 色谱条件 9
2.2.4 线性关系考察 10
2.2.5 精密度试验 11
2.2.6 重复性试验 12
2.2.7 稳定性试验 12
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5^1^9^1^6^0^7^2^*
/> 2.1 仪器与试药 9
2.2 方法与结果 9
2.2.1 混合对照品储备液的配制 9
2.2.2 供试品溶液的配制 9
2.2.3 色谱条件 9
2.2.4 线性关系考察 10
2.2.5 精密度试验 11
2.2.6 重复性试验 12
2.2.7 稳定性试验 12
2.2.8 加样回收率试验 13
2.2.9 样品含量测定 14
2.3 小结 14
结 论 15
参考文献 16
致 谢 18
引 言
中医药与中华民族的历史一样悠久,为中华民族的繁衍生息做出了不可磨灭的贡献，是中华民族优秀历史文化宝库中的一枚珍宝。
决明子是一种常用的中药材，以其有明目之功而名之。有清热明目，润肠通便的功效，用于目赤涩痛，羞明多泪，头痛眩晕，目暗不明，大便秘结。现代医学研究认为决明子具有降压、调脂，保肝和改善肾功能等功效，是中医药治疗心脑血管疾病、高脂血症的代表性药物。
目前文献报道的蒽醌类含量测定主要是对大黄素、大黄酸等的研究，本课题建立同时测定决明子中大黄酸和芦荟大黄素的方法，以甲醇为溶剂回流提取，经液相色谱分离，与混合对照品进入高效液相色谱仪检测，绘制标准曲线，进行精密度、重复性、稳定性、加样回收率实验，同时对已建立定量方法进行验证。可以更加准确地反映决明子及其制剂质量，而且又能为临床上确定给药剂量提供依据，为进一步决明子质量评价与控制研究奠定基础。
1 概 述
决明子(Catsia tora Linn)为豆科植物决明(Cassia obtusifolia L.)或小决明(Cassia tora L. )的干燥成熟种子，见图1.1。味甘、苦、咸，微寒。归肝、大肠经。清热明目，润肠通便。主要用于目赤涩痛，羞明多泪，头痛眩晕，目暗不明，大便秘结[1]。草决明为一年生、直立、粗壮草本，高1~2米。决明花黄色，荚果细长，四棱柱形；小决明植株较小，荚果较短，见图1.2。生于山坡、路边和旷野等处，喜高温、温湿气候。适宜于沙质壤土。腐殖质土或肥分中等的土中生长。秋季采收成熟果实，晒干，打下种子，除去杂质。决明略呈菱方形或短圆柱形，两端平行倾斜，长3~7mm，宽2~4mm。表面绿棕色或暗棕色，平滑有光泽。一端较平坦，另端斜尖，背腹面各有1条突起的棱线，棱线两侧各有1条斜向对称而色较浅的线形凹纹。质坚硬，不易破碎。种皮薄，子叶2，黄色，呈“S”形折曲并重叠。气微，味微苦。小决明呈短圆柱形，较小，长3~5mm，宽2~3mm。表面棱线两侧各有1片宽广的浅黄棕色带。
图1.1 决明子药材图
图1.2 决明子植株图
1.1 决明子的化学成分
决明子含有多种化学成分，主要为蒽醌类、萘骈吡咯酮类、脂肪酸类、氨基酸和无机元素，其中主要成分为蒽醌类成分，主要以游离蒽醌和蒽醌苷衍生物形式存在，含量约占1％[2]。游离蒽醌主要包括大黄酚（chrysophanol）、大黄酸（rhein）、芦荟大黄素（aloeemodin）、大黄素甲醚（physcion）、美决明子素（obtusifolin）、黄决明素（chrysoobtusin）、决明素（obtusin）、橙黄决明素（aruantioobtusin）、大黄素（emodin）；蒽醌苷衍生物主要包括意大利鼠李蒽醌1O葡萄糖苷（alatenin1OβDglucopy ranoside）、1去甲基橙黄决明素（1desmethylchryso obtusin）、黄决明素、2OβD葡萄糖苷、葡萄糖基美决明子素、葡萄糖基黄决明素、葡萄糖基橙黄决明素、大黄素甲醚8O葡萄糖苷、1去甲基决明素、大黄酚10,10′联蒽酮、大黄素8甲醚、大黄酚9蒽酮、大黄酚1O三葡萄糖苷、大黄酚1O四葡萄糖苷、美决明子素2O葡萄糖苷[3]。
1.2 决明子的药理作用
1.2.1 护眼作用
决明子自古有清热明目作用，服用决明子可预防近视眼[4]。陈依雨等[5]研究决明子乙醇提取物（Semen Cassiae extract，SCE）对非酒精性脂肪肝模型大鼠眼晶状体抗氧化能力的影响。正常对照组给予普通饲料，饮用蒸馏水；模型组大鼠给予高脂饲料，饮用10%果糖水。饲养至第6周末，将模型组大鼠随机分为模型对照组、二甲双胍组(0.2 gkg1)、决明子乙醇提取物（SCE）高(2 gkg1)、中(1 gkg1)、低(0.5 gkg1)剂量组。连续灌胃给药4周后，测定大鼠血清和眼晶状体超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）、晚期糖基化终末产物（AGEs）含量的变化。结果与正常对照组比较,模型组大鼠血清和晶状体SOD活性降低（P<.01，P<.05）MDA、AGEs含量升高（P<.01）。SCE各剂量组和二甲双胍组大鼠血清和晶状体内SOD活性明显升高（P<.01，P<.05），MDA、AGEs的含量明显降低（P<.01，P<.05）。实验得出决明子对脂肪肝大鼠眼睛有一定的保护作用，其机制可能与增强机体和眼晶状体抗氧化能力以及调节糖基化代谢水平有关。
1.2.2 泻下作用
决明子具有缓泻作用。张加雄等[6]研究决明子系统溶剂提取物对实验性便秘小鼠的泻下作用，采用燥结便秘模型小鼠，观察决明子生品及炒品各溶剂提取物的泻下作用。分别用决明子的石油醚提取物、正丁醇提取物和炒决明子提取物对燥结便秘小鼠进行治疗，并以麻仁丸作为阳性药对照，各组均静脉注射10％碳末混悬液，连续观察8?h，
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