麦蓝菜药材的质量标准研究(附件)
目的初步确定麦蓝菜药材的多糖含量测定方法，为其质量标准的深入研究提供方法学参考。方法麦蓝菜药材经提取和水解前处理后，以麦蓝菜多糖作为含测指标，建立HPLC-ELSD分析方法检测葡萄糖含量，并进行方法学验证。结果葡萄糖在保留时间的色谱峰与对照产物的色谱图相对应，葡萄糖在1.267~ 27.1395 μg之间呈良好的线性关系，麦蓝菜药材中的多糖含量为50.36％。结论本论文建立的麦蓝菜多糖含量测定方法具有良好的专属性、稳定性、精密度、准确度、耐用性，可用于测定麦蓝菜药材中的多糖含量。关键词 麦蓝菜，多糖，质量标准，HPLC
目 录
1 前言 1
1.1 麦蓝菜简介 1
1.2 麦蓝菜质量标准现状 1
1.3 麦蓝菜多糖药理作用 1
1.4 多糖常用制备方法 2
1.5 多糖含量测定常用方法 3
1.6 论文研究目的与意义 4
2 实验试剂与仪器 5
2.1 实验试剂耗材 5
2.2 实验仪器 5
2.3 实验与结果 5
2.4 方法学考察 7
结论 11
致谢 12
参考文献 13
1 前言
1.1 麦蓝菜简介
麦蓝菜，又名王不留行是一种一年生草本植物，能激活血液循环，治疗不乳。《中国药典》记录：“王不留行为石竹科植物的干燥成熟种子”[1]。《本草纲目》记录：“王不留行，治发背、妇人血经不匀及难产等[2]”。王不留行中主要含有三萜皂苷，黄酮苷，环肽，脂肪酸和单糖等成份[34]。王不留行具有丰富的药理作用，如：抗肿瘤、促进乳汁分泌、治疗急性腰扭伤等[57]。
1.2 麦蓝菜质量标准现状
目前对王不留行的质量研究标准主要是检测其中的黄酮苷含量。
孟贺[8]等人使用反相色谱柱ODC，对麦蓝菜中黄酮苷进行线性、精密度、稳定性、重复性等实验，根据黄酮苷类具有许多药理活性，便以黄酮苷为麦蓝菜含量测定的指标成分。孟贺等人测王不留行黄酮苷的质量标准被收录至《中国药典》2010版一部标准研究，为其质量标准提供检测方法。
黄懿[9]等人根据 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
2015版药典中王不留行的质量标准，使用安捷伦C18反相色谱，对炒王不留行中的黄酮苷进行精密度、重复性以及稳定性实验，并测定药材中黄酮苷含量，建立指纹图谱。
李宁[10]等人根据2015版药典中王不留行的质量标准，以黄酮苷为检测物，分析不同种质王不留行产量及质量的差别，为选择优质种质资源和人工栽培提供基础理论依据，对不同种质的产量和品质进行研究是容易的。
1.3 麦蓝菜多糖药理作用
多糖具有免疫调节、预防肿瘤、降血糖、预防衰老、抵抗辐射、耐病毒等药理活性作用，是中药材中普遍存在的活性成分，它在医药、食品等方面具有很大的开发应用价值。目前王不留行的质量控制指标只有黄酮苷成分，但研究显示王不留行中的利尿通淋[1112]、抗氧化等作用主要是由多糖产生。
李芸达等人[13]使用粉碎后的麦蓝菜按苯酚硫酸法分别进行四个单因素实验，再根据单因素实验结果设计正交实验，以找出最好的提取工艺，并使用紫外分光光度法测定其抗氧化能力，发现清除率会随着麦蓝菜多糖提取液浓度的增加而增加。
孟海洋[6]等人使用培养、纯化后的牛乳上皮细胞与提取的王不留行溶液作用，用专门的细胞仪器检测细胞的活性变化和信号表达变化。将仪器检测的数据处理后，分析得出王不留行提取液对牛乳上皮细胞有明显的强化活力作用，能促进乳汁分泌。
麦蓝菜药材中含有较多量多糖并且多糖发挥主要的药理作用，因此建立王不留行多糖质量控制标准是必要的。
1.4 多糖常用制备方法
1.4.1 提取
从中药中提取天然活性成分的方法很多，包括溶剂萃取、蒸馏和升华。在大多数情况下，使用溶剂萃取，并且由于溶剂萃取的操作方便而容易获得，并且提取物易从溶剂中分离出来。
提取多糖时，溶剂提取法常有水提取法、酸提取法和碱提取法等，不同多糖对应不同溶剂，低聚糖的生理特性随单糖组成，分子量和结构联系而变化，这些特征与其提取的天然来源以及所采用的提取过程直接相关，提取过程的复杂性取决于来源的化学组成和最终产品所需的特异性，如：酸性多糖、半纤维素可溶于稀碱，碱性多糖可溶于稀酸。
1.4.1.1 水提法
水提法[14]是提取多糖常常使用的一种方法。水溶液中多糖的提取可以在不同温度下进行（从室温到沸腾温度），并且在大多数情况下，提取需要几个小时。王玉荣等人[15]以山楂为原料，在三个不同温度下提取多糖，并计算其提取率，分析发现随着温度的变化，提取物中的还原糖，中性多糖、酸性多糖含量会发生不同的变化。罗其昌[16]等人在三个相近温度下提取香菇中的多糖，将提取液处理后，用高锰酸钾测定提取物的糖含量并绘制标准曲线。处理所得的数据，分析发现多糖的含量会随着温度的升高而增多。闫慧丹[17]等人则利用水提醇沉法提取香菇多糖，并用气象色谱来测定其单糖组成成分。
杜娟等人[18]将食用菌中最常见的几种菌进行处理，选择四种温度和五种不同料液量对食用菌进行多糖提取。通过单因素实验和正交实验对多糖含量进行检测，分析结果发现在一定范围内，多糖含量会随着提取时间的增加而增多。
1.4.1.2 酸提法
酸提取法与水提法类似，主要根据药材具体情况选择适宜的溶剂，如碱性多糖可溶于稀酸，使用酸提取则会提高提取效率。在利用酸提取的过程当中为防止糖的降解，提取时间不能长并且温度范围合适。提取结束后迅速用碱中和，再使用透析的方法除去提取物中的盐。增加辅助手段可减少提取时间，提高多糖提取效率。常用的辅助手段有加酶、使用超声波、使用微波等，但由于酶或微波处理会对破坏多糖的结构，因此需要仔细思考多糖的结构再采用此法。
1.4.2 分离
在多糖分离过程中常用季铵盐沉淀法、分级沉淀法和凝胶色谱柱分离等方法，根据多糖的物理、化学性质来匹配相应的分离方法，从而实现快速分离。
目 录
1 前言 1
1.1 麦蓝菜简介 1
1.2 麦蓝菜质量标准现状 1
1.3 麦蓝菜多糖药理作用 1
1.4 多糖常用制备方法 2
1.5 多糖含量测定常用方法 3
1.6 论文研究目的与意义 4
2 实验试剂与仪器 5
2.1 实验试剂耗材 5
2.2 实验仪器 5
2.3 实验与结果 5
2.4 方法学考察 7
结论 11
致谢 12
参考文献 13
1 前言
1.1 麦蓝菜简介
麦蓝菜，又名王不留行是一种一年生草本植物，能激活血液循环，治疗不乳。《中国药典》记录：“王不留行为石竹科植物的干燥成熟种子”[1]。《本草纲目》记录：“王不留行，治发背、妇人血经不匀及难产等[2]”。王不留行中主要含有三萜皂苷，黄酮苷，环肽，脂肪酸和单糖等成份[34]。王不留行具有丰富的药理作用，如：抗肿瘤、促进乳汁分泌、治疗急性腰扭伤等[57]。
1.2 麦蓝菜质量标准现状
目前对王不留行的质量研究标准主要是检测其中的黄酮苷含量。
孟贺[8]等人使用反相色谱柱ODC，对麦蓝菜中黄酮苷进行线性、精密度、稳定性、重复性等实验，根据黄酮苷类具有许多药理活性，便以黄酮苷为麦蓝菜含量测定的指标成分。孟贺等人测王不留行黄酮苷的质量标准被收录至《中国药典》2010版一部标准研究，为其质量标准提供检测方法。
黄懿[9]等人根据 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072$
2015版药典中王不留行的质量标准，使用安捷伦C18反相色谱，对炒王不留行中的黄酮苷进行精密度、重复性以及稳定性实验，并测定药材中黄酮苷含量，建立指纹图谱。
李宁[10]等人根据2015版药典中王不留行的质量标准，以黄酮苷为检测物，分析不同种质王不留行产量及质量的差别，为选择优质种质资源和人工栽培提供基础理论依据，对不同种质的产量和品质进行研究是容易的。
1.3 麦蓝菜多糖药理作用
多糖具有免疫调节、预防肿瘤、降血糖、预防衰老、抵抗辐射、耐病毒等药理活性作用，是中药材中普遍存在的活性成分，它在医药、食品等方面具有很大的开发应用价值。目前王不留行的质量控制指标只有黄酮苷成分，但研究显示王不留行中的利尿通淋[1112]、抗氧化等作用主要是由多糖产生。
李芸达等人[13]使用粉碎后的麦蓝菜按苯酚硫酸法分别进行四个单因素实验，再根据单因素实验结果设计正交实验，以找出最好的提取工艺，并使用紫外分光光度法测定其抗氧化能力，发现清除率会随着麦蓝菜多糖提取液浓度的增加而增加。
孟海洋[6]等人使用培养、纯化后的牛乳上皮细胞与提取的王不留行溶液作用，用专门的细胞仪器检测细胞的活性变化和信号表达变化。将仪器检测的数据处理后，分析得出王不留行提取液对牛乳上皮细胞有明显的强化活力作用，能促进乳汁分泌。
麦蓝菜药材中含有较多量多糖并且多糖发挥主要的药理作用，因此建立王不留行多糖质量控制标准是必要的。
1.4 多糖常用制备方法
1.4.1 提取
从中药中提取天然活性成分的方法很多，包括溶剂萃取、蒸馏和升华。在大多数情况下，使用溶剂萃取，并且由于溶剂萃取的操作方便而容易获得，并且提取物易从溶剂中分离出来。
提取多糖时，溶剂提取法常有水提取法、酸提取法和碱提取法等，不同多糖对应不同溶剂，低聚糖的生理特性随单糖组成，分子量和结构联系而变化，这些特征与其提取的天然来源以及所采用的提取过程直接相关，提取过程的复杂性取决于来源的化学组成和最终产品所需的特异性，如：酸性多糖、半纤维素可溶于稀碱，碱性多糖可溶于稀酸。
1.4.1.1 水提法
水提法[14]是提取多糖常常使用的一种方法。水溶液中多糖的提取可以在不同温度下进行（从室温到沸腾温度），并且在大多数情况下，提取需要几个小时。王玉荣等人[15]以山楂为原料，在三个不同温度下提取多糖，并计算其提取率，分析发现随着温度的变化，提取物中的还原糖，中性多糖、酸性多糖含量会发生不同的变化。罗其昌[16]等人在三个相近温度下提取香菇中的多糖，将提取液处理后，用高锰酸钾测定提取物的糖含量并绘制标准曲线。处理所得的数据，分析发现多糖的含量会随着温度的升高而增多。闫慧丹[17]等人则利用水提醇沉法提取香菇多糖，并用气象色谱来测定其单糖组成成分。
杜娟等人[18]将食用菌中最常见的几种菌进行处理，选择四种温度和五种不同料液量对食用菌进行多糖提取。通过单因素实验和正交实验对多糖含量进行检测，分析结果发现在一定范围内，多糖含量会随着提取时间的增加而增多。
1.4.1.2 酸提法
酸提取法与水提法类似，主要根据药材具体情况选择适宜的溶剂，如碱性多糖可溶于稀酸，使用酸提取则会提高提取效率。在利用酸提取的过程当中为防止糖的降解，提取时间不能长并且温度范围合适。提取结束后迅速用碱中和，再使用透析的方法除去提取物中的盐。增加辅助手段可减少提取时间，提高多糖提取效率。常用的辅助手段有加酶、使用超声波、使用微波等，但由于酶或微波处理会对破坏多糖的结构，因此需要仔细思考多糖的结构再采用此法。
1.4.2 分离
在多糖分离过程中常用季铵盐沉淀法、分级沉淀法和凝胶色谱柱分离等方法，根据多糖的物理、化学性质来匹配相应的分离方法，从而实现快速分离。
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