土续断多糖的纯化工艺研究及组分分析
摘 要本论文以土续断为研究对象，对土续断多糖纯化工艺进行研究及组分分析。采用水提醇沉法提取，Sevage法除去蛋白质，过氧化氢脱色，透析除去小分子，得到水溶性的土续断粗多糖PUT；纤维素阴离子交换剂柱层析法对土续断粗多糖进行分离纯化，得到五个多糖组分,分别是PUT-1、PUT-2、PUT-3、PUT-4、PUT-5。通过HPLC、UV等方法对其化学性质进行了系统性的研究。结果表明：①纤维素阴离子交换剂层析柱对土续断粗多糖的洗脱是有效的；②采用高效液相的方法对PUT-1中单糖组分进行测定，其成分是半乳糖和阿拉伯糖，比例为4.474:1。 目 录
1 绪论
1.1 土续断简介 1
1.2 多糖的发展前景 1
1.3 比较多糖显色范围的不同测定方法 2
1.3.1 苯酚硫酸法 2
1.3.2 蒽酮硫酸法 2
1.4 显色剂的选择 2
1.5 高效液相法测定单糖组分流动相的选择 2
1.6 PMP衍生化 3
2 实验研究
2.1 实验药材、试剂及仪器 4
2.1.1 实验药材 4
2.1.2 实验试剂、仪器 4
2.2 实验用品预处理 4
2.2.1 DEAE52纤维素的预处理 4
2.2.2 DEAE52纤维素充填柱子 5
2.2.3 DEAE52纤维素再生 5
2.2.4 透析袋的预处理 5
2.3 土续断多糖的分离纯化 5
2.3.1 土续断药材的预处理过程 5
2.3.2 土续断粗多糖Sevage法脱蛋白的处理过程 5
2.3.3 土续断粗多糖的脱色处理过程 6
2.3.4 土续断粗多糖的透析过程 6
2.4 土续断粗多糖的分级纯化 6
2.4.1 纤维素阴离子交换剂柱层析法 6
2.5 样品的进样处理 7
2.5.1 用蒸馏水进行洗脱 7
2.5.2 用0.05mol/L NaHCO3洗脱 8
2.5.3 用0.1mol/L NaHCO3进行洗脱 9
6
2.3.4 土续断粗多糖的透析过程 6
2.4 土续断粗多糖的分级纯化 6
2.4.1 纤维素阴离子交换剂柱层析法 6
2.5 样品的进样处理 7
2.5.1 用蒸馏水进行洗脱 7
2.5.2 用0.05mol/L NaHCO3洗脱 8
2.5.3 用0.1mol/L NaHCO3进行洗脱 9
2.5.4 用0.25mol/L NaHCO3洗脱 10
2.5.5 用0.5mol/L NaHCO3进行洗脱 12
2.6 高效液相（HLPC）法测土续断单糖组成 13
2.6.1 单糖对照品组成测定 13
2.6.2 单糖对照品液相图 14
2.6.3 PUT1样品测定方法及结果 17
3 结论与展望
3.1 结论 18
3.2 展望 18
参考文献 19
致谢 20
1 绪论
1.1 土续断简介
土续断又称陕甘续断，来源于唇形科植物糙苏属（Phlomis Umbrosa Turca）土续断经过干燥的根或块根。土续断味苦辛后微甜，性微温。具有止血、强筋健骨、安胎、补肝益肾等功效，常和其他药物配合使用、打成粉末、制成丸剂或煎煮汤剂服用。根据发表的期刊和一些书籍所述，土续断的地上部分具有祛痰、解毒、散风、止咳等功效，也可以作为药物使用，称之为续断藤或陕甘续断草[1]。2010版《中国药典》所记载的续断与土续断名称、功效类似，但续断为川续断科（Dipsacaceae apper Wall)植物川续断的干燥根，是妇科和伤科的常用中药材[2]。
土续断原植物是多年生草本，其高度约50cm90cm；干燥根呈纺锤形或者长圆柱形，上面粗下面细，膨大的部分直径为7~10mm，末端尾状，连接根状茎的地方又细又瘦，直径仅为1~2mm。表面灰棕色，具有细跟痕和纵沟纹，易脆易断，断面稍平坦，略带棕色或肉红色。韧皮部较窄，木质部较宽中心为木心；髓射线辐射状排列，裂隙较多。比较老的木质部与根皮部有时分离。
块根棒状较肥厚，红褐色，肉质，7~8条簇生于粗短的根状茎上，适宜秋天采挖，不适合长时间的日晒，需要将其烘干或者阴干，这样药材的质量才会更好[2]。
1.2 多糖的发展前景
植物多糖是一种非常重要的生物大分子，它广泛的存在于植物的根、茎、叶之中，是由多个单糖分子通过糖苷键的聚合，脱水后形成的含有酮基或者是含有醛基的多羟基聚合物。植物多糖是植物体内非常重要的营养物质，它参与机体免疫调节、细胞识别、物质运输等重要的生命活动，发挥着无法替代的作用[3]。构成生命体的四大基本物质之一的植物多糖是自然界里含量非常丰富的生物聚合物，并且它与维持生命所需的多种生理功能有着很大的关系。研究结果表明：活性多糖与免疫力的增强、抗肿瘤、抗氧化、降血脂、抗病毒等密切相关，是药理学研究的热点[4]。因此，对于植物活性多糖的研究已经引起了国内外的生物学家、化学家、药理学家浓厚的兴趣，国际科学界对于多糖的研究已经视被为生命科学前沿的领域[56]。国内外对于土续断多糖的研究虽然少之又少，但是由于续断的功效与土续断类似，并且现在人们对各地续断的研究越来越多，例如：湖北的五鹤续断、四川的川续断等，再加上现在人们对多糖的研究越来越深入，相信不久的将来药理学家、生物学家、化学家对于土续断多糖的研究也会越来越深入。本试验对土续断多糖的提取工艺进行研究，可以为土续断的多糖日后的开发和利用提供重要的科学依据。
1.3 比较多糖显色范围的不同测定方法
主要有苯酚硫酸法、蒽酮硫酸法等不同方法。选取最适合的方法对土续断进行多糖含量的测定。
1.3.1 苯酚硫酸法
苯酚硫酸法是被广泛应用的方法，这种方法的原理是在浓硫酸作用下，将多糖水解成单糖，并且在强酸条件下单糖与苯酚反应生成橙色的衍生物。此方法的有优点是显色后稳定性好，操作快速，操作简单，重复性好等等。缺点：对于有色样品的测定结果易偏高[7]。
1.3.2 蒽酮硫酸法
这种方法的原理是多糖在浓硫酸的作用下水解、脱水，再与蒽酮相结合形成成有颜色化合物。此方法的优点是几乎可以测定所有的碳水化合物，可以测定的有己糖、戊糖，所有多糖类和寡糖类，包括纤维素、淀粉，省时省力。这种方法的缺点是稳定性差，必须要新鲜配制并且在避光条件下，色氨酸含量比较高的蛋白质对显色反应有一定的干扰[8]。
经过两种显色方法的比较以及试验结果显示：该实验采用苯酚硫酸法进行多糖洗脱范围的测定。
1.4 显色
1 绪论
1.1 土续断简介 1
1.2 多糖的发展前景 1
1.3 比较多糖显色范围的不同测定方法 2
1.3.1 苯酚硫酸法 2
1.3.2 蒽酮硫酸法 2
1.4 显色剂的选择 2
1.5 高效液相法测定单糖组分流动相的选择 2
1.6 PMP衍生化 3
2 实验研究
2.1 实验药材、试剂及仪器 4
2.1.1 实验药材 4
2.1.2 实验试剂、仪器 4
2.2 实验用品预处理 4
2.2.1 DEAE52纤维素的预处理 4
2.2.2 DEAE52纤维素充填柱子 5
2.2.3 DEAE52纤维素再生 5
2.2.4 透析袋的预处理 5
2.3 土续断多糖的分离纯化 5
2.3.1 土续断药材的预处理过程 5
2.3.2 土续断粗多糖Sevage法脱蛋白的处理过程 5
2.3.3 土续断粗多糖的脱色处理过程 6
2.3.4 土续断粗多糖的透析过程 6
2.4 土续断粗多糖的分级纯化 6
2.4.1 纤维素阴离子交换剂柱层析法 6
2.5 样品的进样处理 7
2.5.1 用蒸馏水进行洗脱 7
2.5.2 用0.05mol/L NaHCO3洗脱 8
2.5.3 用0.1mol/L NaHCO3进行洗脱 9
6
2.3.4 土续断粗多糖的透析过程 6
2.4 土续断粗多糖的分级纯化 6
2.4.1 纤维素阴离子交换剂柱层析法 6
2.5 样品的进样处理 7
2.5.1 用蒸馏水进行洗脱 7
2.5.2 用0.05mol/L NaHCO3洗脱 8
2.5.3 用0.1mol/L NaHCO3进行洗脱 9
2.5.4 用0.25mol/L NaHCO3洗脱 10
2.5.5 用0.5mol/L NaHCO3进行洗脱 12
2.6 高效液相（HLPC）法测土续断单糖组成 13
2.6.1 单糖对照品组成测定 13
2.6.2 单糖对照品液相图 14
2.6.3 PUT1样品测定方法及结果 17
3 结论与展望
3.1 结论 18
3.2 展望 18
参考文献 19
致谢 20
1 绪论
1.1 土续断简介
土续断又称陕甘续断，来源于唇形科植物糙苏属（Phlomis Umbrosa Turca）土续断经过干燥的根或块根。土续断味苦辛后微甜，性微温。具有止血、强筋健骨、安胎、补肝益肾等功效，常和其他药物配合使用、打成粉末、制成丸剂或煎煮汤剂服用。根据发表的期刊和一些书籍所述，土续断的地上部分具有祛痰、解毒、散风、止咳等功效，也可以作为药物使用，称之为续断藤或陕甘续断草[1]。2010版《中国药典》所记载的续断与土续断名称、功效类似，但续断为川续断科（Dipsacaceae apper Wall)植物川续断的干燥根，是妇科和伤科的常用中药材[2]。
土续断原植物是多年生草本，其高度约50cm90cm；干燥根呈纺锤形或者长圆柱形，上面粗下面细，膨大的部分直径为7~10mm，末端尾状，连接根状茎的地方又细又瘦，直径仅为1~2mm。表面灰棕色，具有细跟痕和纵沟纹，易脆易断，断面稍平坦，略带棕色或肉红色。韧皮部较窄，木质部较宽中心为木心；髓射线辐射状排列，裂隙较多。比较老的木质部与根皮部有时分离。
块根棒状较肥厚，红褐色，肉质，7~8条簇生于粗短的根状茎上，适宜秋天采挖，不适合长时间的日晒，需要将其烘干或者阴干，这样药材的质量才会更好[2]。
1.2 多糖的发展前景
植物多糖是一种非常重要的生物大分子，它广泛的存在于植物的根、茎、叶之中，是由多个单糖分子通过糖苷键的聚合，脱水后形成的含有酮基或者是含有醛基的多羟基聚合物。植物多糖是植物体内非常重要的营养物质，它参与机体免疫调节、细胞识别、物质运输等重要的生命活动，发挥着无法替代的作用[3]。构成生命体的四大基本物质之一的植物多糖是自然界里含量非常丰富的生物聚合物，并且它与维持生命所需的多种生理功能有着很大的关系。研究结果表明：活性多糖与免疫力的增强、抗肿瘤、抗氧化、降血脂、抗病毒等密切相关，是药理学研究的热点[4]。因此，对于植物活性多糖的研究已经引起了国内外的生物学家、化学家、药理学家浓厚的兴趣，国际科学界对于多糖的研究已经视被为生命科学前沿的领域[56]。国内外对于土续断多糖的研究虽然少之又少，但是由于续断的功效与土续断类似，并且现在人们对各地续断的研究越来越多，例如：湖北的五鹤续断、四川的川续断等，再加上现在人们对多糖的研究越来越深入，相信不久的将来药理学家、生物学家、化学家对于土续断多糖的研究也会越来越深入。本试验对土续断多糖的提取工艺进行研究，可以为土续断的多糖日后的开发和利用提供重要的科学依据。
1.3 比较多糖显色范围的不同测定方法
主要有苯酚硫酸法、蒽酮硫酸法等不同方法。选取最适合的方法对土续断进行多糖含量的测定。
1.3.1 苯酚硫酸法
苯酚硫酸法是被广泛应用的方法，这种方法的原理是在浓硫酸作用下，将多糖水解成单糖，并且在强酸条件下单糖与苯酚反应生成橙色的衍生物。此方法的有优点是显色后稳定性好，操作快速，操作简单，重复性好等等。缺点：对于有色样品的测定结果易偏高[7]。
1.3.2 蒽酮硫酸法
这种方法的原理是多糖在浓硫酸的作用下水解、脱水，再与蒽酮相结合形成成有颜色化合物。此方法的优点是几乎可以测定所有的碳水化合物，可以测定的有己糖、戊糖，所有多糖类和寡糖类，包括纤维素、淀粉，省时省力。这种方法的缺点是稳定性差，必须要新鲜配制并且在避光条件下，色氨酸含量比较高的蛋白质对显色反应有一定的干扰[8]。
经过两种显色方法的比较以及试验结果显示：该实验采用苯酚硫酸法进行多糖洗脱范围的测定。
1.4 显色
版权保护: 本文由 hbsrm.com编辑，转载请保留链接: www.hbsrm.com/yxlw/zygc/1355.html
