核桃分心木中黄酮的提取工艺研究(附件)
摘 要目的研究核桃分心木中黄酮的最佳提取工艺。方法利用微波辅助乙醇提取法进行核桃分心木中黄酮的提取工艺研究，考察乙醇浓度、提取温度、液料比、提取时间和微波功率对核桃分心木中黄酮得率的影响。在单因素的基础上，采用正交实验法，确立最佳提取条件。结论微波辅助乙醇提取核桃分心木中黄酮的最适工艺参数是乙醇浓度为50%，提取温度为50℃，液料比为20:1，提取时间为30min，微波功率微300W，黄酮得率可达4.75%。微波辅助乙醇的方法简单，耗时短，提取率高。
目 录
1 概述 1
1.1 核桃分心木化学成分研究 1
1.1.1 黄酮类化合物 1
1.1.2 醌类化合物 2
1.1.3 酚酸类化合物 2
1.1.4其他化合物 2
1.2 核桃分心木黄酮药理作用研究 3
1.2.1 补肾作用 3
1.2.2 抑菌作用 4
1.2.3 抗氧化作用 4
1.3 核桃分心木黄酮的含量测定 5
1.4 核桃分心木黄酮提取工艺 5
1.4.1 热水提取法 5
1.4.2 有机溶剂提取法 6
1.4.3 微波法 6
1.4.4 超声波提取法 6
1.4.5 超临界流体萃取法 7
1.5 研究目的意义 7
2 核桃分心木中黄酮的提取工艺研究 8
2.1 仪器与试药 8
2.2 核桃分心木中黄酮含量测定方法学 9
2.2.1芦丁标准溶液的制备 9
2.2.2供试品溶液的制备 9
2.2.3芦丁标准曲线的绘制 10
2.2.4精密度试验 10
2.2.5加样回收率试验 11
2.3 核桃分心木中黄酮提取工艺单因素实验 11
2.3.1 乙醇浓度对黄酮的影响 11
2.3.2 温度对黄酮提取率的影响 12
2.3.3 液料比对黄酮提取率的影响 12
2.3.4 提取时间对黄酮提取率的影响 13
2.3.5 功率对黄酮提取率的影响 14 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
2.4 正交试验确定最佳的提取条件 14
2.5三批验证 16
结 论 17
参考文献 18
致 谢 20
1 概述
分心木(Diaphragma jugLandis Fructus)为胡桃科植物胡桃(JugLans regia L．)果核内的木质隔膜，又名胡桃衣、胡桃夹、胡桃隔、核桃隔膜、隔心木。气微，味微涩，性平，无毒，入脾、肾二经。具有固肾涩精之功效。中医认为，分心木性味苦、涩、平，入脾、肾经，有健脾固肾、利尿清热，治淋病尿血、暑热泻痢等功效，适用于治疗遗溺、崩中下血、耳聋、治遗精、尿频、带下等。曾收录于《山西中药志》、《本草再新》、《中药材手册》以及《天津中草药》中，在维吾尔医学中，分心木常用来补肾、驱寒，治疗遗精、多汗、口腔溃疡、牙龈出血等多种疾病[1]。目前关于核桃外壳与果皮的研究相对较多，但对分心的药理活性与化学成分研究报道十分有限。王艳梅等采用传统化学反应方法对分心木的化学成分进行了定性分析，初步推断其中含有氨基酸、蛋白质、糖类、酚类、有机酸、黄酮、生物碱、强心苷、挥发油、甾类、皂苷、蒽醌类、内酯、香豆素等多种成分。然而，单体化学成分分离、结构鉴定至今未见报道。
1.1 核桃分心木化学成分研究
韩艳春[2]等曾采用化学反应法对分心木的化学成分进行过定性分析，发现分心木中含有黄酮，有机酸、生物碱、甾类、皂苷等多种成分。但是，对分心木单体化学成分的研究报道较少，目前，已分离鉴定的单体化合物包括黄酮类、醌类、酚酸类及其他类化合物。
1.1.1 黄酮类化合物
杨明珠等[3]使用硅胶柱色谱、SephadexLH－20柱色谱从分心木中分离得到4个黄酮类化合物，经光谱学方法鉴定分别为二氢槲皮素(1)、儿茶素(2)和柚皮素(3)。韩艳春等[4]采用聚酰胺柱色谱和SephadexLH－20柱色谱从分心木中分离得到5，7，8，3，4－黄酮醇－3－O－鼠李糖苷(4)这四种成分。
图1.1 核桃分心木中黄酮类成分结构式
1.1.2 醌类化合物
杨明珠等[5]利用硅胶柱色谱、SephadexLH－20柱色谱从分心木的乙酸乙酯提取物中分离得到3个醌类化合物，经光谱学方法鉴定为大黄素(5)、4，8－二羟基－1－四氢萘醌(6)和2－乙氧基胡桃醌(7)。
图1.2 核桃分心木中醌类成分结构式
1.1.3 酚酸类化合物
杨明珠等[6]经反复硅胶柱色谱、SephadexLH－20柱色谱得到4个酚酸类化合物，经光谱学方法分别鉴定为没食子酸(8)、香草酸(9)、核桃素D(10)、没食子酸乙酯(11)和对羟基苯甲酸(12)。
图1.3 核桃分心木中酚酸类成分结构式
1.1.4其他化合物
此外，杨明珠等[7]还从分心木中分离得到β－谷甾醇(13)、催吐萝芙木醇(14)和齐墩果酸(15)，高莉等[8]采用DEAE－纤维素52离子柱和SephadexG－100凝胶柱，从分心木中分离得到一多糖组分，经气相色谱分析，由葡萄糖、果糖、甘露糖、鼠李糖和阿拉伯糖组成；王艳梅等[9]利用气相色谱从分心木挥发油中分离鉴定出11种化学成分，分别是二苯基马来酐、乙酸、乙酸乙酯、乙酸－1－甲基乙基酯、油酸、十五酸、邻苯二甲酸二丁酯、棕榈酸、抗坏血酸酯和9，12－十八烷二烯酸等。
图1.4 核桃分心木中其他有效成分结构式
1.2 核桃分心木黄酮药理作用研究
分心木具有固肾涩精的传统功效，现代药理活性表明，除补肾作用外，分心木还具有抗菌、抗氧化等作用。黄酮类化合物广泛存在于自然界的植物中, 属植物次生代谢产物。实验研究表明,黄酮类化合物具有抗氧化、抗过敏、抗菌消炎、降血糖、抗病毒、抗肿瘤和护胃保肝等功效。
1.2.1 补肾作用
王艳等[10]采用氢化可的松致小鼠肾阳虚模型，以分心木不同溶剂提取部位的高、中、低剂量组给予干预，观察小鼠体质量增长率、各相关脏器系数等指标变化以及下丘脑、肾脏的病理组织学变化。结果表明，肾阳虚组小鼠出现大剂量皮质激素所致的全身耗竭现象，分心木乙醇提取物、正丁醇提取物以及水提取物组小鼠的全身耗竭现象出现不同程度的改善; 在小鼠体质量变化和脏器系数方面，各提取部位组与空白组、肾阳虚组比较均有不同程度的改善;正丁醇高剂量组、95%乙醇低剂量组可降低肾小球毛细血管通透性，对毛细血管扩张起到拮抗作用; 95%乙醇低剂量组、水煎液中剂量组可改善肾小管上皮细胞水肿现象; 正丁醇高中低剂量组、水煎液高中剂量组对胶质细胞水肿表现出改善作用。上述结果说明核桃分心木95% 乙醇提取物、正丁醇提取物以及水提取物各剂量组均不同程度地改善了小鼠模型肾阳虚症状。韩艳春等[11]研究发现，维吾尔药核桃分心木可改善氢化可的松所致小鼠的“阳虚”症状，其中，正丁醇提取物作用明显，这可能是治疗肾阳虚的物质基础，但通过何种微观结构改变、何种方式调节下丘脑－垂体－肾上腺轴的功能紊乱，有待进一步深入研究。
目 录
1 概述 1
1.1 核桃分心木化学成分研究 1
1.1.1 黄酮类化合物 1
1.1.2 醌类化合物 2
1.1.3 酚酸类化合物 2
1.1.4其他化合物 2
1.2 核桃分心木黄酮药理作用研究 3
1.2.1 补肾作用 3
1.2.2 抑菌作用 4
1.2.3 抗氧化作用 4
1.3 核桃分心木黄酮的含量测定 5
1.4 核桃分心木黄酮提取工艺 5
1.4.1 热水提取法 5
1.4.2 有机溶剂提取法 6
1.4.3 微波法 6
1.4.4 超声波提取法 6
1.4.5 超临界流体萃取法 7
1.5 研究目的意义 7
2 核桃分心木中黄酮的提取工艺研究 8
2.1 仪器与试药 8
2.2 核桃分心木中黄酮含量测定方法学 9
2.2.1芦丁标准溶液的制备 9
2.2.2供试品溶液的制备 9
2.2.3芦丁标准曲线的绘制 10
2.2.4精密度试验 10
2.2.5加样回收率试验 11
2.3 核桃分心木中黄酮提取工艺单因素实验 11
2.3.1 乙醇浓度对黄酮的影响 11
2.3.2 温度对黄酮提取率的影响 12
2.3.3 液料比对黄酮提取率的影响 12
2.3.4 提取时间对黄酮提取率的影响 13
2.3.5 功率对黄酮提取率的影响 14 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: *351916072*
2.4 正交试验确定最佳的提取条件 14
2.5三批验证 16
结 论 17
参考文献 18
致 谢 20
1 概述
分心木(Diaphragma jugLandis Fructus)为胡桃科植物胡桃(JugLans regia L．)果核内的木质隔膜，又名胡桃衣、胡桃夹、胡桃隔、核桃隔膜、隔心木。气微，味微涩，性平，无毒，入脾、肾二经。具有固肾涩精之功效。中医认为，分心木性味苦、涩、平，入脾、肾经，有健脾固肾、利尿清热，治淋病尿血、暑热泻痢等功效，适用于治疗遗溺、崩中下血、耳聋、治遗精、尿频、带下等。曾收录于《山西中药志》、《本草再新》、《中药材手册》以及《天津中草药》中，在维吾尔医学中，分心木常用来补肾、驱寒，治疗遗精、多汗、口腔溃疡、牙龈出血等多种疾病[1]。目前关于核桃外壳与果皮的研究相对较多，但对分心的药理活性与化学成分研究报道十分有限。王艳梅等采用传统化学反应方法对分心木的化学成分进行了定性分析，初步推断其中含有氨基酸、蛋白质、糖类、酚类、有机酸、黄酮、生物碱、强心苷、挥发油、甾类、皂苷、蒽醌类、内酯、香豆素等多种成分。然而，单体化学成分分离、结构鉴定至今未见报道。
1.1 核桃分心木化学成分研究
韩艳春[2]等曾采用化学反应法对分心木的化学成分进行过定性分析，发现分心木中含有黄酮，有机酸、生物碱、甾类、皂苷等多种成分。但是，对分心木单体化学成分的研究报道较少，目前，已分离鉴定的单体化合物包括黄酮类、醌类、酚酸类及其他类化合物。
1.1.1 黄酮类化合物
杨明珠等[3]使用硅胶柱色谱、SephadexLH－20柱色谱从分心木中分离得到4个黄酮类化合物，经光谱学方法鉴定分别为二氢槲皮素(1)、儿茶素(2)和柚皮素(3)。韩艳春等[4]采用聚酰胺柱色谱和SephadexLH－20柱色谱从分心木中分离得到5，7，8，3，4－黄酮醇－3－O－鼠李糖苷(4)这四种成分。
图1.1 核桃分心木中黄酮类成分结构式
1.1.2 醌类化合物
杨明珠等[5]利用硅胶柱色谱、SephadexLH－20柱色谱从分心木的乙酸乙酯提取物中分离得到3个醌类化合物，经光谱学方法鉴定为大黄素(5)、4，8－二羟基－1－四氢萘醌(6)和2－乙氧基胡桃醌(7)。
图1.2 核桃分心木中醌类成分结构式
1.1.3 酚酸类化合物
杨明珠等[6]经反复硅胶柱色谱、SephadexLH－20柱色谱得到4个酚酸类化合物，经光谱学方法分别鉴定为没食子酸(8)、香草酸(9)、核桃素D(10)、没食子酸乙酯(11)和对羟基苯甲酸(12)。
图1.3 核桃分心木中酚酸类成分结构式
1.1.4其他化合物
此外，杨明珠等[7]还从分心木中分离得到β－谷甾醇(13)、催吐萝芙木醇(14)和齐墩果酸(15)，高莉等[8]采用DEAE－纤维素52离子柱和SephadexG－100凝胶柱，从分心木中分离得到一多糖组分，经气相色谱分析，由葡萄糖、果糖、甘露糖、鼠李糖和阿拉伯糖组成；王艳梅等[9]利用气相色谱从分心木挥发油中分离鉴定出11种化学成分，分别是二苯基马来酐、乙酸、乙酸乙酯、乙酸－1－甲基乙基酯、油酸、十五酸、邻苯二甲酸二丁酯、棕榈酸、抗坏血酸酯和9，12－十八烷二烯酸等。
图1.4 核桃分心木中其他有效成分结构式
1.2 核桃分心木黄酮药理作用研究
分心木具有固肾涩精的传统功效，现代药理活性表明，除补肾作用外，分心木还具有抗菌、抗氧化等作用。黄酮类化合物广泛存在于自然界的植物中, 属植物次生代谢产物。实验研究表明,黄酮类化合物具有抗氧化、抗过敏、抗菌消炎、降血糖、抗病毒、抗肿瘤和护胃保肝等功效。
1.2.1 补肾作用
王艳等[10]采用氢化可的松致小鼠肾阳虚模型，以分心木不同溶剂提取部位的高、中、低剂量组给予干预，观察小鼠体质量增长率、各相关脏器系数等指标变化以及下丘脑、肾脏的病理组织学变化。结果表明，肾阳虚组小鼠出现大剂量皮质激素所致的全身耗竭现象，分心木乙醇提取物、正丁醇提取物以及水提取物组小鼠的全身耗竭现象出现不同程度的改善; 在小鼠体质量变化和脏器系数方面，各提取部位组与空白组、肾阳虚组比较均有不同程度的改善;正丁醇高剂量组、95%乙醇低剂量组可降低肾小球毛细血管通透性，对毛细血管扩张起到拮抗作用; 95%乙醇低剂量组、水煎液中剂量组可改善肾小管上皮细胞水肿现象; 正丁醇高中低剂量组、水煎液高中剂量组对胶质细胞水肿表现出改善作用。上述结果说明核桃分心木95% 乙醇提取物、正丁醇提取物以及水提取物各剂量组均不同程度地改善了小鼠模型肾阳虚症状。韩艳春等[11]研究发现，维吾尔药核桃分心木可改善氢化可的松所致小鼠的“阳虚”症状，其中，正丁醇提取物作用明显，这可能是治疗肾阳虚的物质基础，但通过何种微观结构改变、何种方式调节下丘脑－垂体－肾上腺轴的功能紊乱，有待进一步深入研究。
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