瞿麦中多糖的提取工艺及抗氧化活性的研究(附件)
摘 要本实验通过微波辅助法以陕产瞿麦全草为原料，提取溶剂选用纯化水，选用苯酚-硫酸法，以紫外-可见分光光度计测定吸光度,计算瞿麦中多糖的得率，以瞿麦多糖的得率作为评价指标，在单因素实验的基础上，通过响应曲面法对微波辅助法提取瞿麦中多糖的提取工艺进行优化。微波法提取瞿麦中多糖的最佳工艺为液料比321，温度80℃，微波时间为8min，提取功率为400W。测得瞿麦中多糖含量为3.785%。并对瞿麦多糖进行抗氧化活性实验，所得抗氧化活性顺序为温度>时间>功率>料液比。
目 录
1、概述 1
1.2 研究的目的和意义 1
1.3 瞿麦的概述 2
1.4 多糖的药理作用 2
1.4.1 免疫调节的作用 2
1.4.2 抗肿瘤 2
1.4.3 抗衰老 3
1.4.4 其他作用 3
1.5 多糖的提取方法 3
1.5.1 溶剂提取法 3
1.5.2 酸提法 3
1.5.3 碱提法 4
1.5.4 酶提法 4
1.5.5 超声提取法 4
1.5.6 超临界萃取法 4
1.5.7 微波提取法 5
2.1实验部分 6
2.1 实验仪器与材料 6
2.2 药材的前处理 7
2.3 标准溶液的配制 7
2.3.1 试剂的配制 7
2.3.2 波长的选择 7
2.3.3 标准曲线的绘制 7
2.3.4 多糖提取量的测定 8
2.4 方法学考察 8
2.4.1 重复性试验 8
2.4.2 稳定性试验 8 2.4.3 精密度试验 8
2.4.4 回收率试验 9
2.5 瞿麦多糖的提取工艺 9
2.6 单因素实验 9
2.6.1 液料比对瞿麦多糖提取量的影响 9
2.6.2 温度对瞿麦多糖提取量的影响 9
2.6.3 微波时间对瞿麦多糖提取量的影响 9
2.6.4 微波功率对瞿麦多糖提取量的影响 10
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2.7 瞿麦多糖的得率计算 10
2.8 响应曲面 10
2.9 抗氧化活性实验 10
2.9.1 还原力的测定 10
2.9.2 超氧阴离子自由基（O2)能力的测定 11
2.9.3 DPPH自由基清除率的测定 11
3、实验结果与分析 12
3.1 最大吸收波长的确定 12
3.2 葡萄糖标准曲线的绘制 12
3.3 方法学考察结果 13
3.3.1 重复性试验 13
3.3.2 稳定性试验 13
3.3.3 精密度试验 13
3.3.4 回收率试验 13
3.4 单因素的实验结果 14
3.4.1 料液比对瞿麦多糖得率的影响 14
3.4.2 微波温度对瞿麦多糖得率的影响 14
3.4.3 微波时间对瞿麦多糖得率的影响 15
3.4.4 微波功率对瞿麦多糖得率的影响 15
3.5 响应曲面试验结果及分析 16
3.5.1 微波提瞿麦多糖响应面试验设计及结果 16
3.5.2 回归方程方差分析 17
3.5.3回归模型方程 18
3.6 抗氧化实验的结果 21
3.6.1 还原能力的测定结果 21
3.6.2 超氧阴离子自由基（O2)清除能力的测定结果 22
3.6.3 DPPH自由基清楚率的测定结果 23
3.6.4抗氧化实验总结 24
结 论 25
参考文献 26
致谢 27
1 概述
1.1 多糖的研究背景
多糖是生物体内一类重要的大分子，除了储存能量和支持结构外，还是一类重要的信息分子，在生物体内起着信息传递的功能。近年来，人们发现一些多糖如香菇多糖、云芝多糖、茯苓多糖能够治疗免疫系统受到损伤而引发的一些疾病，无毒副作用，是一类有很大开发潜力的免疫调节剂，特别是多糖的一些衍生物，如硫酸酯化多糖，具有抗肿瘤和抗病毒的活性。为此，多糖在医药方面的应用渐渐引起人们的兴趣。? ?? ?? ?? ?? ???
越来越多的研究证明:多糖是非特异性的免疫调节剂,它主要影响网状内皮系统（RES)、淋巴细胞、白细胞以及RNA、DNA、蛋白质的合成,抗体的生成、补体的形成以及干扰素(IFN)的诱生,并具有抗肿瘤、抗炎、抗凝血、抗病毒、抗放射、降血糖、降血脂等活性。随着研究的深入,多糖在医疗上的价值越来越重要,新的用途不断被发现。此外多糖在日用化妆品方面,在食品工业、发酵工业及石油工业等行业上也有着广泛的应用。
1.2 研究的目的和意义
瞿麦中的主要成分为挥发油、糖类、黄酮、皂苷类等，瞿麦中总多糖含量相对同类产品较高，其利用价值也是比较高的。多糖具有免疫调节、抗病毒、延缓衰老、抗肿瘤、抗辐射的作用[1,2]。因为多糖的提取方法及其提取工艺至今尚未成熟，所以选择一种合适的提取方法对多糖的研究具有重大意义。
本课题选用微波提取法，该方法除了得率高，提取时间短等优势外，提取溶剂和操作简易、溶剂易得、设备投资少等优势。而且用微波法提取多糖成分与超声法相比该方式的优点是提取速度快，容易实现产业化；与回流法相比节省能源。本课题通过微波辅助提取瞿麦中多糖，通过响应曲面设计，优选出最佳工艺条件。再通过抗氧化实验研究多糖的抗氧化活性，为进一步高效合理地利用瞿麦资源提供依据。
抗氧化活性就是能有效清除体内有害自由基、防止脂质过氧化,防止自由基对生物大分子的氧化损伤,确保细胞结构与功能的正常。现代的病因病理学研究发现,人体的很多疾病,例如现代列为几大杀手的严重疾病，其发病及恶化的来源都是不同机体内产生的过氧化自由基离子的攻击密切相关。现代人的生活忙碌,职业竞争压力更大,加上像抽烟,饮酒,高脂饮食等不良的习惯,加快了体内过氧化自由基的产生,加重了这些自由基对人体膜脂质的攻击,故产生大量的过氧化脂质及其次级代谢产物。脂质过氧化反应是自由基的链式反应,这种反应可以存在在体内而且也可以发生在体外,反应产生了过氧化脂质及一些次级代谢产物,这些脂质过氧化物具有高活性和高反应性,容易与氨基酸、蛋白质等物质形成复合物,继而使它们变性导致各种疾病,加快了机体的衰老。
目 录
1、概述 1
1.2 研究的目的和意义 1
1.3 瞿麦的概述 2
1.4 多糖的药理作用 2
1.4.1 免疫调节的作用 2
1.4.2 抗肿瘤 2
1.4.3 抗衰老 3
1.4.4 其他作用 3
1.5 多糖的提取方法 3
1.5.1 溶剂提取法 3
1.5.2 酸提法 3
1.5.3 碱提法 4
1.5.4 酶提法 4
1.5.5 超声提取法 4
1.5.6 超临界萃取法 4
1.5.7 微波提取法 5
2.1实验部分 6
2.1 实验仪器与材料 6
2.2 药材的前处理 7
2.3 标准溶液的配制 7
2.3.1 试剂的配制 7
2.3.2 波长的选择 7
2.3.3 标准曲线的绘制 7
2.3.4 多糖提取量的测定 8
2.4 方法学考察 8
2.4.1 重复性试验 8
2.4.2 稳定性试验 8 2.4.3 精密度试验 8
2.4.4 回收率试验 9
2.5 瞿麦多糖的提取工艺 9
2.6 单因素实验 9
2.6.1 液料比对瞿麦多糖提取量的影响 9
2.6.2 温度对瞿麦多糖提取量的影响 9
2.6.3 微波时间对瞿麦多糖提取量的影响 9
2.6.4 微波功率对瞿麦多糖提取量的影响 10
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2.7 瞿麦多糖的得率计算 10
2.8 响应曲面 10
2.9 抗氧化活性实验 10
2.9.1 还原力的测定 10
2.9.2 超氧阴离子自由基（O2)能力的测定 11
2.9.3 DPPH自由基清除率的测定 11
3、实验结果与分析 12
3.1 最大吸收波长的确定 12
3.2 葡萄糖标准曲线的绘制 12
3.3 方法学考察结果 13
3.3.1 重复性试验 13
3.3.2 稳定性试验 13
3.3.3 精密度试验 13
3.3.4 回收率试验 13
3.4 单因素的实验结果 14
3.4.1 料液比对瞿麦多糖得率的影响 14
3.4.2 微波温度对瞿麦多糖得率的影响 14
3.4.3 微波时间对瞿麦多糖得率的影响 15
3.4.4 微波功率对瞿麦多糖得率的影响 15
3.5 响应曲面试验结果及分析 16
3.5.1 微波提瞿麦多糖响应面试验设计及结果 16
3.5.2 回归方程方差分析 17
3.5.3回归模型方程 18
3.6 抗氧化实验的结果 21
3.6.1 还原能力的测定结果 21
3.6.2 超氧阴离子自由基（O2)清除能力的测定结果 22
3.6.3 DPPH自由基清楚率的测定结果 23
3.6.4抗氧化实验总结 24
结 论 25
参考文献 26
致谢 27
1 概述
1.1 多糖的研究背景
多糖是生物体内一类重要的大分子，除了储存能量和支持结构外，还是一类重要的信息分子，在生物体内起着信息传递的功能。近年来，人们发现一些多糖如香菇多糖、云芝多糖、茯苓多糖能够治疗免疫系统受到损伤而引发的一些疾病，无毒副作用，是一类有很大开发潜力的免疫调节剂，特别是多糖的一些衍生物，如硫酸酯化多糖，具有抗肿瘤和抗病毒的活性。为此，多糖在医药方面的应用渐渐引起人们的兴趣。? ?? ?? ?? ?? ???
越来越多的研究证明:多糖是非特异性的免疫调节剂,它主要影响网状内皮系统（RES)、淋巴细胞、白细胞以及RNA、DNA、蛋白质的合成,抗体的生成、补体的形成以及干扰素(IFN)的诱生,并具有抗肿瘤、抗炎、抗凝血、抗病毒、抗放射、降血糖、降血脂等活性。随着研究的深入,多糖在医疗上的价值越来越重要,新的用途不断被发现。此外多糖在日用化妆品方面,在食品工业、发酵工业及石油工业等行业上也有着广泛的应用。
1.2 研究的目的和意义
瞿麦中的主要成分为挥发油、糖类、黄酮、皂苷类等，瞿麦中总多糖含量相对同类产品较高，其利用价值也是比较高的。多糖具有免疫调节、抗病毒、延缓衰老、抗肿瘤、抗辐射的作用[1,2]。因为多糖的提取方法及其提取工艺至今尚未成熟，所以选择一种合适的提取方法对多糖的研究具有重大意义。
本课题选用微波提取法，该方法除了得率高，提取时间短等优势外，提取溶剂和操作简易、溶剂易得、设备投资少等优势。而且用微波法提取多糖成分与超声法相比该方式的优点是提取速度快，容易实现产业化；与回流法相比节省能源。本课题通过微波辅助提取瞿麦中多糖，通过响应曲面设计，优选出最佳工艺条件。再通过抗氧化实验研究多糖的抗氧化活性，为进一步高效合理地利用瞿麦资源提供依据。
抗氧化活性就是能有效清除体内有害自由基、防止脂质过氧化,防止自由基对生物大分子的氧化损伤,确保细胞结构与功能的正常。现代的病因病理学研究发现,人体的很多疾病,例如现代列为几大杀手的严重疾病，其发病及恶化的来源都是不同机体内产生的过氧化自由基离子的攻击密切相关。现代人的生活忙碌,职业竞争压力更大,加上像抽烟,饮酒,高脂饮食等不良的习惯,加快了体内过氧化自由基的产生,加重了这些自由基对人体膜脂质的攻击,故产生大量的过氧化脂质及其次级代谢产物。脂质过氧化反应是自由基的链式反应,这种反应可以存在在体内而且也可以发生在体外,反应产生了过氧化脂质及一些次级代谢产物,这些脂质过氧化物具有高活性和高反应性,容易与氨基酸、蛋白质等物质形成复合物,继而使它们变性导致各种疾病,加快了机体的衰老。
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