蒺藜苜蓿wrky相关基因mtwrp1的克隆和表达分析

蒺藜苜蓿的遗传关系与苜蓿等豆科植物较为相近，并且蒺藜苜蓿的基因组较为简单，而大部分的豆科植物的基因组复杂，所以可以把蒺藜苜蓿作为模式植物，用来研究豆科植物。WRKY转录因子是植物转录调控因子中最大的转录因子家族，它们在植物的各种生物学进程中都有着非常重要的作用。WRKY相关蛋白WRP（WRKY Related Protein）作为一类新发现的豆科植物特有的功能蛋白，具有与WRKY相似但又独特的序列结构，因此具有类似于WRKY且新颖的生物学功能。本实验主要通过对蒺藜苜蓿中WRP基因进行克隆，分析MtWRP1基因的序列及其在不同组织器官及不同叶片不同时期中的表达。主要研究结果包括（1）MtWRP1的开放阅读框全长984 bp，共编码327个氨基酸，是豆科植物特有的一类基因。（2）与MtWRP1的氨基酸序列同源性最高的是GmWRP1，为60.36%。WRKY保守域的核心序列为WRKYGQK，而蒺藜苜蓿MtWRP1的C端具有一个类似WRKY保守域的结构，但是其核心序列突变为WKKYEEK，。（3）除了C端含有一个类似WRKY域，MtWRP1还含有一个特殊的N端TM域。MtWRP1蛋白的N端TM域是一个五次跨膜结构，与其最相近的同源物是鸟类真核细胞色素b561相似蛋白（cytochrome b561-like proteins，Cyts561）。（4）MtWRP1在蒺藜苜蓿的根、茎、叶、花、果实、种子中都有表达。其在根中的转录丰富度最高，在种子中的转录水平次之,说明MtWRP1在这些器官中具有一定的生物学功能。MtWRP1基因表达水平随着叶龄的增长而稳步增长，说明MtWRP1的表达受叶龄调控。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 2
引言 2
1 材料与方法 3
1．1 植物材料和生长条件 3
1．2 试剂与仪器 3
1．2．1 主要试剂 3
1．2．2 主要仪器 3
1．3 总RNA的提取、纯化及cDNA合成 3
1．3．1 总RNA提取 3
1．3．2 RNA的纯化和检测 4
1．3．3 cDNA第一链的合成 4 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@ 

1．4 MtWRP1 cDNA全长的分离 5
1．4．1 引物合成 5
1．4．2 PCR 反应体系及程序设置 5
1．4．3 DNA片段琼脂糖凝胶回收 5
1．5 克隆载体的构建 6
1．5．1 链接反应 6
1．5．2 大肠杆菌的转化与培养 6
1．5．3 阳性单克隆筛选及测序 6
1．6 生物信息分析 6
1．7 蒺藜苜蓿MtWRP1基因表达特性分析 6
1．7．1 蒺藜苜蓿不同组织器官的表达特性分析。 6
1．7．2 蒺藜苜蓿叶片不同时期表达特性分析 7
2 结果与分析 7
2．1 MtWRP1的生物信息学分析 7
2．1．1 蒺藜苜蓿总RNA的提取及检测 7
2．1．2 cDNA的检测 8
2．1．3 MtWRP1基因全长的克隆 9
2．1．4 蒺藜苜蓿WRKY相关基因MtWRP1的序列分析 9
2．1．5 蒺藜苜蓿WRKY相关基因MtWRP1的同源性分析 11
2．1．6 蒺藜苜蓿WRKY相关基因MtWRP1的理化性质分析 11
2．1．7 MtWRP1结构域分析 13
2．1．8 MtWRP1系统发生分析 14
2．2 MtWRP1基因在蒺藜苜蓿组织中的表达特性分析 16
3 讨论 17
致谢 18
参考文献 19
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