rsma基因在胡萝卜软腐果胶杆菌致病过程中的致病相关功能分析
已有转录组分析结果表明，黄花马蹄莲（Zantedeschia elliotiana）与胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种（Pectobacterterium carotovorum subsp. carotovorum）（PccS1）活体互作过程中，在不同时间点，均有数百个基因差异表达。其中包括编码核糖体小亚基甲基转移酶的rsmA基因。为了探究rsmA基因对胡萝卜软腐果胶杆菌的致病机制，本研究采用同源重组的方法成功构建了rsmA基因的缺失突变体（ΔrsmA），结果表明与野生型菌株相比，缺失突变体ΔrsmA菌株的致病能力上升；在相关生物学特性中，ΔrsmA菌株的游动性下降，沉降性、生物膜形成能力无明显变化；致病因子中，ΔrsmA菌株的三种胞外分解酶活性均无明显变化。同时，ΔrsmA菌株产生碳青霉烯抗生素的能力下降。初步说明，rsmA对PccS1的致病力具有负调控作用，其调控机制有待进一步研究。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1材料与方法2
1.1材料 2
1.1.1供试菌株和质粒2
1.1.2试剂和仪器2
1.1.3 培养基、抗生素及抗生素浓度2
1.1.4引物及限制性内切酶3
1.2缺失突变体的构建3
1.3致病性的测定4
1.4相关生物学特性检测4
1.4.1游动性测定4
1.4.2沉降性测定4
1.4.3生物膜测定4
1.5部分致病因子测定4
1.5.1纤维素酶活性测定4
1.5.2果胶酶活性测定4
1.5.3蛋白酶活性测定4
1.6碳青霉烯抗生素测定5
2结果与分析5
2.1突变菌株的构建5
2.2致病性测定结果5
2.3生物学特性测定结果5
2.4部分致病因子测定结果6
2.5碳青霉烯抗生素测定结果6
3讨论7
致谢7
参考文献7
RsmA基因在胡萝卜软腐果胶 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
杆菌致病过程中 的致病相关功能分析
引言
细菌性软腐病是一种世界性病害，胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种是引起细菌性软腐病的主要病原菌，它能致使马蹄莲全身组织软腐。胡萝卜软腐果胶杆菌除危害马蹄莲外,还可危害君子兰、郁金香、风信子、仙人掌、辣椒、茄子等多种观赏植物和蔬菜。
Pcc主要通过分泌多种细胞壁降解酶、植物毒素等侵染寄主植物。如:果胶酶,纤维素酶,蛋白酶等细胞壁降解酶。其中,果胶酶被认为是Pcc最主要的致病因子[1]。这些酶分解并利用中间薄层和细胞壁的果胶质,造成组织瓦解,细胞破坏及细胞质渗漏,从而造成软腐病的发生[2]。
已有研究表明，黄花马蹄莲与胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种活体互作过程中，在不同时间点，均有数百个基因差异表达。其中包括编码核糖体小亚基甲基转移酶的rsmA基因。rsmA是一种RNA结合蛋白,可以与很多基因位点上的mRNA结合,阻遏转录起始位点与核糖体结合,从而实现转录后的调控[3]。
为探究Pcc的rsmA基因及其基因产物的致病功能，本研究通过构建rsmA的缺失突变体，比较rsmA缺失突变体与野生型在致病性、生物学特性、相关致病因子的差异，探究该种基因及基因产物对致病性的影响，为细菌性软腐病的防治提供一定的科学依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 供试菌株和质粒 本研究所用质粒和供试菌株见表1。胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种野生型菌株PccSl于LB培养基中28 °C培养，大肠杆菌(Escherichia coli)于LB培养基中37 °C培养[4]。菌株Pcc的培养：液体培养和固体培养均在28℃进行，液体培养时置于摇床中，200 rpm培养1224 h[5]。
表1 本研究所用菌株和质粒
Table 1 Strains and plasmids used in this study
质粒/菌株
Strains /plasmids
相关特性Relevant characteristics
来源Source
Escherichia coli
DH5α
Φ80 lacZΔM15, (lacZYAargF)U169.recA1,endA1.thi1
Lab collection
S171λpir
λpir pro hsdR, recA
Lab collection
Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum
PccS1
Wild type RifR
Lab collection
PccS1R
RifR ，induced from PccS1 with resistance to Rif
This study
ΔrsmA
Rif R，Kan R，the rsmA gene knockout mutant of strain PccS1
This study
Plasmid
pEX18Gm
Allelic exchange suicide vector, sacB oriT(RP4) LacZ,GmR
Lab collection
pET30a
expression vector,Kan R
Lab collection
1.1.2 试剂和仪器
本研究所用引物由金唯智公司完成；rTaq聚合酶、T4DNALigaseDNA marker、限制性内切酶、T4 DNA连接酶均为Thermo Fisher Scientific公司提供；反转录试剂盒PrimeScriptTMRT Reagent ( Perfect Real Time ) Kit为TaKaRa公司提供；细菌基因组DNA提取试剂盒、琼脂糖凝胶回收试剂盒和质粒提取试剂盒均由Axygen公司提供；细菌RNA提取试剂盒由Bioteke公司提供；冷冻离心机、PCR仪和分光光度计均为Eppendorf公司提供；琼脂凝胶成像系统由BioRad公司提供，紫外分光光度计由 Thermo Nanodrop公司提供。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1材料与方法2
1.1材料 2
1.1.1供试菌株和质粒2
1.1.2试剂和仪器2
1.1.3 培养基、抗生素及抗生素浓度2
1.1.4引物及限制性内切酶3
1.2缺失突变体的构建3
1.3致病性的测定4
1.4相关生物学特性检测4
1.4.1游动性测定4
1.4.2沉降性测定4
1.4.3生物膜测定4
1.5部分致病因子测定4
1.5.1纤维素酶活性测定4
1.5.2果胶酶活性测定4
1.5.3蛋白酶活性测定4
1.6碳青霉烯抗生素测定5
2结果与分析5
2.1突变菌株的构建5
2.2致病性测定结果5
2.3生物学特性测定结果5
2.4部分致病因子测定结果6
2.5碳青霉烯抗生素测定结果6
3讨论7
致谢7
参考文献7
RsmA基因在胡萝卜软腐果胶 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
杆菌致病过程中 的致病相关功能分析
引言
细菌性软腐病是一种世界性病害，胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种是引起细菌性软腐病的主要病原菌，它能致使马蹄莲全身组织软腐。胡萝卜软腐果胶杆菌除危害马蹄莲外,还可危害君子兰、郁金香、风信子、仙人掌、辣椒、茄子等多种观赏植物和蔬菜。
Pcc主要通过分泌多种细胞壁降解酶、植物毒素等侵染寄主植物。如:果胶酶,纤维素酶,蛋白酶等细胞壁降解酶。其中,果胶酶被认为是Pcc最主要的致病因子[1]。这些酶分解并利用中间薄层和细胞壁的果胶质,造成组织瓦解,细胞破坏及细胞质渗漏,从而造成软腐病的发生[2]。
已有研究表明，黄花马蹄莲与胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种活体互作过程中，在不同时间点，均有数百个基因差异表达。其中包括编码核糖体小亚基甲基转移酶的rsmA基因。rsmA是一种RNA结合蛋白,可以与很多基因位点上的mRNA结合,阻遏转录起始位点与核糖体结合,从而实现转录后的调控[3]。
为探究Pcc的rsmA基因及其基因产物的致病功能，本研究通过构建rsmA的缺失突变体，比较rsmA缺失突变体与野生型在致病性、生物学特性、相关致病因子的差异，探究该种基因及基因产物对致病性的影响，为细菌性软腐病的防治提供一定的科学依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 供试菌株和质粒 本研究所用质粒和供试菌株见表1。胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种野生型菌株PccSl于LB培养基中28 °C培养，大肠杆菌(Escherichia coli)于LB培养基中37 °C培养[4]。菌株Pcc的培养：液体培养和固体培养均在28℃进行，液体培养时置于摇床中，200 rpm培养1224 h[5]。
表1 本研究所用菌株和质粒
Table 1 Strains and plasmids used in this study
质粒/菌株
Strains /plasmids
相关特性Relevant characteristics
来源Source
Escherichia coli
DH5α
Φ80 lacZΔM15, (lacZYAargF)U169.recA1,endA1.thi1
Lab collection
S171λpir
λpir pro hsdR, recA
Lab collection
Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorum
PccS1
Wild type RifR
Lab collection
PccS1R
RifR ，induced from PccS1 with resistance to Rif
This study
ΔrsmA
Rif R，Kan R，the rsmA gene knockout mutant of strain PccS1
This study
Plasmid
pEX18Gm
Allelic exchange suicide vector, sacB oriT(RP4) LacZ,GmR
Lab collection
pET30a
expression vector,Kan R
Lab collection
1.1.2 试剂和仪器
本研究所用引物由金唯智公司完成；rTaq聚合酶、T4DNALigaseDNA marker、限制性内切酶、T4 DNA连接酶均为Thermo Fisher Scientific公司提供；反转录试剂盒PrimeScriptTMRT Reagent ( Perfect Real Time ) Kit为TaKaRa公司提供；细菌基因组DNA提取试剂盒、琼脂糖凝胶回收试剂盒和质粒提取试剂盒均由Axygen公司提供；细菌RNA提取试剂盒由Bioteke公司提供；冷冻离心机、PCR仪和分光光度计均为Eppendorf公司提供；琼脂凝胶成像系统由BioRad公司提供，紫外分光光度计由 Thermo Nanodrop公司提供。
版权保护: 本文由 hbsrm.com编辑，转载请保留链接: www.hbsrm.com/nongxue/zwbh/243.html
