水稻稻瘟病效应因子avr1co39的重组表达与纯化
水稻稻瘟病是严重危害水稻安全生产的真菌病害之一。水稻与稻瘟病菌的相互作用模式符合“基因对基因”假说。在稻瘟病菌与水稻相互作用中，水稻抗性蛋白识别稻瘟病菌效应因子对激活下游防御反应是必不可少的。为深入了解效应因子AVR1-CO39的作用机制，本实验尝试利用大肠杆菌表达系统进行目标蛋白AVR1-CO39的重组表达，通过比较不同表达载体和表达菌株组合，在不同诱导温度和诱导时间等条件下目标蛋白的表达情况，筛选出较优的表达诱导条件，即:将pET-28a-AVR1-CO39导入E. coli BL21(DE3)中，37 °C、220 rpm摇至OD600至0.6~0.8左右，加入终浓度为0.1 mM的IPTG，之后转入18 °C、180 rpm诱导15~18小时，收集菌体。在此基础上，利用亲和层析、分子筛的等纯化手段，获取表达量高、纯度好、稳定性和均一的目标蛋白。最终我们通过优化纯化条件，建立了简单、有效的目标蛋白纯化流程。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1材料与方法3
1.1材料 3
1.1.1大肠杆菌菌株和质粒种类3
1.1.2 实验用培养基和溶液4
1.2方法 6
1.2.1表达载体构建6
1.2.1.1 引物设计6
1.2.1.2 PCR扩增及产物凝胶回收6
1.2.1.3变复性产生粘端7
1.2.1.4酶切表达载体 7
1.2.1.5连接表达载体 7
1.2.1.6热激转化及抗性筛 7
1.2.1.7阳性克隆的验证和确认 8
1.2.2 蛋白原核表达8
1.2.3三种蛋白层析技术8
1.2.3.1亲和层析8
1.2.3.2离子交换层析9
1.2.3.3分子筛层析9
2结果与分析9
2.1表达载体构建9
2.2 AVR1CO39蛋白表达与纯化10
2.2.1 小量诱导11
2.2.2亲和层析11
2.2.3分 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
子筛层析12
3讨论 12
致谢13
参考文献13
水稻稻瘟病效应因子AVR1CO39的重组表达与纯化
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摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1材料与方法3
1.1材料 3
1.1.1大肠杆菌菌株和质粒种类3
1.1.2 实验用培养基和溶液4
1.2方法 6
1.2.1表达载体构建6
1.2.1.1 引物设计6
1.2.1.2 PCR扩增及产物凝胶回收6
1.2.1.3变复性产生粘端7
1.2.1.4酶切表达载体 7
1.2.1.5连接表达载体 7
1.2.1.6热激转化及抗性筛 7
1.2.1.7阳性克隆的验证和确认 8
1.2.2 蛋白原核表达8
1.2.3三种蛋白层析技术8
1.2.3.1亲和层析8
1.2.3.2离子交换层析9
1.2.3.3分子筛层析9
2结果与分析9
2.1表达载体构建9
2.2 AVR1CO39蛋白表达与纯化10
2.2.1 小量诱导11
2.2.2亲和层析11
2.2.3分 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
子筛层析12
3讨论 12
致谢13
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水稻稻瘟病效应因子AVR1CO39的重组表达与纯化
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