阿莫西林克拉维酸钾片犬体内的药物动力学研究
阿莫西林克拉维酸钾片犬体内的药物动力学研究[20200507220430]
摘要：建立一种犬血浆中阿莫西林/克拉维酸的高效液相色谱检测方法（HPLC），同时研究阿莫西林/克拉维酸片给犬口服后在其体内的药物动力学过程，为其兽医临床用药提供科学依据。试验选用6只健康成年犬，按12.5 mg/kg.bw剂量口服给予阿莫西林/克拉维酸片。采用反相液相色谱法（RP-HPLC）测定血浆中阿莫西林、克拉维酸的药物浓度，3p97药动学计算软件处理血药浓度-时间数据，得出房室模型和药代动力学参数。结果显示：试验犬口服阿莫西林克拉维酸钾片后，阿莫西林的药物浓度-时间数据均符合一级吸收一室模型，其主要药动学参数分别为：AUC为15.37±3.25 mg/h/mL， Tmax为2.19±0.62 h，Cmax为2.31±0.61 μg /mL，CL为0.94±0.24 L/h/kg，Vd为2.90±0.88 L/Kg，t1/2β为2.22±0.67 h；克拉维酸的药物浓度-时间数据均符合一级吸收一室模型，其主要药动学参数分别为：AUC为2.19±1.69 mg/h/mL， Tmax为0.85±0.26 h，Cmax为0.83±0.78 μg/mL，CL为1.55±0.84 L/h/kg，Vd为2.30±0.93 L/Kg，t1/2β为1.09±0.17 h。
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关键字:阿莫西林克拉维酸钾片；犬；反相高效液相色谱法；药动学；
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言2
1 材料与方法2
1.1 材料 2
1.1.1 实验动物2
1.1.2药品与试剂2
1.1.3实验仪器2
1.2 试验方法 2
1.2.1血浆中阿莫西林和克拉维酸检测的色谱条件2
1.2.2主要工作液配制3
1.2.3给药方案与血样的采集3
1.2.4样品处理3
1.2.5 HPLC检测血浆中阿莫西林、克拉维酸的方法学建立3
1.3 数据的处理 5
2 试验结果5
2.1 克拉维酸和阿莫西林色谱检测方法的建立5
2.1.1 专属性考察5
2.1.2 标准曲线的制备7
2.1.3检测限及定量限8
2.1.4 回收率8
2.1.5 精密度8
2.1.6 稳定性试验结果9
2.2药时曲线与药动参数10
2.2.1犬体内阿莫西林和克拉维酸的药时曲线10
2.2.2犬体内阿莫西林和克拉维酸的药动学参数11
3分析与讨论12
3.1 关于阿莫西林和克拉维酸在血浆中的检测方法12
3.1.1阿莫西林在血浆中的检测方法12
3.1.2克拉维酸在血浆中的检测12
3.2关于阿莫西林和克拉维酸的药动学特征14
致谢14
参考文献15
阿莫西林/克拉维酸钾片在犬体内的药物动力学研究
引言
阿莫西林 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
是一种最常用的β-内酰胺类广谱抗生素 。克拉维酸属于不可逆性竞争型β-内酰胺酶抑制剂，与酶牢固结合后使酶失活，对金葡菌和革兰氏阴性杆菌都有作用[1]。两者可按不同质量配比组成复方制剂，克拉维酸可保护阿莫西林不被细菌产生的β-内酰胺酶灭活，从而可提高阿莫西林对产酶耐药菌的抗菌活性，扩大其抗菌谱。自1981年英国BEECHAM公司推出了阿莫西林与β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸钾组合成的复方制剂[1]以来，目前已在全世界范围内被广泛使用。阿莫西林/克拉维酸复合制剂对胃酸稳定，口服吸收良好，在国内外临床上被广泛应用于治疗敏感菌所致的呼吸道，泌尿、生殖系统，皮肤、软组织，骨、关节感染性疾病等。兽医临床上已有研究表明阿莫西林/克拉维酸钾在治疗宠物尿路疾病、呼吸道疾病[3]和预防手术后感染[4]等方面具有很好的疗效，其在宠物疾病治疗上具有广阔的前景。
目前人医药领域已有大量关于阿莫西林/克拉维酸药动学研究报道，而其在兽医领域的药动学研究主要集中在奶牛、猪和禽类[2]，对于宠物方面鲜有报道。本试验旨在建立一种犬血浆中阿莫西林-克拉维酸的高效液相色谱检测法，同时研究犬口服阿莫西林/克拉维酸片后的药物动力学过程，为指导兽医临床用药提供科学依据。
1 材料和方法
1.1材料
1.1.1实验动物
健康成年犬6只，体重在（6.5±1.5）kg。试验前未给予其他药物，饲喂不含抗菌药物的全价日粮，购买后适应饲养2周，确定健康且符合实验要求后用于试验。试验前禁食过夜，自由饮水，次日进行试验。
1.1.2药品与试剂
阿莫西林/克拉维酸钾片：规格：50 mg，批号：20140326；
阿莫西林对照品：中国药品生物制品检定所，含量：86.4%，批号：K0221206；
克拉维酸标准品：中国药品生物制品检定所，含量：95.0%，批号：130429-201307；
乙腈：美国TEDIA有限公司，色谱级（HPLC）；
乙酸乙酯：德国CNW科技公司，色谱级（HPLC）；
甲醇：美国TEDIA有限公司，色谱级（HPLC）；
试验用水：超纯水；
肝素钠注射液：江苏万邦生化医药股份有限公司，规格：2 mL：12500单位，
批号：111215；
二氯甲烷、磷酸，磷酸二氢钠均为分析纯级（AR）；
咪唑衍生化试剂：分析纯级（AR）。
1.1.3 实验仪器
高效液相色谱仪：Ailgent 1200型高效液相色谱仪；
紫外分光光度计：Lambda25行，Perkin-Elmer公司；
低温高速离心机：3K15型，德国SIGMA公司；
微型离心机：LC-LXJ-10K，上海领成生物科技有限公司；
隔膜真空泵：GM-0.33A型，天津市津腾实验设备有限公司；
电子分析天平：BS-210S型，北京赛多利斯天平有限公司；
pH计：梅特勒-托利多（上海）有限公司；
微型漩涡混合仪：WH-3型，上海沪西分析仪器厂 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
。
1.2 试验方法
1.2.1血浆中阿莫西林和克拉维酸检测的色谱条件
色谱柱：Waters XBridge C18柱(5 μm，250 mm×4.6 mm)
流动相：克拉维酸：0.05 mol/L磷酸氢二钠缓冲液（50%磷酸溶液调pH 2.0）：甲醇=98:2（V/V）
阿莫西林：0.05 mol/L磷酸氢二钠缓冲液（10%磷酸溶液调pH 3.0）：乙腈=98：2（V/V）
检测波长：克拉维酸：311 nm；阿莫西林：228 nm
柱温：克拉维酸:35℃；阿莫西林:40℃
流速： 0.85 mL/min
进样量：20 μL
1.2.2 主要工作液配制
10%和50%磷酸溶液：用超纯水按照7.5:1（体积比）稀释磷酸（85%），0.22 μm过滤即得10%磷酸溶液。用超纯水按照3.5:5（体积比）稀释磷酸（85%），0.22 μm过滤即得50%磷酸溶液，保存备用。
0.05mmol/L的磷酸二氢钠溶液：准确称取磷酸二氢钠3.9 g，置于500 mL容量瓶中，加入400 mL超纯水，充分溶解后，再加水定容至刻度，充分混匀后，用10%磷酸溶液调节pH至3.0或用50%磷酸溶液调节pH至2.0[2]，抽滤，脱气，待用。
阿莫西林标准工作液：精密称取阿莫西林对照品23.01 mg，置于100 mL容量瓶中，加超纯水充分溶解，得含量为200 μg/mL溶液，4 ℃保存备用。
克拉维酸标准工作液：精密称取克拉维酸对照品10.13 mg，置于100 mL容量瓶中，加超纯水充分溶解，得含量为100 μg/mL溶液，4 ℃保存备用。
咪唑衍生化试剂：准确称取10.00 g置于50 mL的容量瓶，加约30 mL超纯水溶解，加5 mol/L的盐酸2.5 mL，用盐酸调pH值至6.8，加水定容至50 mL，0.22 μm过滤即得，保存备用。
1.2.5.6.3 样品冻融稳定性
摘要：建立一种犬血浆中阿莫西林/克拉维酸的高效液相色谱检测方法（HPLC），同时研究阿莫西林/克拉维酸片给犬口服后在其体内的药物动力学过程，为其兽医临床用药提供科学依据。试验选用6只健康成年犬，按12.5 mg/kg.bw剂量口服给予阿莫西林/克拉维酸片。采用反相液相色谱法（RP-HPLC）测定血浆中阿莫西林、克拉维酸的药物浓度，3p97药动学计算软件处理血药浓度-时间数据，得出房室模型和药代动力学参数。结果显示：试验犬口服阿莫西林克拉维酸钾片后，阿莫西林的药物浓度-时间数据均符合一级吸收一室模型，其主要药动学参数分别为：AUC为15.37±3.25 mg/h/mL， Tmax为2.19±0.62 h，Cmax为2.31±0.61 μg /mL，CL为0.94±0.24 L/h/kg，Vd为2.90±0.88 L/Kg，t1/2β为2.22±0.67 h；克拉维酸的药物浓度-时间数据均符合一级吸收一室模型，其主要药动学参数分别为：AUC为2.19±1.69 mg/h/mL， Tmax为0.85±0.26 h，Cmax为0.83±0.78 μg/mL，CL为1.55±0.84 L/h/kg，Vd为2.30±0.93 L/Kg，t1/2β为1.09±0.17 h。
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关键字:阿莫西林克拉维酸钾片；犬；反相高效液相色谱法；药动学；
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言2
1 材料与方法2
1.1 材料 2
1.1.1 实验动物2
1.1.2药品与试剂2
1.1.3实验仪器2
1.2 试验方法 2
1.2.1血浆中阿莫西林和克拉维酸检测的色谱条件2
1.2.2主要工作液配制3
1.2.3给药方案与血样的采集3
1.2.4样品处理3
1.2.5 HPLC检测血浆中阿莫西林、克拉维酸的方法学建立3
1.3 数据的处理 5
2 试验结果5
2.1 克拉维酸和阿莫西林色谱检测方法的建立5
2.1.1 专属性考察5
2.1.2 标准曲线的制备7
2.1.3检测限及定量限8
2.1.4 回收率8
2.1.5 精密度8
2.1.6 稳定性试验结果9
2.2药时曲线与药动参数10
2.2.1犬体内阿莫西林和克拉维酸的药时曲线10
2.2.2犬体内阿莫西林和克拉维酸的药动学参数11
3分析与讨论12
3.1 关于阿莫西林和克拉维酸在血浆中的检测方法12
3.1.1阿莫西林在血浆中的检测方法12
3.1.2克拉维酸在血浆中的检测12
3.2关于阿莫西林和克拉维酸的药动学特征14
致谢14
参考文献15
阿莫西林/克拉维酸钾片在犬体内的药物动力学研究
引言
阿莫西林 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
目前人医药领域已有大量关于阿莫西林/克拉维酸药动学研究报道，而其在兽医领域的药动学研究主要集中在奶牛、猪和禽类[2]，对于宠物方面鲜有报道。本试验旨在建立一种犬血浆中阿莫西林-克拉维酸的高效液相色谱检测法，同时研究犬口服阿莫西林/克拉维酸片后的药物动力学过程，为指导兽医临床用药提供科学依据。
1 材料和方法
1.1材料
1.1.1实验动物
健康成年犬6只，体重在（6.5±1.5）kg。试验前未给予其他药物，饲喂不含抗菌药物的全价日粮，购买后适应饲养2周，确定健康且符合实验要求后用于试验。试验前禁食过夜，自由饮水，次日进行试验。
1.1.2药品与试剂
阿莫西林/克拉维酸钾片：规格：50 mg，批号：20140326；
阿莫西林对照品：中国药品生物制品检定所，含量：86.4%，批号：K0221206；
克拉维酸标准品：中国药品生物制品检定所，含量：95.0%，批号：130429-201307；
乙腈：美国TEDIA有限公司，色谱级（HPLC）；
乙酸乙酯：德国CNW科技公司，色谱级（HPLC）；
甲醇：美国TEDIA有限公司，色谱级（HPLC）；
试验用水：超纯水；
肝素钠注射液：江苏万邦生化医药股份有限公司，规格：2 mL：12500单位，
批号：111215；
二氯甲烷、磷酸，磷酸二氢钠均为分析纯级（AR）；
咪唑衍生化试剂：分析纯级（AR）。
1.1.3 实验仪器
高效液相色谱仪：Ailgent 1200型高效液相色谱仪；
紫外分光光度计：Lambda25行，Perkin-Elmer公司；
低温高速离心机：3K15型，德国SIGMA公司；
微型离心机：LC-LXJ-10K，上海领成生物科技有限公司；
隔膜真空泵：GM-0.33A型，天津市津腾实验设备有限公司；
电子分析天平：BS-210S型，北京赛多利斯天平有限公司；
pH计：梅特勒-托利多（上海）有限公司；
微型漩涡混合仪：WH-3型，上海沪西分析仪器厂 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
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1.2 试验方法
1.2.1血浆中阿莫西林和克拉维酸检测的色谱条件
色谱柱：Waters XBridge C18柱(5 μm，250 mm×4.6 mm)
流动相：克拉维酸：0.05 mol/L磷酸氢二钠缓冲液（50%磷酸溶液调pH 2.0）：甲醇=98:2（V/V）
阿莫西林：0.05 mol/L磷酸氢二钠缓冲液（10%磷酸溶液调pH 3.0）：乙腈=98：2（V/V）
检测波长：克拉维酸：311 nm；阿莫西林：228 nm
柱温：克拉维酸:35℃；阿莫西林:40℃
流速： 0.85 mL/min
进样量：20 μL
1.2.2 主要工作液配制
10%和50%磷酸溶液：用超纯水按照7.5:1（体积比）稀释磷酸（85%），0.22 μm过滤即得10%磷酸溶液。用超纯水按照3.5:5（体积比）稀释磷酸（85%），0.22 μm过滤即得50%磷酸溶液，保存备用。
0.05mmol/L的磷酸二氢钠溶液：准确称取磷酸二氢钠3.9 g，置于500 mL容量瓶中，加入400 mL超纯水，充分溶解后，再加水定容至刻度，充分混匀后，用10%磷酸溶液调节pH至3.0或用50%磷酸溶液调节pH至2.0[2]，抽滤，脱气，待用。
阿莫西林标准工作液：精密称取阿莫西林对照品23.01 mg，置于100 mL容量瓶中，加超纯水充分溶解，得含量为200 μg/mL溶液，4 ℃保存备用。
克拉维酸标准工作液：精密称取克拉维酸对照品10.13 mg，置于100 mL容量瓶中，加超纯水充分溶解，得含量为100 μg/mL溶液，4 ℃保存备用。
咪唑衍生化试剂：准确称取10.00 g置于50 mL的容量瓶，加约30 mL超纯水溶解，加5 mol/L的盐酸2.5 mL，用盐酸调pH值至6.8，加水定容至50 mL，0.22 μm过滤即得，保存备用。
1.2.5.6.3 样品冻融稳定性
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