猪流感病毒ha1和m1基因原核重组载体构建及表达鉴定
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）2
1 材料和方法3
1.1 材料3
1.1.1 病毒、质粒、载体及菌种3
1.1.2 主要试剂3
1.1.3 主要仪器3
1.1.4 主要试剂的配置4
2 试验方法5
2.1 原核重组载体构建5
2.1.1 猪流感病毒HA、M1基因的引物设计与合成5
2.1.2 病毒RNA提取5
2.1.3 cDNA扩增6
2.1.3.1 RTPCR加样体系6
2.1.3.2 RTPCR反应程序 6
2.1.3.3 cDNA鉴定加样体系 6
2.1.3.4 目的基因PCR反应程序6
2.1.3.5 目的基因回收 6
2.1.4 重组表达质粒的构建7
2.1.4.1 EcoRI和HindIII双酶切7
2.1.4.2 酶切后回收7
2.1.4.3 目的基因与表达载体的连接7
2.1.4.4 转化BL21细胞7
2.1.3.5 涂布氨苄平板8
2.1.4.6 重组质粒提取8
2.1.4.7 重组质粒PCR鉴定9
2.1.4.8 双酶切鉴定9
2.1.4.9 重组质粒的测序鉴定9
2.2 重组载体蛋白表达9
2.2.1 蛋白初步表达9
2.2.2 IPTG用量、诱导时间优化10
2.2.3 蛋白纯化、复性和浓度测定10
2.2.4 蛋白Western bloting 鉴定10
3 结果与分析11
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3.1 病毒抗原的制备11
3.1.1 HA1和M1基因的扩增11
3.1.2 重组质粒的酶切鉴定 11
3.2 重组质粒的PCR鉴定12
3.2.1 融合蛋白的诱导表达12
3.2.2 融合蛋白的可溶性分析13
3.3 Western blot 鉴定14
4 讨论14
致谢15
参考文献15
猪流感病毒HA1和M1基因原核重组载体构建及表达鉴定
【摘要】猪流感（swineinfluenza，SI）是由猪流感病毒（swineinfluenzavirus，SIV）引起的猪的一个传染病，并在世界各个地方广泛普及，给养猪业带来了很大的经济损失。猪流感病毒（SIV）蛋白包括核蛋白（NP）、基质蛋白（M）、血凝素（HA）、神经氨酸酶（NA）、聚合酶蛋白（PA、PB1和PB2）和非结构蛋白（NS）。本次试验制备的HA1和可溶性的M1重组蛋白，并且具备良好的抗原性，能大量表的表达，为将来猪流感的研发提供一定的借鉴作用，为猪流感的诊断和防控提供指导作用。
【关键词】猪流感；HA1；M1；基质蛋白
Construction and expression of Prokaryotic Recombinant Vector of HA1 and M1 gene of swine influenza virus
Student majoring in Animal medicine Name：matkurbanakram
Tutor ma wen qiang
【Abstract】Swine flu (swineinfluenza, SI) is an infectious disease of pigs caused by the swine flu virus (swineinfluenzavirus, SIV). Swine flu was dicovered in various parts of the world, which?brought great economic losses?to swine industry. Swine influenza virus (SIV) proteins are consisted of nucleoprotein (NP), the matrix protein (M), hemagglutinin (HA), neuraminidase (NA), polymerase proteins (PA, PB1 and PB2) and nonstructural proteins (NS ). In this study, the soluble recombinant?M1 proteins have?been shown to be?good antigens and could be developed to?produce?on a large scale. The soluble recombinant?M1 protein is would be very useful in?guidelines for diagnosis and prevention of swine flu.
【Key words】Swine influenza; HA1; M1; Matrix protein
引言
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