地区健康猪猪链球菌分子流行病学调查
猪链球菌是一种重要的人兽共患病病原，由其引起的猪链球菌病给养猪业带来巨大的危害。猪链球菌有33个荚膜血清型（1~31型、33型、1/2型），其中2型(SS2)是毒力最强最常见的血清型。本研究通过PCR方法扩增猪链球菌谷氨酸脱氢酶（gdh）基因和荚膜多糖（cps）基因检测猪链球菌群和猪链球菌1型、2型、7型、9型，对猪链球菌的流行病学进行调查。本次试验从江苏省2个猪场采集的200份不同生长阶段健康猪的鼻拭子，进行增菌培养后用PCR方法进行猪链球菌鉴定并进行1型、2型、7型、9型分型鉴定。结果共检测到107株猪链球菌，检出率为53.5%，其中猪链球菌1型1株，2型3株，7型4株，9型15株。结果提示这两个猪场带菌现象普遍，存在威胁。
目录
摘要 1
关键词..............................................................................................................................................1
Abstract ........................................................................................................................................1
Key words........................................................................................................................................1
引言 1
1. 材料与方法 2
1.1 菌株 2
1.2主要试剂和仪器 2
1.2.1主要仪器..................................................................................................................... *好棒文|www.hbsrm.com +Q: &351916072&
.......2
1.2.2主要试剂............................................................................................................................2
1.3引物 2
1.4健康猪鼻拭子的采集 3
1.5增菌培养 3
1.6 DNA提取 3
1.7猪链球菌种、型的鉴定 3
1.7.1 PCR扩增体系 3
1.7.2 PCR反应条件.....................................................................................................................3
1.7.3 PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳.................................................................................3
2. 结果 3
2.1不同猪场猪链球菌分布情况 3
2.1.1采集自金坛某猪场的100个样本 3
2.1.2采集自常州某猪场的100个样本 5
2.1.3两个猪场结果总计 6
3. 分析和讨论 7
致谢 7
参考文献： 7
江苏地区健康猪猪链球菌分子流行病学调查
引言
猪链球菌（Streptococcus suis, S.suis)是一种严重危害养猪业的重要病原之一。自20世纪50年代初期证实以来，荷兰、英国、美国等世界许多国家先后报道了猪链球菌病。近年来，国内猪链球菌病的发生呈现上升趋势。猪链球菌能引起猪的关节炎、脑膜炎、胸膜肺炎、败血症、脓肿等，各年龄段猪都可感染此病，但多发于3~12周龄的猪，尤其是断奶仔猪易感染此病[1]。由于目前还没有十分有效的疫苗和快速检测方法，因此该病在世界范围内广为流行，并能起人的脑膜炎、败血症等，导致严重疾患，甚至死亡[2]。
根据链球菌菌体荚膜抗原特性的不同，猪链球菌可分为33个血清型，即1型~31型、33型和1/2型。有的型没有致病性，有的型具有致病性，在致病性血清型中，2型的致病力最强，发病率高，流行范围广，其次是1型、7型和9型[3]。对猪链球菌及其1型、2型、7型、9型的流行病学研究可以较好的掌握猪链球菌病的流行情况，对其防治可以起到重要作用。本研究通过PCR检测方法，对采集自江苏地区金坛某猪场、常州某猪场的200份不同生长阶段健康猪的鼻拭子进行猪链球菌1型、2型、7型、9型的流行病学调查，以期对样本来源猪场的猪链球菌病的监管和临床治疗提供参考。
材料与方法
1.1 菌株
猪链球菌1型标准株：5428、猪链球菌2型分离株：SS21（由江苏省农业科学院兽医研究所人兽共患病防控研究室分离、鉴定并保存）、猪链球菌7型标准株：8074、猪链球菌9型标准株：22083。
1.2主要试剂和仪器
1.2.1主要仪器 台式高速离心机Centrifuge 5418（艾本德中国有限公司）、
梯度PCR仪TP600（TaKaRa公司）、水平电泳槽DYCP31DN型 （北京市六一仪器厂）、直流电泳仪DYY11型 （京市六一仪器厂）、恒温箱、掌上离心机、摇床、水浴锅等。
1.2.2主要试剂 2×PCR Taq MasterMix（abm生物科技公司）、DEPC处理水（北京索莱宝科技有限公司）、新生牛血清（上海汇仁医药有限公司）、NAD（sigma分装）、DL2000Marker、1×TAE、50×TAE电泳缓冲液（Tris 242g，Na2EDTA2H2O 37.2g，加入800ml ddH2O，搅拌、溶解，加入57.1ml醋酸，加ddH2O定容至1L）、1.2%琼脂糖凝胶、胰蛋白胨、ddH2O等。
1.3引物
谷氨酸脱氢酶（gdh）和荚膜多糖（cps）分别为鉴定猪链球菌和鉴定猪链球菌血清型的基因[4]。Gdh基因和猪链球菌1型、2型、7型、9型引物设计如下表1所示：
表1：引物序列及预期片段大小
序号
引物名称
引物序列（5’→3’）
产物大小/bp
1
SSGDH57 P1
CCATGGACAGATAAAGATGG
689
SSGDH57 P2
GCAGCGTATTCTGTCAAACG
目录
摘要 1
关键词..............................................................................................................................................1
Abstract ........................................................................................................................................1
Key words........................................................................................................................................1
引言 1
1. 材料与方法 2
1.1 菌株 2
1.2主要试剂和仪器 2
1.2.1主要仪器..................................................................................................................... *好棒文|www.hbsrm.com +Q: &351916072&
.......2
1.2.2主要试剂............................................................................................................................2
1.3引物 2
1.4健康猪鼻拭子的采集 3
1.5增菌培养 3
1.6 DNA提取 3
1.7猪链球菌种、型的鉴定 3
1.7.1 PCR扩增体系 3
1.7.2 PCR反应条件.....................................................................................................................3
1.7.3 PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳.................................................................................3
2. 结果 3
2.1不同猪场猪链球菌分布情况 3
2.1.1采集自金坛某猪场的100个样本 3
2.1.2采集自常州某猪场的100个样本 5
2.1.3两个猪场结果总计 6
3. 分析和讨论 7
致谢 7
参考文献： 7
江苏地区健康猪猪链球菌分子流行病学调查
引言
猪链球菌（Streptococcus suis, S.suis)是一种严重危害养猪业的重要病原之一。自20世纪50年代初期证实以来，荷兰、英国、美国等世界许多国家先后报道了猪链球菌病。近年来，国内猪链球菌病的发生呈现上升趋势。猪链球菌能引起猪的关节炎、脑膜炎、胸膜肺炎、败血症、脓肿等，各年龄段猪都可感染此病，但多发于3~12周龄的猪，尤其是断奶仔猪易感染此病[1]。由于目前还没有十分有效的疫苗和快速检测方法，因此该病在世界范围内广为流行，并能起人的脑膜炎、败血症等，导致严重疾患，甚至死亡[2]。
根据链球菌菌体荚膜抗原特性的不同，猪链球菌可分为33个血清型，即1型~31型、33型和1/2型。有的型没有致病性，有的型具有致病性，在致病性血清型中，2型的致病力最强，发病率高，流行范围广，其次是1型、7型和9型[3]。对猪链球菌及其1型、2型、7型、9型的流行病学研究可以较好的掌握猪链球菌病的流行情况，对其防治可以起到重要作用。本研究通过PCR检测方法，对采集自江苏地区金坛某猪场、常州某猪场的200份不同生长阶段健康猪的鼻拭子进行猪链球菌1型、2型、7型、9型的流行病学调查，以期对样本来源猪场的猪链球菌病的监管和临床治疗提供参考。
材料与方法
1.1 菌株
猪链球菌1型标准株：5428、猪链球菌2型分离株：SS21（由江苏省农业科学院兽医研究所人兽共患病防控研究室分离、鉴定并保存）、猪链球菌7型标准株：8074、猪链球菌9型标准株：22083。
1.2主要试剂和仪器
1.2.1主要仪器 台式高速离心机Centrifuge 5418（艾本德中国有限公司）、
梯度PCR仪TP600（TaKaRa公司）、水平电泳槽DYCP31DN型 （北京市六一仪器厂）、直流电泳仪DYY11型 （京市六一仪器厂）、恒温箱、掌上离心机、摇床、水浴锅等。
1.2.2主要试剂 2×PCR Taq MasterMix（abm生物科技公司）、DEPC处理水（北京索莱宝科技有限公司）、新生牛血清（上海汇仁医药有限公司）、NAD（sigma分装）、DL2000Marker、1×TAE、50×TAE电泳缓冲液（Tris 242g，Na2EDTA2H2O 37.2g，加入800ml ddH2O，搅拌、溶解，加入57.1ml醋酸，加ddH2O定容至1L）、1.2%琼脂糖凝胶、胰蛋白胨、ddH2O等。
1.3引物
谷氨酸脱氢酶（gdh）和荚膜多糖（cps）分别为鉴定猪链球菌和鉴定猪链球菌血清型的基因[4]。Gdh基因和猪链球菌1型、2型、7型、9型引物设计如下表1所示：
表1：引物序列及预期片段大小
序号
引物名称
引物序列（5’→3’）
产物大小/bp
1
SSGDH57 P1
CCATGGACAGATAAAGATGG
689
SSGDH57 P2
GCAGCGTATTCTGTCAAACG
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