热应激对小鼠海马神经元细胞ht22的影响及其机制的探究(附件)【字数：6342】
11 材料与方法 31.1 材料 31.2 小鼠HT-22细胞的体外培养实验 31.3 小鼠HT-22细胞热应激后细胞活力检测实验 31.4 小鼠HT-22细胞热应激后的细胞凋亡检测实验 41.5 小鼠HT-22细胞热应激后的细胞ROS和膜电位的检测实验 41.6 小鼠HT-22细胞热应激后的RNA相关表达的实验 42 结果与分析 62.1 HT-22细胞状态的变化 62.2 细胞活力的变化 62.3 细胞凋亡与增殖的改变 62.4细胞ROS与膜电位的改变 72.5热应激相关基因表达的结果 93 讨论 11致谢 13参考文献 14热应激对小鼠海马神经元细胞HT-22的影响及其机制的探究动物医学专业学生 郭佳禾指导教师 赵茹茜热应激(heat stress)是指机体对其不利的热环境 产生的非特异性应答反应的综合。热应激常见于畜牧生产，同时对动物的生产性能有很大的影响。所以研究热应激对于动物体的影响一直是研究热点。中枢神经系统是动物体中最重要的系统，在热应激时会产生许多非特异性反应，本实验在对海马神经元HT-22细胞的体外培养的基础上，给予热应激条件的处理。观察了热应激不同时间的细胞活力变化，细胞凋亡的变化，以及相关蛋白和基因表达的变化。通过相关的研究发现随着热应激时间的增长HT-22的细胞活力开始逐渐下降。通过流失细胞仪检测细胞凋亡，发现热应激8H小时的细胞坏死和凋亡有明显的增加。Western blot显示细胞增殖明显下降。
目录
Effect of heat stress on HT22 in hippocampal neurons of mice and its mechanism
Student majoring in Veterinary Medicine Jiahe Guo
Tutor Ruqian Zhao
Abstract：Heat stress (heat stress) refers to the synthesis of nonspecific responses produced by the bodys adverse thermal environment. Heat stress is often seen in live *好棒文|www.hbsrm.com +Q: &351916072&
stock production and has a great impact on the animals performance. Therefore， the study of the effects of heat stress on animal bodies has been the focus of research. The central nervous system is the most important system in the animal body， the heat stress will produce a lot of non specific reaction， this experiment based on HT22 in cultured hippocampal neuronal cells in vitro， treated with heat stress conditions. The changes of cell viability， apoptosis， and the changes of related proteins and gene expression were observed at different times of heat stress. Through related studies， it was found that the cell viability of HT22 began to decrease gradually with the increase of heat stress time. Apoptosis was detected by loss cytometry， and the necrosis and apoptosis of 8H cells were increased obviously in the course of heat stress. Western blot showed a marked decrease in cell proliferation.
Key words: heat stress；Hippocampal neurons；Proliferation and apoptosis；Cell viability
热应激(heat stress)指机体产生的非特异性的综合应答反应来抵抗不利的热环境，一般都有显著的高热和脱水等生理行为上的一系列变化[1]。热应激反应的产生需要机体生存温度超过一个上限，该上限也称为生存温度舒适区。有研究表明[2]小鼠在 40 ℃温度下进行刺激60min，虽然其生命体征仍能在该范围内保持平稳，但其空间参考与工作记忆能力因热应激而显著下降。另外小鼠自身的学习记忆会被热应激影响，在热应激后早期0～6 h内学习和记忆能力表现为受损，但恢复12h时已经基本恢复至正常水平，24h后完全恢复至正常水平[3]。
家兔受到热应激后体温若升高2~3℃，则其兔脑组织和视网膜的HSP70和HSP90合成蛋白表达量升高。在家兔视网膜细胞内诱导产生的HSP70可经轴突转运至视神经。同理啮齿类动物在全身发生高热时都会出现HSP表达升高的情况，体内和体外研究均发现，脑组织中也有HSP70 的诱导，以大脑微血管系统最为明显[45]。目前，已经描记出大鼠视网膜和角膜上皮在全身高热的情况下，HSP70蛋白和mRNA的表达图谱。早期的研究集中在蛋白质水平， 即哺乳动物脑组织HSP70的快速合成。Northern Blotting 检测发现，家兔体温升高 2~3℃， 1h后脑组织内即有大量的2.7kb的 HSP mRNA的 表达， 而对照组动物仅有2.5kb的mRNA 表达。家兔基因组测序证明其中中含有HSP70基因家族，包括HSC70和HSP70[6]。在脑组织中 2.7kb HSP70 转录呈一过性，并且与体温升高和降低呈平行状态，而2.5kb HSC70mRNA则几乎没有改变，且这种一过性的转录情况在对照组中没有见到，所以应该建议在以后的研究中进一步研究神经系统内 HSP基因在不同脑区以及不同类型神经细胞的表达及其原因[7]。哺乳动物神经系统热应激基因的表达图谱分析可以帮助我们进一步理解某些脑细胞对不同形式损伤和神经系统疾病的易患性。
下丘脑是体温调节的基本中枢。在20世纪40年代，采用定向刺激法和局部损毁法证明下丘脑前部为散热中枢，后外侧部为产热中枢。机体的温度感受器在接受内、外环境温度的刺激信号后，通过体温调节中枢的活动，引起骨骼肌、各种分泌腺、 皮肤血管等组织器官活动的改变，调整机体的产热和散热的过程，使体温维持在一个相对恒定的水平。FOS蛋白作为神经元活动状态的标记物，目前国际上已被广泛采用[8]，24℃时，FOS阳性细胞较少，分布无明显核团；热应激后，大鼠中枢内多个部位出现FOS表达。34℃热应激时时，下丘脑室旁核（PVN ）和下丘脑视上核（SON）内有少量的FOS阳性神经元表达。38.5℃热应激时，PVN 和SON内的FOS阳性细胞明显增加，达到峰值，结合大鼠的行为学表现，此时大鼠体内的渗透压已经发生改变，其处于高渗状态，而SON和PVN不光是维持机体水盐平衡的重要中枢，同时也参与对机体损伤、应激等反应的调节，研究表明此时FOS蛋白集中分布于这两个核团，正说明了这一点。42℃时SON和PVN的FOS阳性神经元表达明显减少，可能是由于当温度到达42℃时，机体受到损伤，机能处于抑制状态的原故。说明环境温度升高到达38.5℃时，机体处于兴奋状态，FOS表达增加；温度到达42℃时，机体反而处于抑制状态，FOS表达也减少[911]。所以在热应激温度轻微上升是FOS基因表达是升高的。而强烈的热应激会导致FOS表达的下降。
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Effect of heat stress on HT22 in hippocampal neurons of mice and its mechanism
Student majoring in Veterinary Medicine Jiahe Guo
Tutor Ruqian Zhao
Abstract：Heat stress (heat stress) refers to the synthesis of nonspecific responses produced by the bodys adverse thermal environment. Heat stress is often seen in live *好棒文|www.hbsrm.com +Q: &351916072&
stock production and has a great impact on the animals performance. Therefore， the study of the effects of heat stress on animal bodies has been the focus of research. The central nervous system is the most important system in the animal body， the heat stress will produce a lot of non specific reaction， this experiment based on HT22 in cultured hippocampal neuronal cells in vitro， treated with heat stress conditions. The changes of cell viability， apoptosis， and the changes of related proteins and gene expression were observed at different times of heat stress. Through related studies， it was found that the cell viability of HT22 began to decrease gradually with the increase of heat stress time. Apoptosis was detected by loss cytometry， and the necrosis and apoptosis of 8H cells were increased obviously in the course of heat stress. Western blot showed a marked decrease in cell proliferation.
Key words: heat stress；Hippocampal neurons；Proliferation and apoptosis；Cell viability
热应激(heat stress)指机体产生的非特异性的综合应答反应来抵抗不利的热环境，一般都有显著的高热和脱水等生理行为上的一系列变化[1]。热应激反应的产生需要机体生存温度超过一个上限，该上限也称为生存温度舒适区。有研究表明[2]小鼠在 40 ℃温度下进行刺激60min，虽然其生命体征仍能在该范围内保持平稳，但其空间参考与工作记忆能力因热应激而显著下降。另外小鼠自身的学习记忆会被热应激影响，在热应激后早期0～6 h内学习和记忆能力表现为受损，但恢复12h时已经基本恢复至正常水平，24h后完全恢复至正常水平[3]。
家兔受到热应激后体温若升高2~3℃，则其兔脑组织和视网膜的HSP70和HSP90合成蛋白表达量升高。在家兔视网膜细胞内诱导产生的HSP70可经轴突转运至视神经。同理啮齿类动物在全身发生高热时都会出现HSP表达升高的情况，体内和体外研究均发现，脑组织中也有HSP70 的诱导，以大脑微血管系统最为明显[45]。目前，已经描记出大鼠视网膜和角膜上皮在全身高热的情况下，HSP70蛋白和mRNA的表达图谱。早期的研究集中在蛋白质水平， 即哺乳动物脑组织HSP70的快速合成。Northern Blotting 检测发现，家兔体温升高 2~3℃， 1h后脑组织内即有大量的2.7kb的 HSP mRNA的 表达， 而对照组动物仅有2.5kb的mRNA 表达。家兔基因组测序证明其中中含有HSP70基因家族，包括HSC70和HSP70[6]。在脑组织中 2.7kb HSP70 转录呈一过性，并且与体温升高和降低呈平行状态，而2.5kb HSC70mRNA则几乎没有改变，且这种一过性的转录情况在对照组中没有见到，所以应该建议在以后的研究中进一步研究神经系统内 HSP基因在不同脑区以及不同类型神经细胞的表达及其原因[7]。哺乳动物神经系统热应激基因的表达图谱分析可以帮助我们进一步理解某些脑细胞对不同形式损伤和神经系统疾病的易患性。
下丘脑是体温调节的基本中枢。在20世纪40年代，采用定向刺激法和局部损毁法证明下丘脑前部为散热中枢，后外侧部为产热中枢。机体的温度感受器在接受内、外环境温度的刺激信号后，通过体温调节中枢的活动，引起骨骼肌、各种分泌腺、 皮肤血管等组织器官活动的改变，调整机体的产热和散热的过程，使体温维持在一个相对恒定的水平。FOS蛋白作为神经元活动状态的标记物，目前国际上已被广泛采用[8]，24℃时，FOS阳性细胞较少，分布无明显核团；热应激后，大鼠中枢内多个部位出现FOS表达。34℃热应激时时，下丘脑室旁核（PVN ）和下丘脑视上核（SON）内有少量的FOS阳性神经元表达。38.5℃热应激时，PVN 和SON内的FOS阳性细胞明显增加，达到峰值，结合大鼠的行为学表现，此时大鼠体内的渗透压已经发生改变，其处于高渗状态，而SON和PVN不光是维持机体水盐平衡的重要中枢，同时也参与对机体损伤、应激等反应的调节，研究表明此时FOS蛋白集中分布于这两个核团，正说明了这一点。42℃时SON和PVN的FOS阳性神经元表达明显减少，可能是由于当温度到达42℃时，机体受到损伤，机能处于抑制状态的原故。说明环境温度升高到达38.5℃时，机体处于兴奋状态，FOS表达增加；温度到达42℃时，机体反而处于抑制状态，FOS表达也减少[911]。所以在热应激温度轻微上升是FOS基因表达是升高的。而强烈的热应激会导致FOS表达的下降。
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