一猪场仔猪肠道大肠杆菌噬菌体的分离鉴定
近几年，肠道内噬菌体受到越来越多的关注已有研究表明肠道噬菌体的种类和数量直接影响着肠道内的生理状态或微生物区系。本研究利用之前从猪肠道内分离鉴定得到大肠杆菌为指示菌，分离安徽一猪场仔猪断奶前和断奶后粪样中大肠杆菌噬菌体，并鉴定分析各个样品中分离到的噬菌体。研究结果发现有些噬菌体可以一直存在于断奶前和断奶后，有些噬菌体只存在于断奶前，有些噬菌体断奶后才出现而且断奶后出现更多的噬菌体，且断奶后出现的噬菌体宿主谱更广。本研究首次研究了仔猪肠道大肠杆菌噬菌体分布情况，为进一步研究仔猪肠道大肠杆菌噬菌体对肠道健康的影响奠定基础。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1试剂和仪器2
1.1.1试剂2
1.1.2试剂的配置2
1.1.3耗材2
1.1.4仪器2
1.2试验方法2
1.2.1采样和处理2
1.2.2噬菌体的分离和纯化2
1.2.3噬菌体的保存3
1.2.4点滴法测定宿主谱3
1.2.5酶切3
1.2.6提噬菌体基因组3
1.2.7噬菌体电镜观察4
2 结果与分析4
2.1噬菌体的初步分离 4
2.2噬菌体的宿主谱测定 5
2.3噬菌体的酶切图谱分析 6
2.4电镜观察噬菌体形态 7
3 讨论8
3.1仔猪肠道噬菌体的分布 8
3.2噬菌体宿主谱的鉴定 8
3.3噬菌体的分离和保存 8
致谢9
参考文献 9
安徽一猪场仔猪肠道大肠杆菌噬菌体的分离鉴定
引言
人和动物肠道内的微生物区系是地球上最高密度、最复杂的生态系统之一，每克粪便中细菌的数量可高达1013。噬菌体（bacteriophage, phage）是寄生于细菌、霉形体、螺旋体、放线菌以及蓝细菌等的一类病毒，亦称细菌病毒。在自然界分布极广，凡是有上述各类微生物的地方，都有相应种类噬菌体的 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
存在，其数目与寄主的数量成正比[1]。噬菌体是地球上增殖能力最强，数量最多的物种之一，它存在于任何有细菌的地方，影响着各种生态系统中细菌的数量。近几年，肠道内噬菌体和微生物菌群之间的关系受到越来越多的关注。噬菌体与细菌间的“捕食效应”使它们之间存在着动态变化关系，噬菌体的种类和数量直接影响着肠道内的生理状态或微生物区系[2] 。大肠杆菌在仔猪阶段对仔猪的影响十分巨大，因为大部分仔猪腹泻都是由大肠杆菌引起的。那仔猪肠道的大肠杆菌噬菌体对大肠杆菌有影响吗？Golomidova 等 (2007)研究发现，马的粪便中大肠杆菌的多样性与大肠杆菌噬菌体感染的选择压力有关[3]。所以本试验将首次以仔猪肠道大肠杆菌噬菌体为研究对象，研究大肠杆菌噬菌体在仔猪肠道的分布规律，为将来研究肠道大肠杆菌噬菌体对大肠杆菌的影响奠定基础。
1 材料与方法
1.1 试剂和仪器
1.1.1 试剂：
胰蛋白胨 Tryptone 购于 OXOID 公司
酵母提取物 Yeast Extract 购于 OXOID 公司
琼脂粉 Agar 购于 DSBIO 公司
1.1.2 试剂的配置：
（1）PBS 缓冲液：NaCl 8g，KCl 0.2g，NaHPO412H2O 3.63g，KH2PO4 0.24g，加 H2O 至 1000ml，pH7.4 ，121℃ 20min 高压灭菌
（2）液体 LB 培养基:胰蛋白胨 10g，酵母提取物 5g，氯化钠 10g，加 H2O 至 1000ml，pH7.4 ，121℃ 20min 高压灭菌
（3）固体 LB 培养基：每 1000ml 液体 LB 培养基加入 15g 琼脂粉，121℃ 20min 高压灭菌
（4）半固体 LB 培养基：每 1000ml 液体 LB 培养基加入 7.5g 琼脂粉，121℃ 20min 高压灭菌
（5）SM 液：NaCl 5.8g，MgSO47H2O 2g，1M Tris.Cl（pH7.5）50ml，2%明胶溶液（m/V）5ml，加 H2O 至 1000ml，121℃ 20min 高压灭菌
1.1.3 耗材：
0.22μm针头式过滤器 Millipore公司
20ml一次性使用配药用注射器 常州金龙医用塑料器械有限公司
1.1.4 仪器：
台式高速冷冻离心机 Kendro公司
涡旋振荡器 Scientific Industries
台式恒温振荡器 Crystal 公司
生物洁净工作台 苏州安泰空气技术有限公司
高温灭菌器 KAGOSHIMA SEISAKUSYO LSC
隔水式电热恒温培养箱 上海市跃进医疗器械一厂
微量紫外分光光度 Thermo
电子天平 赛多利斯科学仪器（北京）有限公司
1.2 试验方法
1.2.1 采样和处理
猪场情况:安徽宝迪种猪场:规模约5000头基础母猪;品系为美系杜长二元猪;厂区虽然设备较旧,但卫生条件及生产管理较好。
采样：本试验选取断奶前和断奶后的仔猪为研究对象，选择安徽一猪场共10窝健康仔猪，每窝选取3只健康仔猪，采集5窝仔猪断奶前2天的粪样及5窝仔猪断奶后每天粪样（持续一周），混合其粪便，共10份样品，记录粪样的状态。
处理：取1g粪样与20ml PBS缓冲液混匀并握旋，5000 r/min离心10min，去掉固体，取上清液，再12000 r/min离心20min，取上清液。最后用0.22μm微孔滤膜过滤后待用。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1试剂和仪器2
1.1.1试剂2
1.1.2试剂的配置2
1.1.3耗材2
1.1.4仪器2
1.2试验方法2
1.2.1采样和处理2
1.2.2噬菌体的分离和纯化2
1.2.3噬菌体的保存3
1.2.4点滴法测定宿主谱3
1.2.5酶切3
1.2.6提噬菌体基因组3
1.2.7噬菌体电镜观察4
2 结果与分析4
2.1噬菌体的初步分离 4
2.2噬菌体的宿主谱测定 5
2.3噬菌体的酶切图谱分析 6
2.4电镜观察噬菌体形态 7
3 讨论8
3.1仔猪肠道噬菌体的分布 8
3.2噬菌体宿主谱的鉴定 8
3.3噬菌体的分离和保存 8
致谢9
参考文献 9
安徽一猪场仔猪肠道大肠杆菌噬菌体的分离鉴定
引言
人和动物肠道内的微生物区系是地球上最高密度、最复杂的生态系统之一，每克粪便中细菌的数量可高达1013。噬菌体（bacteriophage, phage）是寄生于细菌、霉形体、螺旋体、放线菌以及蓝细菌等的一类病毒，亦称细菌病毒。在自然界分布极广，凡是有上述各类微生物的地方，都有相应种类噬菌体的 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
存在，其数目与寄主的数量成正比[1]。噬菌体是地球上增殖能力最强，数量最多的物种之一，它存在于任何有细菌的地方，影响着各种生态系统中细菌的数量。近几年，肠道内噬菌体和微生物菌群之间的关系受到越来越多的关注。噬菌体与细菌间的“捕食效应”使它们之间存在着动态变化关系，噬菌体的种类和数量直接影响着肠道内的生理状态或微生物区系[2] 。大肠杆菌在仔猪阶段对仔猪的影响十分巨大，因为大部分仔猪腹泻都是由大肠杆菌引起的。那仔猪肠道的大肠杆菌噬菌体对大肠杆菌有影响吗？Golomidova 等 (2007)研究发现，马的粪便中大肠杆菌的多样性与大肠杆菌噬菌体感染的选择压力有关[3]。所以本试验将首次以仔猪肠道大肠杆菌噬菌体为研究对象，研究大肠杆菌噬菌体在仔猪肠道的分布规律，为将来研究肠道大肠杆菌噬菌体对大肠杆菌的影响奠定基础。
1 材料与方法
1.1 试剂和仪器
1.1.1 试剂：
胰蛋白胨 Tryptone 购于 OXOID 公司
酵母提取物 Yeast Extract 购于 OXOID 公司
琼脂粉 Agar 购于 DSBIO 公司
1.1.2 试剂的配置：
（1）PBS 缓冲液：NaCl 8g，KCl 0.2g，NaHPO412H2O 3.63g，KH2PO4 0.24g，加 H2O 至 1000ml，pH7.4 ，121℃ 20min 高压灭菌
（2）液体 LB 培养基:胰蛋白胨 10g，酵母提取物 5g，氯化钠 10g，加 H2O 至 1000ml，pH7.4 ，121℃ 20min 高压灭菌
（3）固体 LB 培养基：每 1000ml 液体 LB 培养基加入 15g 琼脂粉，121℃ 20min 高压灭菌
（4）半固体 LB 培养基：每 1000ml 液体 LB 培养基加入 7.5g 琼脂粉，121℃ 20min 高压灭菌
（5）SM 液：NaCl 5.8g，MgSO47H2O 2g，1M Tris.Cl（pH7.5）50ml，2%明胶溶液（m/V）5ml，加 H2O 至 1000ml，121℃ 20min 高压灭菌
1.1.3 耗材：
0.22μm针头式过滤器 Millipore公司
20ml一次性使用配药用注射器 常州金龙医用塑料器械有限公司
1.1.4 仪器：
台式高速冷冻离心机 Kendro公司
涡旋振荡器 Scientific Industries
台式恒温振荡器 Crystal 公司
生物洁净工作台 苏州安泰空气技术有限公司
高温灭菌器 KAGOSHIMA SEISAKUSYO LSC
隔水式电热恒温培养箱 上海市跃进医疗器械一厂
微量紫外分光光度 Thermo
电子天平 赛多利斯科学仪器（北京）有限公司
1.2 试验方法
1.2.1 采样和处理
猪场情况:安徽宝迪种猪场:规模约5000头基础母猪;品系为美系杜长二元猪;厂区虽然设备较旧,但卫生条件及生产管理较好。
采样：本试验选取断奶前和断奶后的仔猪为研究对象，选择安徽一猪场共10窝健康仔猪，每窝选取3只健康仔猪，采集5窝仔猪断奶前2天的粪样及5窝仔猪断奶后每天粪样（持续一周），混合其粪便，共10份样品，记录粪样的状态。
处理：取1g粪样与20ml PBS缓冲液混匀并握旋，5000 r/min离心10min，去掉固体，取上清液，再12000 r/min离心20min，取上清液。最后用0.22μm微孔滤膜过滤后待用。
版权保护: 本文由 hbsrm.com编辑，转载请保留链接: www.hbsrm.com/yxlw/dwyx/340.html
