金黄色葡萄球菌急性感染对大鼠子宫损伤及功能的影响
本研究旨在通过大鼠模型探究金黄色葡萄球菌急性感染对子宫的影响，包括子宫的炎症反应和子宫内膜的损伤情况。手术感染24h后，子宫剖检结果显示感染组大鼠双侧子宫轻度红肿，血管充血；荧光定量PCR结果揭示感染组子宫组织中TLR2，Myd88，NF-kB的基因表达量显著上调，同时炎症因子IL-1β，IL-6，IL-8，TNF-α的mRNA表达量显著升高；ELISA结果显示感染组的外周血中炎症因子的浓度显著高于生理盐水对照组，表明金黄色葡萄球菌感染后子宫炎症发生。紧密连接相关蛋白occludin和claudin4 mRNA表达量升高，而ZO-1与MUC1 mRNA表达量下降，表明子宫内膜受损，屏障功能下降。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言3
1材料与方法4
1.1实验材料与试剂4
1.1.1实验动物4
1.1.2菌株4
1.1.3药品及试剂4
1.2实验仪器4
1.3实验方法4
1.3.1实验动物分组4
1.3.2菌株复壮与菌液稀释4
1.3. 3手术法感染菌液4
1.3. 4子宫剖检与样本采集5
2结果与分析 5
2.1子宫剖检结果5
2.2组织病理学检查结果6
2. 3 TLR2/Myd88/NFKB信号通路上的基因表达6
2.4子宫组织中各细胞因子的mRNA表达量7
2. 5 外周血中炎症因子检测结果7
2.6紧密连接相关蛋白mRNA表达量7
3讨论 8
3.1大鼠子宫内膜炎模型的构建8
3.2急性感染造成大鼠子宫内膜损伤继而影响其生理功能8
致谢9
参考文献9
金黄色葡萄球菌急性感染对大鼠子宫损伤及功能的影响
引言
子宫微生物感染影响着半数的产后奶牛，15%~20%的奶牛在产后持续三周以上表现明显的临床症状（临床型子宫内膜炎），而30%的奶牛则患有无临床症状的子宫慢性炎症（亚临床型子宫内膜炎）[ *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072#
1]。因为奶牛产后几天内产道保持开放，外界细菌很容易进入宫腔，虽然很多牛在产后前5周内会自主清除细菌，仍然有10%~17%的奶牛子宫腔被持续感染[2]。当子宫局部或全身免疫力下降时，病原菌就会在子宫内大量繁殖，造成感染发病，致使奶牛发情、排卵异常，并且扰乱产后卵巢优势卵泡的生长和发育，阻碍胚胎着床，导致母牛繁殖性能与产奶性能一齐下降，甚至青年母牛不孕[3]，此外，增加的人力、饲料、用药成本及治疗期间奶源的废弃都造成了极大的经济损失，早在1986年，就有学者估算，每个患病牛在泌乳期的总损失约为106美元[4]，因此，生殖道微生物疾病是奶牛上最为普遍也最具经济重要性的疾病[1]。
奶牛产后子宫内膜炎的致病微生物十分广泛，国内外已有诸多实验对产后子宫内膜炎患牛子宫内的菌群进行了分离鉴定，能检出的菌种主要包括高致病菌大肠杆菌、隐秘脓杆菌、坏死梭杆菌等；机会病原菌产气荚膜梭菌、肺炎克雷伯菌、念珠菌等和潜在致病菌链球菌、葡萄球菌等，这些菌种可单一感染，也可混合感染。其中，葡萄球菌是奶牛产后子宫内常可分离到的的革兰氏阳性菌，其可沿阴道、子宫黏膜上行感染，以金黄色葡萄球菌的致病力最强[59]。与此同时，对该病的病原研究大多以由子宫内膜炎患牛分离得到的病原微生物为主要研究对象，而对仅由金黄色葡萄球菌急性感染引起的子宫炎症研究较少。也有一些研究通过子宫角插管灌注的方法复制奶牛子宫急性感染模型，考虑到这样做花费较大，而大鼠是一种较为理想的模式动物，可在一定程度上模拟奶牛的子宫急性感染，因此本课题利用大鼠造模探究仅由金黄色葡萄球菌急性感染对子宫机能的影响，包括子宫的炎症反应和子宫内膜的受损情况及对其功能的影响，以期为奶牛子宫内膜炎病原学或治疗方法的研究提供理论参考。
1 材料与方法
1．1 实验材料与试剂
1．1．1 实验动物
本实验所用的SD大鼠均为购自南京市青龙山动物繁殖场的SPF级雌性大鼠，8周龄，体重180220克，采用全价鼠料和清洁饮水饲喂一周左右进行实验。
1．1．2 菌株
本实验所采用的金黄色葡萄菌系动物消化道微生物研究室自行分离、筛选、保存的菌株，进行复壮培养后用于本实验。
1．1．2 药品及试剂
戊巴比妥钠，TRIzol?(Invitrogen,?China)，脑心浸出液（BHI）培养基（北京奥博星生物技术有限责任公司）、无水乙醇、乙醚、10%中性福尔马林、医用碘酊等。
1．2 实验仪器
载玻片，EP管、100μL移液枪，压力蒸汽灭菌锅，超净工作台（苏净集团安泰公司），隔水恒温培养箱（上海跃进），显微镜（日本，Nikon），NanoDrop?1000（Thermo?Scientific?Inc.?美国），PCR仪（Biometra,?德国），ABI?Quant?Studio?5?定量PCR仪?(Applied?Biosystems,?Foster,City,?CA)等。
1．3 实验方法
1．3．1 实验动物分组
将16只SPF级雌性大鼠随机分为人工感染组（8只）和对照组（8只）；术前禁食一晚，只给予清洁饮水。
1．3．2 菌株复壮与菌液稀释
将脑心浸出液（BHI）培养基（北京奥博星生物技术有限责任公司）高压灭菌后进行金黄色葡萄球菌菌株的复壮培养，37℃摇床培养12h即可，随后用无菌生理盐水倍比稀释至1×109CFU/mL分装备用。
1．3．3 手术法感染菌液
（1）称重与编号
将少量乙醚倒在干棉球上，置于大广口瓶内，再将大鼠置于其中轻度麻醉后天平称重，在相应鼠笼上编号，记录。
麻醉与保定
用1%的戊巴比妥钠按30mg/kg体重腹腔注射，以达到全身麻醉，仰卧保定于鼠解剖手术台上，手术中如有苏醒立即用乙醚吸入麻醉。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言3
1材料与方法4
1.1实验材料与试剂4
1.1.1实验动物4
1.1.2菌株4
1.1.3药品及试剂4
1.2实验仪器4
1.3实验方法4
1.3.1实验动物分组4
1.3.2菌株复壮与菌液稀释4
1.3. 3手术法感染菌液4
1.3. 4子宫剖检与样本采集5
2结果与分析 5
2.1子宫剖检结果5
2.2组织病理学检查结果6
2. 3 TLR2/Myd88/NFKB信号通路上的基因表达6
2.4子宫组织中各细胞因子的mRNA表达量7
2. 5 外周血中炎症因子检测结果7
2.6紧密连接相关蛋白mRNA表达量7
3讨论 8
3.1大鼠子宫内膜炎模型的构建8
3.2急性感染造成大鼠子宫内膜损伤继而影响其生理功能8
致谢9
参考文献9
金黄色葡萄球菌急性感染对大鼠子宫损伤及功能的影响
引言
子宫微生物感染影响着半数的产后奶牛，15%~20%的奶牛在产后持续三周以上表现明显的临床症状（临床型子宫内膜炎），而30%的奶牛则患有无临床症状的子宫慢性炎症（亚临床型子宫内膜炎）[ *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072#
1]。因为奶牛产后几天内产道保持开放，外界细菌很容易进入宫腔，虽然很多牛在产后前5周内会自主清除细菌，仍然有10%~17%的奶牛子宫腔被持续感染[2]。当子宫局部或全身免疫力下降时，病原菌就会在子宫内大量繁殖，造成感染发病，致使奶牛发情、排卵异常，并且扰乱产后卵巢优势卵泡的生长和发育，阻碍胚胎着床，导致母牛繁殖性能与产奶性能一齐下降，甚至青年母牛不孕[3]，此外，增加的人力、饲料、用药成本及治疗期间奶源的废弃都造成了极大的经济损失，早在1986年，就有学者估算，每个患病牛在泌乳期的总损失约为106美元[4]，因此，生殖道微生物疾病是奶牛上最为普遍也最具经济重要性的疾病[1]。
奶牛产后子宫内膜炎的致病微生物十分广泛，国内外已有诸多实验对产后子宫内膜炎患牛子宫内的菌群进行了分离鉴定，能检出的菌种主要包括高致病菌大肠杆菌、隐秘脓杆菌、坏死梭杆菌等；机会病原菌产气荚膜梭菌、肺炎克雷伯菌、念珠菌等和潜在致病菌链球菌、葡萄球菌等，这些菌种可单一感染，也可混合感染。其中，葡萄球菌是奶牛产后子宫内常可分离到的的革兰氏阳性菌，其可沿阴道、子宫黏膜上行感染，以金黄色葡萄球菌的致病力最强[59]。与此同时，对该病的病原研究大多以由子宫内膜炎患牛分离得到的病原微生物为主要研究对象，而对仅由金黄色葡萄球菌急性感染引起的子宫炎症研究较少。也有一些研究通过子宫角插管灌注的方法复制奶牛子宫急性感染模型，考虑到这样做花费较大，而大鼠是一种较为理想的模式动物，可在一定程度上模拟奶牛的子宫急性感染，因此本课题利用大鼠造模探究仅由金黄色葡萄球菌急性感染对子宫机能的影响，包括子宫的炎症反应和子宫内膜的受损情况及对其功能的影响，以期为奶牛子宫内膜炎病原学或治疗方法的研究提供理论参考。
1 材料与方法
1．1 实验材料与试剂
1．1．1 实验动物
本实验所用的SD大鼠均为购自南京市青龙山动物繁殖场的SPF级雌性大鼠，8周龄，体重180220克，采用全价鼠料和清洁饮水饲喂一周左右进行实验。
1．1．2 菌株
本实验所采用的金黄色葡萄菌系动物消化道微生物研究室自行分离、筛选、保存的菌株，进行复壮培养后用于本实验。
1．1．2 药品及试剂
戊巴比妥钠，TRIzol?(Invitrogen,?China)，脑心浸出液（BHI）培养基（北京奥博星生物技术有限责任公司）、无水乙醇、乙醚、10%中性福尔马林、医用碘酊等。
1．2 实验仪器
载玻片，EP管、100μL移液枪，压力蒸汽灭菌锅，超净工作台（苏净集团安泰公司），隔水恒温培养箱（上海跃进），显微镜（日本，Nikon），NanoDrop?1000（Thermo?Scientific?Inc.?美国），PCR仪（Biometra,?德国），ABI?Quant?Studio?5?定量PCR仪?(Applied?Biosystems,?Foster,City,?CA)等。
1．3 实验方法
1．3．1 实验动物分组
将16只SPF级雌性大鼠随机分为人工感染组（8只）和对照组（8只）；术前禁食一晚，只给予清洁饮水。
1．3．2 菌株复壮与菌液稀释
将脑心浸出液（BHI）培养基（北京奥博星生物技术有限责任公司）高压灭菌后进行金黄色葡萄球菌菌株的复壮培养，37℃摇床培养12h即可，随后用无菌生理盐水倍比稀释至1×109CFU/mL分装备用。
1．3．3 手术法感染菌液
（1）称重与编号
将少量乙醚倒在干棉球上，置于大广口瓶内，再将大鼠置于其中轻度麻醉后天平称重，在相应鼠笼上编号，记录。
麻醉与保定
用1%的戊巴比妥钠按30mg/kg体重腹腔注射，以达到全身麻醉，仰卧保定于鼠解剖手术台上，手术中如有苏醒立即用乙醚吸入麻醉。
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