狂犬病病毒胶体金检测试纸的研制
摘要:[目的] 应用双单抗夹心法,建立狂犬病病毒快速检测技术,制备快速检测试纸并初步应用。[方法] 以20nm胶体金标记抗狂犬病病毒核蛋白单抗制备金标抗体,以Millipore-135硝酸纤维素膜为层析介质,分别以抗狂犬病病毒磷蛋白单抗和羊抗鼠IgG包被检测线(T线)和对照线(C线)制备狂犬病病毒双抗体夹心法免疫胶体金检测试纸。以试纸对狂犬病感染阳性、阴性脑组织进行检测,评价该试纸的检测敏感度和特异性。[结果] 狂犬病病毒核蛋白与胶体金标记的最佳浓度为12μg/mL,此时获得的胶体金在Millipore-
狂犬病病毒胶体金检测试纸的研制
摘要:将猪细小病毒接种于ST细胞,于不同时间点收获病毒并测其毒价与病毒拷贝数,以此分析该病毒的增殖规律。毒价测定结果显示,病毒感染后18 h 即能检出病毒滴度,TCID50达103.8/mL,随后逐渐升高于72 h 达到峰值(107.2/mL),其后TCID50逐渐下降。通过病毒拷贝数测定可知,病毒含量的增长率于72 h 达到峰值,之后病毒DNA含量增长变缓,接毒100 h 后病毒DNA含量下降。
猪SIgA分泌片的原核表达与分离纯化
摘要:分泌片(secretory component,SC)是粘膜型IgA(sIgA)的组成部分,对于粘膜免疫具有重要作用。本实验应用已构建好的含有目的基因的工程菌(BL21),在诱导剂(IPTG)作用下,诱到目的蛋白表达,分泌目的蛋白即分泌片。然后使用镍柱亲和层析纯化,对SC进行初步纯化,获得粗提物。粗提物经透析、浓缩处理后,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。根据目的蛋白分子量大小,切割含有SC的凝胶,进行胶回收,获得纯净的蛋白提取物。最后,对获得的蛋白进行Western blot检测。结果表
猪丹毒不同形式菌苗的免疫特性研究
摘要:猪丹毒(swine erysipelas),是由猪丹毒杆菌引起的一种急性、热性传染病,给畜牧业带来了巨大的危害,疫苗免疫是当前防控该病最有效的手段。本研究通过比较1%甲醛灭活苗、0.4%吖啶橙灭活苗、高压菌体浸出物、沉淀细菌后上清、弱毒苗5种方法免疫效果,以期寻找一种最高效、安全的疫苗。小鼠皮下注射灭活苗菌数1.5×109CFU/只,弱毒苗菌数1×107CFU/只,每只注射0.1mL。一免后14天进行二次免疫,第28天强毒株按菌数1×104CFU/只进行攻毒,每只注射0.1mL,对照小鼠皮下都相应注
Polo样蛋白激酶1(Plk1)在动粒上的定位与功能调控研究
摘要:有丝分裂调节的失控很可能导致多倍体甚至细胞癌变的发生。Plk1是有丝分裂中非常重要的一个参与多种细胞周期过程调节的调控因子。我们用转染与细胞同步化方法进行处理;免疫荧光观察Plk1在动粒上的定位;免疫沉淀方法检测Plk1与Bixy2蛋白的结合情况。结果表明,内源与外源Plk1在有丝分裂额间期及前期定位于细胞质和中心体,在前中期定位于中心体和动粒,在中期定位于中心体,后期定位于收缩环,末期定位于中间体。而K492R突变体中期仍定位于中心体与动粒,2A突变体(R538A; K540A)前中期与中期仅定位
TLR4在LFP20调节猪巨噬细胞功能中的作用及初步机制研究
摘要:猪乳铁蛋白经胃蛋白酶水解形成猪乳铁蛋白肽(lactoferricin - 20,LFP-20),LFP-20由20个氨基酸残基组成,其安全性好,抗菌谱广,且在体内具有免疫调控功能,但LFP-20发挥免疫调控作用的机制尚不清楚,有研究表明,抗菌肽与TLRs的激活及其介导的信号转导机制有关。有些抗菌肽选择性调控先天免疫反应能够控制炎症反应的程度,并且可以通过激活或抑制TLRs信号转导通路引发机体的特异性免疫反应。因此本研究以猪为研究对象,以在宿主抵御微生物感染机制中起着重要作用的病原体识别受体之一——T
VHL22、APP、CamkIIα-Cre转基因小鼠模型的建立
摘要:阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种由神经系统变性引发的退行性疾病,其病理学特征主要包括β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)的沉积、神经元纤维缠结(neurofibrillary tangles, NFT)和神经元的广泛丢失。Aβ前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)是与AD的发生密切相关的一型跨膜蛋白,通过β分泌酶途径切割可产生Aβ。VHL蛋白是一种肿瘤抑制因子,本实验室已有的研究结果表明VHL能在细胞水平抑制Aβ的产生,是APP
Ⅰ型鸭肝炎病毒A66活疫苗耐热冻干保护剂配配方初步筛选
摘要:选取我国水禽养殖业中较为常见的鸭病毒性肝炎病毒(Duck viral hepatitis, DVH)为研究对象,以S3-T1为耐热保护剂基础方,通过EDTA﹑L-谷氨酸钠﹑BSA和NZA等单因素成分筛选,将鸭肝炎病毒进行冻干。通过样品形态观察、剩余水分、病毒含量测定等指标,筛选出配方S3-E2对鸭肝炎耐热保护效果较好,冻干过程病毒基本无损失,37℃ 10d加速耐老化试验中病毒含量下降0.5个滴度,稳定性好。研究结果为鸭肝炎耐热冻干保护剂的研制提供了科学依据,为疫苗的运输和保存提供了技术支撑。 摘要:猫尿闭是兽医临床常见的猫泌尿系统疾病,发病率占猫病例的10%左右,而且还有上升趋势,猫下泌尿道异常是导致尿闭的直接原因。长期尿闭易出现氮血症,可导致肾衰。绝大多数猫下泌尿道异常发生在2~6 岁之间,在冬春两季发病比较多,大约30%~70%患下泌尿道炎症的猫会继发该病。本论文就大学动物医院一典型公猫的尿闭导致肾衰的病例进行了病史调查,临床病理检查,X射线、超声波检查,以及整个疾病的治疗过程进行了记录和分析,探讨了猫尿闭的病因及治疗方案。 摘要:根据GenBank 公布的PCV- 2 ORF2 基因的核苷酸序列, 设计并合成1 对特异性引物, 应用PCR 方法扩增PCV- 2 NJ株ORF2 全长基因, 将其克隆入pMD19-T载体中, 进行测序及序列分析。将ORF2基因克隆到原核表达载体pQZ中,经ITPG诱导,成功表达ORF2 基因编码的结构蛋白。SDS-PAGE分析显示,表达的重组蛋白分子量为28KDa,与设计相符。western-blotting分析表明,重组蛋白能可以被PCV2阳性血清识别。 摘 要:为了降低生产成本,简化猪圆环病毒2型(ZJ/C)株疫苗的生产工艺,在不影响猪圆环病毒2型疫苗效价的前提下,本试验从猪圆环病毒2型(ZJ/C)株细胞苗生产的半成品入手,分别从来自不同厂家的犊牛血清、消化细胞的浓度以及灭活细胞灭活剂的不同等方面研究,通过测定最终效价,结合考虑规模化生产的生产成本,发现PK-15用9%血清和1%双抗MEM生长液接毒,用0.05%胰蛋白酶-0.53mmol/L EDTA·4Na消化细胞,且在瓶壁出现划痕时,需放置于温室中进行进一步消化,48h后换成3%血清+ 0.5%双抗
一例公猫尿闭的诊断与治疗
猪圆环病毒2型NJ株Cap蛋白的原核表达与鉴定
猪圆环病毒2型疫苗(ZJC)株生产艺的优化