Polo样蛋白激酶1（Plk1）在动粒上的定位与功能调控研究
Polo样蛋白激酶1（Plk1）在动粒上的定位与功能调控研究[20200507190036]
摘要：有丝分裂调节的失控很可能导致多倍体甚至细胞癌变的发生。Plk1是有丝分裂中非常重要的一个参与多种细胞周期过程调节的调控因子。我们用转染与细胞同步化方法进行处理；免疫荧光观察Plk1在动粒上的定位；免疫沉淀方法检测Plk1与Bixy2蛋白的结合情况。结果表明，内源与外源Plk1在有丝分裂额间期及前期定位于细胞质和中心体，在前中期定位于中心体和动粒，在中期定位于中心体，后期定位于收缩环，末期定位于中间体。而K492R突变体中期仍定位于中心体与动粒，2A突变体（R538A; K540A）前中期与中期仅定位于中心体；K492R与外源Plk1与Bixy2蛋白结合能力相近，2A不能与Bixy2蛋白结合。492泛素化修饰位点的突变导致中期不能脱离动粒；538，540磷酸化位点的突变导致不能与带有磷酸基团的底物结合，可能作为潜在的抗肿瘤药物靶点。
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关键字:Plk1；动粒；定位；功能；调控
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言4
1材料与方法5
1.1实验材料 5
1.2实验方法 6
1.2.1 细胞实验6
1.2.2 生化实验6
2 结果与分析7
2.1 免疫荧光8
2.1.1 Plk1在细胞中的定位8
2.1.2 突变体Plk1在细胞中的定位8
2.1.3 外源及突变体Plk1在细胞周期中定位9
2.2 蛋白质免疫印迹10
2.2.1 外源及突变体Plk1与Bixy2蛋白结合10
2.2.2 anti-GFP检测样品中蛋白含量情况10
3讨论 11
3.1 突变体的影响11
3.1.1 K492R突变体的影响11
3.1.2 2A突变体的影响11
3.2 Plk1与肿瘤发生11
3.2.1 Plk1的表达量与肿瘤发生11
3.2.2 2A突变体与肿瘤治疗11
致谢13
参考文献14
Polo样蛋白激酶1（Plk1）在动粒上的定位与功能调控研究
摘要：有丝分裂调节的失控很可能导致多倍体甚至细胞癌变的发生。Plk1是有丝分裂中非常重要的一个参与多种细胞周期过程调节的调控因子。我们用转染与细胞同步化方法进行处理；免疫荧光观察Plk1在动粒上的定位；免疫沉淀方法检测Plk1与Bixy2蛋白的结合情况。结果表明，内源与外源Plk1在有丝分裂额间期及前期定位于细胞质和中心体，在前中期定位于中心体和动粒，在中期定位于中心体，后期定位于收缩环，末期定位于中间体。而K492R突变体中期仍定位于中心体与动粒，2A突变体（R538A; K540A）前中期与中期仅定位于中心体；K492R与外源Plk1与Bixy2蛋白结合能力相近，2A不能与Bixy2蛋白结合。492泛素化修饰位点的突变导致中期不能脱离动粒；538，540磷酸化位点的突变导致不能与带有磷酸基团的底物结合，可能作为潜在的抗肿瘤药物靶点。
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摘要3
关键词3
Abstract3
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引言4
1材料与方法5
1.1实验材料 5
1.2实验方法 6
1.2.1 细胞实验6
1.2.2 生化实验6
2 结果与分析7
2.1 免疫荧光8
2.1.1 Plk1在细胞中的定位8
2.1.2 突变体Plk1在细胞中的定位8
2.1.3 外源及突变体Plk1在细胞周期中定位9
2.2 蛋白质免疫印迹10
2.2.1 外源及突变体Plk1与Bixy2蛋白结合10
2.2.2 anti-GFP检测样品中蛋白含量情况10
3讨论 11
3.1 突变体的影响11
3.1.1 K492R突变体的影响11
3.1.2 2A突变体的影响11
3.2 Plk1与肿瘤发生11
3.2.1 Plk1的表达量与肿瘤发生11
3.2.2 2A突变体与肿瘤治疗11
致谢13
参考文献14
Polo样蛋白激酶1（Plk1）在动粒上的定位与功能调控研究
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