丹红注射液对继发性红细胞增多症大鼠血浆hif1α水平的影响(附件)
摘 要 继发性红细胞增多症，是由于缺血缺氧或高原反应等引起的血红细胞生成素（简称促红素）分泌过多而导致的红细胞增多，血液变得黏稠的疾病。继发性红细胞增多症在中医上属于“血瘀”病范畴，丹红注射液为中药复方制剂，具有活血化瘀之效，而目前用于治疗本病的西药副作用明显，故本课题欲通过探索丹红注射液对继发性红细胞增多症的治疗作用，阐明丹红注射液对继发性红细胞增多症大鼠血浆缺氧诱导因子（Hypoxia Inducible Factor-lα）水平的关系，为继发性红细胞增多症的治疗提供理论基础。本实验分成6个组，分别为丹红注射液高剂量组、丹红注射液中剂量组、丹红注射液低剂量组、药物对照组、模型组和空白组。采用注射促红素(EPO)制备继发性红细胞增多症（Secondary polycythemia）的动物模型，检测大鼠血浆中血红蛋白（Hb）、血细胞比容(HCT)、红细胞计数值(RBC)指标的变化，确定模型制备成功，并检测大鼠血浆HIF-lα水平的变化。对丹红注射液高、中、低组、药物对照组及模型组注射丹红注射液，药物对照组注射乙酰唑胺注射液。采取尾静脉取血，对各组动物进行血液指标检测，对数据进行统计分析，得出结果。通过本次实验分析各组HIF-lα、Hb、HCT、RBC指标的变化，得出丹红注射液对HIF-lα有抑制作用，可以将HIF-lα的水平控制在正常范围内，减少HIF-lα对机体的病理损伤，能有效改善继发性红细胞增多症的缺氧缺血症状。目 录
1 引言
1.1 丹红注射液 1
1.2 继发性红细胞增多症 1
1.3 缺氧诱导因子lα 1
2 实验材料与方法
2.1 实验试剂与材料 3
2.2 实验仪器 3
2.3 检测指标及方法 3
2.4 实验过程与方法 4
2.4.1 实验对象 4
2.4.2 实验动物的分组 4
2.4.3 注射剂量 4
2.4.4 动物模型的复制 4
2.4.5 造模过程各组指标的检测 5
2.4.6 实验过程 5
2.4.7 药物干预后相关指标的检测 6
2.4.8 实验数据小结
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5`1^9`1^6^0`7^2#
实验过程与方法 4
2.4.1 实验对象 4
2.4.2 实验动物的分组 4
2.4.3 注射剂量 4
2.4.4 动物模型的复制 4
2.4.5 造模过程各组指标的检测 5
2.4.6 实验过程 5
2.4.7 药物干预后相关指标的检测 6
2.4.8 实验数据小结 6
2.4.9 各组HIFlα的水平含量之间的比较 7
3 讨论
3.1 实验总结 8
3.2 动物模型复制方法的选择 8
3.3 检测指标选择 9
3.4 对照药物的选择 9
结论 10
展望 11
参考文献 12
致谢 14
1 引言
1.1 丹红注射液
丹红注射液是由丹参和红花，经过工艺提取、精制后制成的中药复方注射剂。丹参的主要成分为丹酚酸类，具有活络通脉、化瘀祛阻的功效；红花的主要成分为红花黄素类，具有扩张冠状动脉，增加血流量，抑制血小板聚集，降低血液黏稠度，加速血液的循环，并能清除氧自由基，还有平衡失调，祛除血管斑块，保护血管内皮，改善组织缺氧的作用[1]。
临床上广泛用于冠心病、心绞痛、心肌梗塞，缺血性脑病、脑血栓及肺心病等症的治疗。
1.2 继发性红细胞增多症
继发性红细胞增多症(Secondary polycythemias)是由于机体组织细胞的缺氧而导致机体内幼稚血红细胞的增生，或是由于促红细胞生成素(erythropoitin,EPO)分泌过多引起的，其发病机理复杂，至今尚未阐明。促红细胞生成素是一种由细胞糖蛋白激素调控生成的，它主要由肾脏组织近曲小管附近的细胞合成和分泌，刺激骨髓红细胞的生成和释放[2]。因促红素过量产生的疾病或服用促使红细胞生成素产生增多的激素制剂，使血红蛋白和红细胞数量增多，导致红细胞比容增大血流变缓，从而引发红细胞增多症[3]。成熟的红细胞具有运输氧气的作用，使机体的生理代谢处于正常状态，但红细胞数量的大幅度上升，会导致红细胞大量的聚集，血液变得黏稠，引起红细胞流变性的改变[4]。当血红蛋白浓度有明显的升高，红细胞流变性异常，这是导致心血管方面疾病病发的重要因素[5]，从而引起一系列临床综合病症，这些综合病症有：新生儿红细胞增多症、高原性红细胞增多症、慢性肺脏疾病、心血管疾病等。
1.3 缺氧诱导因子lα
缺氧诱导因子1是缺氧条件下广泛存在于人体内的一种调节氧稳态平衡的转录因子，HIF1α 是HIF1 特有的活性亚基。HIF1是1992年Semenza[6]和Wang首先发现的，随后经过研究确立了HIFlα的结构和类型，并证明了其cDNA编码的顺序[7]。HIF1普遍存在于哺乳动物和人的细胞内，常氧下(21% O2)也有表达属于正常的表达，但合成的HIF1蛋白很快会被细胞内具有氧依赖性的泛素蛋白酶经过降解途径所降解，HIF1是一种核蛋白，它具有转录的活性，具研究了解它有相当广泛的靶基因谱，其中包括与缺氧适应性、炎症发展及肿瘤生长等相关的靶基因，只有在缺氧条件下HIF1才可稳定表达 [8]。活化的HIF1与其结合位点结合后，在靶基因的转录起始部位形成一个转录起始复合物，从而启动靶基因的转录。HIF1 是细胞缺氧状态下稳定表达的中心调节因子，引起一系列如红细胞生成增多、糖酵解酶活性增强、组织新生的毛细血管增多、血管扩张、细胞增殖等细胞对缺氧的反应，降低缺氧对机体的损伤，以保持机体的氧稳态，这些变化对继发性红细胞增多症具有重要的病理生理学意义。李晓娜[9]等在对53例高原红细胞增多症患者血清低氧诱导因子（HIFlα）的检测研究中，表明高原红细胞增多症患者血清HIFlα的含量显著升高，与健康组比较差异有统计学意义，说明HIFlα在高原红细胞增多症发生发展中起着重要的作用。
目前，对继发性红细胞增多症的治疗所用的西药主要有：血管紧张素酶抑制剂、碳酸酐酶抑制剂、防治凝血或血栓形成药等，这些药物副作用明显，例如：消化不良、心动过速、过敏反应、低血钾、造血障碍、精神抑郁等。而中药复方制剂丹红注射液为丹参、红花的提取制剂物，具有改善微循环、通脉舒络、活血化瘀之效。中药丹参具有降低血液黏稠度，可以有效扩张冠状动脉血流量，且防止血小板聚集，使血流加速的作用，在改善组织缺氧方面有较好的治疗效果。目前医学上用丹红注射液治疗心脑血管疾病的研究很多[1012]，但在医药研究发展领域还没有关于丹红注射液对HIFlα影响的直接研究，而对于HIFlα的研究现状目前在医学领域多是HIFlα与癌症的关系或者是HIFlα可以使机体对缺血缺氧的适应性加大等相关研究[13]。故本实验通过制备继发性红细胞增多症大鼠模型，实验检测收集得出丹红注射液对HIFlα影响的水平数据，再分析得出相关结论。从而推断丹红注射液与HIFlα之间的关系，为丹红注射液增加临床适应症提供理论依据。
2 实验材料与方法
2.1 实验试剂与材料
促红素 生产厂家（沈阳三生制药有限公司），产品批号：20150001，
规格3000U/支
1 引言
1.1 丹红注射液 1
1.2 继发性红细胞增多症 1
1.3 缺氧诱导因子lα 1
2 实验材料与方法
2.1 实验试剂与材料 3
2.2 实验仪器 3
2.3 检测指标及方法 3
2.4 实验过程与方法 4
2.4.1 实验对象 4
2.4.2 实验动物的分组 4
2.4.3 注射剂量 4
2.4.4 动物模型的复制 4
2.4.5 造模过程各组指标的检测 5
2.4.6 实验过程 5
2.4.7 药物干预后相关指标的检测 6
2.4.8 实验数据小结
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^3^5`1^9`1^6^0`7^2#
实验过程与方法 4
2.4.1 实验对象 4
2.4.2 实验动物的分组 4
2.4.3 注射剂量 4
2.4.4 动物模型的复制 4
2.4.5 造模过程各组指标的检测 5
2.4.6 实验过程 5
2.4.7 药物干预后相关指标的检测 6
2.4.8 实验数据小结 6
2.4.9 各组HIFlα的水平含量之间的比较 7
3 讨论
3.1 实验总结 8
3.2 动物模型复制方法的选择 8
3.3 检测指标选择 9
3.4 对照药物的选择 9
结论 10
展望 11
参考文献 12
致谢 14
1 引言
1.1 丹红注射液
丹红注射液是由丹参和红花，经过工艺提取、精制后制成的中药复方注射剂。丹参的主要成分为丹酚酸类，具有活络通脉、化瘀祛阻的功效；红花的主要成分为红花黄素类，具有扩张冠状动脉，增加血流量，抑制血小板聚集，降低血液黏稠度，加速血液的循环，并能清除氧自由基，还有平衡失调，祛除血管斑块，保护血管内皮，改善组织缺氧的作用[1]。
临床上广泛用于冠心病、心绞痛、心肌梗塞，缺血性脑病、脑血栓及肺心病等症的治疗。
1.2 继发性红细胞增多症
继发性红细胞增多症(Secondary polycythemias)是由于机体组织细胞的缺氧而导致机体内幼稚血红细胞的增生，或是由于促红细胞生成素(erythropoitin,EPO)分泌过多引起的，其发病机理复杂，至今尚未阐明。促红细胞生成素是一种由细胞糖蛋白激素调控生成的，它主要由肾脏组织近曲小管附近的细胞合成和分泌，刺激骨髓红细胞的生成和释放[2]。因促红素过量产生的疾病或服用促使红细胞生成素产生增多的激素制剂，使血红蛋白和红细胞数量增多，导致红细胞比容增大血流变缓，从而引发红细胞增多症[3]。成熟的红细胞具有运输氧气的作用，使机体的生理代谢处于正常状态，但红细胞数量的大幅度上升，会导致红细胞大量的聚集，血液变得黏稠，引起红细胞流变性的改变[4]。当血红蛋白浓度有明显的升高，红细胞流变性异常，这是导致心血管方面疾病病发的重要因素[5]，从而引起一系列临床综合病症，这些综合病症有：新生儿红细胞增多症、高原性红细胞增多症、慢性肺脏疾病、心血管疾病等。
1.3 缺氧诱导因子lα
缺氧诱导因子1是缺氧条件下广泛存在于人体内的一种调节氧稳态平衡的转录因子，HIF1α 是HIF1 特有的活性亚基。HIF1是1992年Semenza[6]和Wang首先发现的，随后经过研究确立了HIFlα的结构和类型，并证明了其cDNA编码的顺序[7]。HIF1普遍存在于哺乳动物和人的细胞内，常氧下(21% O2)也有表达属于正常的表达，但合成的HIF1蛋白很快会被细胞内具有氧依赖性的泛素蛋白酶经过降解途径所降解，HIF1是一种核蛋白，它具有转录的活性，具研究了解它有相当广泛的靶基因谱，其中包括与缺氧适应性、炎症发展及肿瘤生长等相关的靶基因，只有在缺氧条件下HIF1才可稳定表达 [8]。活化的HIF1与其结合位点结合后，在靶基因的转录起始部位形成一个转录起始复合物，从而启动靶基因的转录。HIF1 是细胞缺氧状态下稳定表达的中心调节因子，引起一系列如红细胞生成增多、糖酵解酶活性增强、组织新生的毛细血管增多、血管扩张、细胞增殖等细胞对缺氧的反应，降低缺氧对机体的损伤，以保持机体的氧稳态，这些变化对继发性红细胞增多症具有重要的病理生理学意义。李晓娜[9]等在对53例高原红细胞增多症患者血清低氧诱导因子（HIFlα）的检测研究中，表明高原红细胞增多症患者血清HIFlα的含量显著升高，与健康组比较差异有统计学意义，说明HIFlα在高原红细胞增多症发生发展中起着重要的作用。
目前，对继发性红细胞增多症的治疗所用的西药主要有：血管紧张素酶抑制剂、碳酸酐酶抑制剂、防治凝血或血栓形成药等，这些药物副作用明显，例如：消化不良、心动过速、过敏反应、低血钾、造血障碍、精神抑郁等。而中药复方制剂丹红注射液为丹参、红花的提取制剂物，具有改善微循环、通脉舒络、活血化瘀之效。中药丹参具有降低血液黏稠度，可以有效扩张冠状动脉血流量，且防止血小板聚集，使血流加速的作用，在改善组织缺氧方面有较好的治疗效果。目前医学上用丹红注射液治疗心脑血管疾病的研究很多[1012]，但在医药研究发展领域还没有关于丹红注射液对HIFlα影响的直接研究，而对于HIFlα的研究现状目前在医学领域多是HIFlα与癌症的关系或者是HIFlα可以使机体对缺血缺氧的适应性加大等相关研究[13]。故本实验通过制备继发性红细胞增多症大鼠模型，实验检测收集得出丹红注射液对HIFlα影响的水平数据，再分析得出相关结论。从而推断丹红注射液与HIFlα之间的关系，为丹红注射液增加临床适应症提供理论依据。
2 实验材料与方法
2.1 实验试剂与材料
促红素 生产厂家（沈阳三生制药有限公司），产品批号：20150001，
规格3000U/支
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