回流提取葛根与灯盏细辛中活性成分的工艺研究(附件)
摘 要本课题通过对灯盏细辛和葛根中活性成分的回流提取工艺研究，为灯盏黄芪胶囊产品开发提供工艺参数，为工业化大生产提供科学依据。以野黄芩苷含量及葛根素含量作综合评价指标，采用高效液相测定其含量，考察因素为乙醇浓度、料液比、提取时间，设计L9(34)正交试验表，研究不同因素对灯盏细辛和葛根回流提取工艺的影响。结果表明最优工艺为乙醇浓度为80%，料液比为12倍，提取时间为4小时。在最优工艺基础上进行提取次数考察其结果为提取三次最佳。本次课题优选的最优回流提取工艺提取率高、便于操作、成本低、重现性良好适用于灯盏黄芩胶囊产品工业化大生产。
目 录
1 绪论
1.1灯盏细辛的研究现状 1
1.1.1灯盏细辛的简介 1
1.1.2灯盏细辛的资源现状 1
1.1.3灯盏细辛的化学成分及药理活性 1
1.1.4野黄芩苷的药理作用 2
1.1.5有关灯盏细辛提取方法 2
1.1.6有关灯盏细辛工艺研究现状 2
1.2葛根的研究现状 3
1.2.1葛根的简介 3
1.2.2葛根的资源现状 3
1.2.3葛根的化学成分及药理活性 3
1.2.4葛根素的药理作用 3
1.2.5有关葛根提取方法 4
1.2.6有关葛根工艺研究现状 4
1.3选题的意义 4
2实验部分
2.1仪器与试药 5
2.1.1仪器 5
2.1.2试药 5
2.2方法及结果 5
2.2.1测定方法的建立 6
2.2.2提取工艺研究 9
2.2.3最优工艺验证 11
2.2.4最优工艺提取次数考察 12
2.3讨论 13
2.3.1提取工艺结果分析讨论 13
2.3.2最优工艺验证结果分析讨论 13
2.3.3最优工艺提取次数考察结果分析讨论 13
结 语 15
参考文献 16
致 谢 19
1 绪论
1.1灯盏细辛的研究现状 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
1.1.1灯盏细辛的简介
灯盏细辛（Erigeronbreviscapus(Vant.)HandMazz）来源于菊科植物短葶飞蓬的干燥全草，是云南著名中草药。灯盏细辛最早收载于《滇南本草》。进而灯盏细辛又被《云南中草药选》、《文山中草药》、《昆明民间常用中草药》及《云南中药志》等文献收载。灯盏细辛的药品质量标准首次收载于《云南省药品标准》（1974年版），也曾收载于《中华人民共和国药典》（1977版）一部[1]。灯盏细辛味辛、微苦，性温；归心、肝经。它的功效有散寒解表、祛风除湿、活血化淤、通经络、止痛等。灯盏花素在临床中主要应用于治疗中风、心绞痛及冠心病等[2]。灯盏花素的有效活性成分为野黄芩苷。近年来由于灯盏细辛在心脑血管疾病方面疗效确切，开发的中成药剂型众多，涉及注射剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂等。
1.1.2灯盏细辛的资源现状
灯盏细辛野生资源主要生长在海拔1200～3500米之间，年平均气温15℃左右，土壤微酸性和中性[3]。该属植物约200种以上，除南北极以外全球其他区域均有分布，北美尤盛，我国有30余种，药用9种。我国云南省是野生灯盏细辛的主要分布地区。除云南省外，在四川省的攀西和西藏的林芝也有少量灯盏细辛分布。灯盏细辛是云南民间长用的一种草药，近年来人们对灯盏细辛研究的逐渐深入，有关灯盏细辛的剂型在临床上广泛应用，野生资源正在逐渐减少，因此，对该植物已经开展了人工种植。
1.1.3灯盏细辛的化学成分及药理活性
早在70年代中期，我国学者已开始对灯盏细辛化学成分进行研究。目前从灯盏细辛中已分离鉴定出黄酮类、咖啡酸酯类、酚酸类、吡喃酮类、植物甾醇类、倍半萜、挥发油、焦性儿茶酚、氨基酸及微量元素等多种成分[4]。其野黄芩苷是黄酮的有效成分。
近几年来专家对灯盏细辛的研究逐渐深入，使得其药理越来越清晰化，特别是灯盏花的野生植物种类，其药用价值得到充分肯定，灯盏细辛的主要有效成分为黄酮类。近年来灯盏细辛注射液在临床的广泛使用，从其治疗效果来看灯盏细辛在治疗缺血性心、脑血管等疾病疗效显著[5]。灯盏细辛在治疗中风方面药理作用明显，魏戌等[6]、赵敏等[7]和蔡业峰等[8] 在该方面均有研究。灯盏细辛具有降低血液黏度、纤维蛋白、胆固醇和三酰甘油等作用[9]，从而促进血液流动性，改善血液流变学。
1.1.4野黄芩苷的药理作用
野黄芩苷属于黄酮类，其药理作用主要有扩张脑血管、减少脑血管阻力，使其血流量增加等作用，野黄芩苷在临床中治疗中风有显著效果。野黄芩苷还具有解热、镇痛[10]及抗炎作用。
1.1.5有关灯盏细辛提取方法
有关灯盏细辛的回流提取方法有：浸渍法、超声提取法、组织破碎、提取法、碱水提取法、回流提取法，五中方法所得到的野黄芩苷的转移率分别为21.46%、12.26%、24.97%、7.59%、65.02%[1113]。由于浸渍耗时长转移率仅为回流提取的一半不到选择放弃该方法，超声提取法、组织破碎提取法、碱水提取法三种方法的转移率相对回流提取都比较低，也将放弃这几种法案，最终灯盏细辛药材初步决定采用回流提取法。
1.1.6有关灯盏细辛工艺研究现状
李延钊等人根据因素水平表设计正交试验采用高效液相测法测定灯盏花乙素含量，以此为考察指标，结合测定结果综合优先灯盏细辛的最佳提取条件,结果显示用15倍于药材重量的60%的乙醇回流提取2次，每次40min的工艺条件为最佳,灯盏花乙素的最高得率为5.63%，平均RSD值为0.54%[14]。李勇军等人对灯盏细辛采用水提醇沉工艺对其有效成分进行优化分离，考察提取影响因素有：煎煮时间、加水量、煎煮次数，以优选的最佳工艺条件重复试验3次，野黄芩苷平均转移率为84.74%，RSD为2.06%[15]。莫静义等人研究表明灯盏细辛胶囊的最佳提取溶剂为80%乙醇，考察提取影响因素有：乙醇浓度、加醇量、回流时间[16]。
1.2葛根的研究现状
1.2.1葛根的简介
葛根(Pueraria lobata(Willd) Ohwi)来源于豆科植物野葛的干燥根。葛根一词的出现与东晋一名道教学者葛洪有关。当时他发现了此根，并用此根治愈了当地百 姓的一场瘟疫。当地百姓为了纪念他，将此根叫做“葛根”。葛根最早收载于我国第一本药物专著《神农本草经》,在此专著中被列为中品。葛根具有解肌退热、生津、升阳止泻的功效。因此多用于治疗外感发热、口渴、热痢、脾虚泄泻、高血压、头痛项强等症[17]。葛根素为葛根的有效活性成分，临床上治疗冠心病、高血压、心律失常、心肌梗死、心绞痛等心脑血管疾病有疗效[18]。
目 录
1 绪论
1.1灯盏细辛的研究现状 1
1.1.1灯盏细辛的简介 1
1.1.2灯盏细辛的资源现状 1
1.1.3灯盏细辛的化学成分及药理活性 1
1.1.4野黄芩苷的药理作用 2
1.1.5有关灯盏细辛提取方法 2
1.1.6有关灯盏细辛工艺研究现状 2
1.2葛根的研究现状 3
1.2.1葛根的简介 3
1.2.2葛根的资源现状 3
1.2.3葛根的化学成分及药理活性 3
1.2.4葛根素的药理作用 3
1.2.5有关葛根提取方法 4
1.2.6有关葛根工艺研究现状 4
1.3选题的意义 4
2实验部分
2.1仪器与试药 5
2.1.1仪器 5
2.1.2试药 5
2.2方法及结果 5
2.2.1测定方法的建立 6
2.2.2提取工艺研究 9
2.2.3最优工艺验证 11
2.2.4最优工艺提取次数考察 12
2.3讨论 13
2.3.1提取工艺结果分析讨论 13
2.3.2最优工艺验证结果分析讨论 13
2.3.3最优工艺提取次数考察结果分析讨论 13
结 语 15
参考文献 16
致 谢 19
1 绪论
1.1灯盏细辛的研究现状 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072^
1.1.1灯盏细辛的简介
灯盏细辛（Erigeronbreviscapus(Vant.)HandMazz）来源于菊科植物短葶飞蓬的干燥全草，是云南著名中草药。灯盏细辛最早收载于《滇南本草》。进而灯盏细辛又被《云南中草药选》、《文山中草药》、《昆明民间常用中草药》及《云南中药志》等文献收载。灯盏细辛的药品质量标准首次收载于《云南省药品标准》（1974年版），也曾收载于《中华人民共和国药典》（1977版）一部[1]。灯盏细辛味辛、微苦，性温；归心、肝经。它的功效有散寒解表、祛风除湿、活血化淤、通经络、止痛等。灯盏花素在临床中主要应用于治疗中风、心绞痛及冠心病等[2]。灯盏花素的有效活性成分为野黄芩苷。近年来由于灯盏细辛在心脑血管疾病方面疗效确切，开发的中成药剂型众多，涉及注射剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂等。
1.1.2灯盏细辛的资源现状
灯盏细辛野生资源主要生长在海拔1200～3500米之间，年平均气温15℃左右，土壤微酸性和中性[3]。该属植物约200种以上，除南北极以外全球其他区域均有分布，北美尤盛，我国有30余种，药用9种。我国云南省是野生灯盏细辛的主要分布地区。除云南省外，在四川省的攀西和西藏的林芝也有少量灯盏细辛分布。灯盏细辛是云南民间长用的一种草药，近年来人们对灯盏细辛研究的逐渐深入，有关灯盏细辛的剂型在临床上广泛应用，野生资源正在逐渐减少，因此，对该植物已经开展了人工种植。
1.1.3灯盏细辛的化学成分及药理活性
早在70年代中期，我国学者已开始对灯盏细辛化学成分进行研究。目前从灯盏细辛中已分离鉴定出黄酮类、咖啡酸酯类、酚酸类、吡喃酮类、植物甾醇类、倍半萜、挥发油、焦性儿茶酚、氨基酸及微量元素等多种成分[4]。其野黄芩苷是黄酮的有效成分。
近几年来专家对灯盏细辛的研究逐渐深入，使得其药理越来越清晰化，特别是灯盏花的野生植物种类，其药用价值得到充分肯定，灯盏细辛的主要有效成分为黄酮类。近年来灯盏细辛注射液在临床的广泛使用，从其治疗效果来看灯盏细辛在治疗缺血性心、脑血管等疾病疗效显著[5]。灯盏细辛在治疗中风方面药理作用明显，魏戌等[6]、赵敏等[7]和蔡业峰等[8] 在该方面均有研究。灯盏细辛具有降低血液黏度、纤维蛋白、胆固醇和三酰甘油等作用[9]，从而促进血液流动性，改善血液流变学。
1.1.4野黄芩苷的药理作用
野黄芩苷属于黄酮类，其药理作用主要有扩张脑血管、减少脑血管阻力，使其血流量增加等作用，野黄芩苷在临床中治疗中风有显著效果。野黄芩苷还具有解热、镇痛[10]及抗炎作用。
1.1.5有关灯盏细辛提取方法
有关灯盏细辛的回流提取方法有：浸渍法、超声提取法、组织破碎、提取法、碱水提取法、回流提取法，五中方法所得到的野黄芩苷的转移率分别为21.46%、12.26%、24.97%、7.59%、65.02%[1113]。由于浸渍耗时长转移率仅为回流提取的一半不到选择放弃该方法，超声提取法、组织破碎提取法、碱水提取法三种方法的转移率相对回流提取都比较低，也将放弃这几种法案，最终灯盏细辛药材初步决定采用回流提取法。
1.1.6有关灯盏细辛工艺研究现状
李延钊等人根据因素水平表设计正交试验采用高效液相测法测定灯盏花乙素含量，以此为考察指标，结合测定结果综合优先灯盏细辛的最佳提取条件,结果显示用15倍于药材重量的60%的乙醇回流提取2次，每次40min的工艺条件为最佳,灯盏花乙素的最高得率为5.63%，平均RSD值为0.54%[14]。李勇军等人对灯盏细辛采用水提醇沉工艺对其有效成分进行优化分离，考察提取影响因素有：煎煮时间、加水量、煎煮次数，以优选的最佳工艺条件重复试验3次，野黄芩苷平均转移率为84.74%，RSD为2.06%[15]。莫静义等人研究表明灯盏细辛胶囊的最佳提取溶剂为80%乙醇，考察提取影响因素有：乙醇浓度、加醇量、回流时间[16]。
1.2葛根的研究现状
1.2.1葛根的简介
葛根(Pueraria lobata(Willd) Ohwi)来源于豆科植物野葛的干燥根。葛根一词的出现与东晋一名道教学者葛洪有关。当时他发现了此根，并用此根治愈了当地百 姓的一场瘟疫。当地百姓为了纪念他，将此根叫做“葛根”。葛根最早收载于我国第一本药物专著《神农本草经》,在此专著中被列为中品。葛根具有解肌退热、生津、升阳止泻的功效。因此多用于治疗外感发热、口渴、热痢、脾虚泄泻、高血压、头痛项强等症[17]。葛根素为葛根的有效活性成分，临床上治疗冠心病、高血压、心律失常、心肌梗死、心绞痛等心脑血管疾病有疗效[18]。
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