环氟菌胺对土壤酶活性的影响研究
: 1关键字 1Abstract 1Key words: 11 选题背景 21.1 农药对土壤酶影响 21.1.1 农药对土壤蔗糖酶的影响 21.1.2 农药对土壤脲酶的影响 21.1.3 农药对土壤脱氢酶的影响 31.2 环氟菌胺环境行为研究进展 31.3 研究内容及意义 52. 材料与方法 52.1 实验材料 52.1.1 试剂和药品 52.1.2 仪器和设备 62.1.3 供试土壤类型 62.2 实验方法 62.2.1 土壤试验 62.2.2 酶活测定 62.2.2.1 蔗糖酶活性测定方法 72.2.2.2 脲酶活性测定方法 72.2.2.3 脱氢酶活性测定方法 83. 结果与讨论 93.1 土壤类型对酶活性的影响 93.1.1 土壤类型对脲酶活性的影响 93.1.2土壤类型对蔗糖酶活性的影响 103.1.3土壤类型对脱氢酶活性的影响 103.2不同初始浓度对酶活性的影响 113.2.1 不同初始浓度对土壤脲酶的影响 113.2.2 不同初始浓度对土壤蔗糖酶的影响 113.2.3 不同初始浓度对土壤脱氢酶的影响 124结论 13参考文献 14环氟菌胺对土壤酶活性的影响研究:环氟菌胺是日本曹达公司研发的新型除菌剂，对白粉病具有很好的治疗活性。本实验研究环氟菌胺对土壤酶活性的影响，选取蔗糖酶，脲酶和脱氢酶为研究对象，设立四个环氟菌胺处理水平，分别在培养过程中的0，3，7，14，21，30，45天时取样测定三种土壤中三种酶的活性。结果表明，土壤类型对土壤脲酶、脱氢酶的活性影响不大，而蔗糖酶的活性与土壤类型有关；5-50mg/kg的环氟菌胺对土壤中的脲酶主要起抑制作用，随着时间的增加，抑制作用有所减弱并趋于稳定，在7d时抑制作用最强；环氟菌胺对蔗糖酶的影响较复杂，先激活后抑制的现象反复出现，在3d时激活作用最强；环氟菌胺对脱氢酶活性有明显激活作用。关键字环氟菌胺；土壤酶；活性Effects of Cyflufenamid on Soil Enzyme ActivityStudent majoring in Plant Protection: Yang Rui Tutor: Shi HaiyangAbstractCyclofluorine is a new type of antibacterial agent developed by cao da co *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
mpany in Japan, which has good therapeutic activity for powdery mildew. This experiment research the effects of Cyclofluorine on soil enzyme activity, selecting sucrase, urease and dehydrogenase as the research objects, four treatment levels of Cyclofluorine were designed and the activities of three different soil enzymes samples cultured for 0, 3, 7, 14, 21, 30, and 45d were determined.. The results showed that the soil type had no obvious effect on urease and dehydrogenase, but sucrose enzyme showed different sensitivity in different soils. The 5-50mg/kg of cyclofluorine inhibited urease activity, the inhibition got weaker and stabilized as time went on,,and which was strongest at 7d. The effect of cyclofluorine on sucro se enzyme is complex, at first it showed sucrose enzyme has been activate and then inhibit, this trend repeated a long time until the end, the activation is strongest in 3d. The activity of cyclofluorine was obviously activated for dehydrogenase.1 选题背景农药因为兼具高效性和经济性，始终是防治病虫害的最佳选择，但目前，由于施药者的素质不同，仍然存在直接向土壤或植物表面喷洒农药的错误施药方法，这使得土壤中农药残留量增加，土壤污染严重。研究表明，进入土壤的农药中，有 80% 以上会残留在土壤 0～20 cm 的表土层[1-2]，并随着土层中的物质流动而逐步分散到微生物与植物中，影响能量循环与转移的过程。土壤酶在土壤生态环境中扮演着重要的角色，不仅是土壤的重要组成部分，参与土壤中的物质转化和能量转移，而且具有自净能力，能通过降解外来污染物来修复土壤，维持土壤生态系统的稳定。土壤酶活性对环境等外界因素引起的变化较敏感，能够现实土壤的综合肥力特征及土壤养分转化过程，因此被许多学者看作衡量生态系统土壤质量变化的预警和敏感指标。1.1 农药对土壤酶影响农药通常会会以两种形式——农药本身及其分解产物残留在土壤中,两种残留物都会对土壤生态环境产生影响,同时改变土壤酶活性。在大量室内试验和农业实践中,农药对土壤酶活性的影响呈现出不同的趋势,一部分直接抑制或激活土壤酶活性,另一部分会出现先激活后抑制的趋势,这可能由农药种类和浓度的不同而引起。农药还能通过影响植物根系功能或土壤生物的组成来改变土壤酶的含量与活性。所以，土壤酶常被选为指示剂来检测农药对土壤环境的影响。1.1.1 农药对土壤蔗糖酶的影响蔗糖酶广泛存在于生物体中，是催化蔗糖水解成为果糖和葡萄糖的一种酶，土壤中很多因子与蔗糖酶有相关性，如土壤中微生物数量、土壤呼吸强度，以及有机质，氮，磷的含量。通常情况下,土壤的肥力和蔗糖的酶活性强度呈正比，因此,蔗糖酶常被用来表示土壤生物学活性强度,也能够作为重要指标来评价土壤肥力水平。很多农药对土壤酶的影响都是符合计量一效应关系的,即高剂量对应高效应，在付岩[3]的研究中噻嗪酮在高浓度处理下对这蔗糖酶有极显著抑制作用，丙草胺和叶枯唑处理培养1天后对土壤中蔗糖酶表现出抑制作用，抑制率分别为7.4-34.5%、17.0-47.6%,均达到显著水平；代森锰锌和石硫合剂在低浓度时对土壤蔗糖酶有激活作用，但随着农药浓度的增加，激活作用逐渐降低，高浓度时有显著抑制作用，抑制率分别为4.01%～17.19%，1.02%～16.85%。乔思佳[4]的研究结果表明，嘧菌酯对土壤庶糖酶活性存在影响，低浓度的嘧菌酯对土壤蔗糖酶有激活作用，高浓度有抑制作用，且其影响程度与土壤理化性质相关，有机质含量低的土壤庶糖酶对嘧菌酯敏感，抑制作用随着时间的增加而逐渐减弱。1.1.2 农药对土壤脲酶的影响脲酶是土壤中最常见的酶之一，且国内外对其的研究的比较深入。脲酶的酶促产物——氮是植物的主要氮源。尿素氮肥水解与脲酶密切相关，有机肥中也有游离的脲酶存在，同时，脲酶与土壤中微生物含量，有机质含量也有密切关系。闫颖[5]的研究表明百菌清、多菌灵、百菌清-多菌灵混剂、氯氰菊酯对大棚土壤脲酶的激活作用随浓度增大而增大，氯氰菊酯对脲酶的激活效果最为显著，激活率由12.10%增至44.29%高浓度的嘧菌酯对土壤脲酶有抑制作用，但抑制作用不明显王学锋和苏霄雨[6]发现代森锰锌，石硫合剂两种农药在低浓度时对土壤脲酶起激发作用，高浓度的农药抑制了土壤微生Kalam等[7]发现, Propiconazole、Pro-fenofos和Pretilachlor可显著抑制土壤脲酶的活性，最大抑制率为62%。赵志强[8]等发现毒死蜱和丁硫克百威在施入土壤初期对脲酶活性有显著抑制作用，在1～2周内恢复到对照水平，说明这两种农药对土壤脲酶活性不会造成严重危害。杨惠芳的室内实验得出单甲眯〔Nl一2,4一二甲苯基一-N甲基甲眯〕,简称DMA)对土壤脲酶有抑制作用，且随脲酶浓度增加抑制作用增强。张宇[9]研究了5种除草剂（氯喀磺隆、乙草胺、异噁草酮、咪草烟、2,4D丁酯）对土壤脲酶活性的影响。氯喀磺隆和2,4D丁酯对土壤脲酶有抑制作用，乙草胺对脲酶始终保持促进作用,并随乙草胺用量的增加而增强，异噁草酮对脲酶活性的影响表现为“抑制一恢复一促进。咪草烟对脲酶活性影响表现为“抑制一激活。1.1.3 农药对土壤脱氢酶的影响脱氢酶能促进脱氢反应，在生物体内的电子传递和能量转换中起重要作用。在吕栋栋[10]的室内实验中，嘧菌酯对脱氢氧酶产生抑制作用，且抑制作用随着嘧菌酯染毒浓度和染毒时间的增加而增强。姜虎生[11]等研究了博洒、地虫克星、高渗吡虫啉、三氯 4 种农药对土壤脱氢酶活性及呼吸作用的影响。试验结果表明土壤脱氢酶活性在低剂量( ＜ 2 ml) 时随投加高渗吡虫啉、三氯的增加而降低，表现为抑制作用，当超过一定浓度阈值后趋于稳定。而博洒、地虫克星随农药用量的增加，脱氢酶活性先抑制再激活，加入等量( 0． 01ml) 农药的土样随培养时间增加抑制率呈线形增长；不同农药对土壤呼吸作用均表现为激活作用。郭明等[12]研究了四种农药对脱氢酶活性的影响，4种农药对酶活性都有不同程度的抑制效果，其大小顺序依次为天王星>功夫>氧化乐果>久效磷。1.2 环氟菌胺环境行为研究进展环氟菌胺（cyflufenamid），由日本曹达公司研发的新型酰胺类杀菌剂，主要防治各种农作物的白粉病；2003年在日本上市。化学名称 (Z)-N-[a-(环丙甲氧亚氨基)-2, 3-二氟-6-(三氟甲基)苄基]-2-苯乙酰胺，英文化学名称 (Z)-N-[a-(cyclopropylmethoxyi-mino)-2,3-difluoro-6-(trifluoromethyl)benzyl]-2-phenylacetamide，化学分子式为C20H17F5N2O2，相对分子量为412.35，化学结构式如图1。图1 环氟菌胺化学结构式Fig. 1 graph of chemical structures of cyflufenamid环氟菌胺是具芳香味的白色固体，物理性质熔点 61.5℃~62.5℃，沸点 256.8℃。相对密度 1.347 (20℃)。蒸气压3.54×10-5Pa (20℃)。在p H=5~7 的水溶液中稳定，p H = 9 水溶液半衰期为 2 8 8 d ；水溶液光解半衰期为 594d。p Ka 为 12.08[1,2]。环氟菌胺的毒理学性质ADI 值 0.041mg/kg。对兔皮肤无刺激性，对眼睛有轻微刺激性，对豚鼠皮肤无致敏性。国内外对于环氟菌胺的研究较多停留在其检测分析方法和田间药效试验。李立等[13]采用了气相色谱-质谱联用仪检测食品中环氟菌胺的残留量，使用乙腈提取，用固相萃取方法（SPE）进行净化，外标法定量，该方法的相对标准偏差为2.9%~10.8%，添加回收率为81.0%~101.3%，最低检测限为0.010 mg/kg。杨雯筌等[14]用乙酸乙酯作为提取剂对胡萝卜中的环氟菌胺进行提取，提取液经SPE净化后，由GC-NCI/MS在选择离子监测模式（SIM）下测定，该方法的准确度和精密度较高，在0.005,0.01,0.02,0.04mg/kg水平下胡萝卜中环氟菌胺的回收率为74.9%～ 96.4%,日间精密度小于9.7%,LOQ为0.005mg/kg,姜宜飞等[15]采用高效液相色谱法，以乙腈和磷酸缓冲溶液为流动相，在210 nm波长下对环氟菌胺原药进行分离和定量分析，该分析方法的线性相关系数为1.0000，平均回收率为99.80%，相对标准偏差为0.27%。马韵升等[16]在2005年的环氟菌胺室内保护活性试验结果表明环氟菌胺对小麦、黄瓜、草莓、苹果、葡萄白粉病的 EC75 (mg/L) 分别为 0.2、0.2、0.2、0.8、0.8。程志明[17]的研究发现环氟菌胺不仅对各类白粉病具有高活性，对桃灰星病菌的高活性也显示出高活性，且环氟菌胺对苯并咪挫类、咪挫类、甲氧基丙烯酸酯类抗菌剂和敏感菌具有同等活性。对于环氟菌胺环境行为的实验报道较少，魏海峰[15]对环氟菌胺的环境行为进行了较全面的研究。光降解试验中，相同浓度的环氟菌胺在自然光或紫外光照射下均属于难降解农药，且随着初始环氟菌胺浓度的提高，光降解速率会变慢，当环氟菌胺的初始浓度为 5.0 mg/L 时，其光解半衰期增大到36.5 d；室内实验发现水解速率常数会随着温度每升高10 °C而相应的增加2~4，且自然条件下自然环境中的水解半衰期为16.9 d，降解速度远远大于其在实验室条件下的水解速率；在探究环氟菌胺在土壤中的降解行为时，三种土壤中环氟菌胺的降解速率大小依次为森林土壤>稻田土壤>城市土壤，且不同土壤中的降解均符合一级动力学方程，相关系数为 0.9528~0.9902，线性相关性良好。在灭菌土壤的降解实验中，环氟菌胺的降解速率比较未灭菌土壤中的降解速率明显减慢，其中又以森林土壤中灭菌后降解速率下降的最显著，稻田土壤中灭菌后环氟菌胺的降解速率也较明显下降，城市土壤中环氟菌胺的降解速率受到的影响最小，说明微生物数量和有机物种类对环氟菌胺在土壤中的降解速率有明显影响。在土壤迁徙试验中得到环氟菌胺在三种土壤中的吸附常数，稻田土壤为2.87，森林土壤为1.18，城市土壤为 0.91，均为中等移动。 1.3 研究内容及意义环氟菌胺具有优异的治疗活性、持效活性和耐雨水冲刷活性，且与正在使用的很多同类杀菌剂无交互抗性，该药的专利在世界各地已经陆续到期，拥有很高的应用前景。目前国内关于环氟菌胺的环境行为研究报道很少，对其土壤生态毒理学效应的研究还没有报道，已有研究主要集中在合成路线、药效实验及检测分析方法上。本课题以蔗糖酶，脲酶和脱氢酶为指标，采用经典比色法建立了环氟菌胺对三种土壤酶活性的测定法，并研究在不同初始浓度以及不同土壤类型下环氟菌胺对三种酶活性的影响，为评估环氟菌胺对生态环境的危害和安全合理使用提供科学依据。2. 材料与方法2.1 实验材料2.1.1 试剂和药品环氟菌胺标准品质量分数99.0%，江苏龙灯化学有限公司丙酮分析纯，上海凌峰化学试剂有限公司甲苯、乙醇、甲醇分析纯，天津科密欧化学试剂有限公司二硝基水杨酸、苯甲酸、柠檬酸分析纯，广东西陇化工股份有限公司无水硫酸钠、氯化钠分析纯，广东西陇化工股份有限公司氢氧化钠、苯酚、硫酸铵分析纯，广东西陇化工股份有限公司酒石酸钾钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠分析纯，广东西陇化工股份有限公司蔗糖、尿素分析纯，广东西陇化工股份有限公司次氯酸钠、亚硫酸氢钠分析纯，广东西陇化工股份有限公司氯化三甲苯基四氮唑分析纯，广东西陇化工股份有限公司2.1.2 仪器和设备SpectraMax M5 多功能读板机美国Molecular Devices 公司DNP-9052 型新型电热恒温培养箱浙江宁波江南仪器厂BS110S电子天平北京塞多利斯天平有限公司TDL-40B台式离心机上海安亭仪器有限公司CQ25-12D超声波清洗机宁波江南仪器厂Vortex Genius 3涡流混合器德国IKA集团ZHWY-2102恒温培养振荡器上海智城分析仪器有限公司2.1.3 供试土壤类型南京黄棕壤、江西红壤、东北黑土2.2 实验方法2.2.1 土壤试验不同土壤类型分别称取500 g三种类型的土样于1000 ml 锥形瓶中，在25℃的恒温培养箱中培养7d后，取出各类土样于干净的白瓷盘中，一边喷洒环氟菌胺的丙酮标准溶液，一边搅拌，使三类土壤中环氟菌胺的浓度都为5 mg·kg-1,待溶剂挥发后，调节土壤含水量，使其达到饱和持水量的60%，继续放于25℃的恒温箱中继续培养，期间定时补充水分，保持土壤含水量恒定，于0d、3d、7d、14d、21d、30d、45d取样，测定土壤酶活性。不同初始浓度方法同上，土壤只用南京的黄棕壤，添加浓度为0、5、10、50、100 mg·kg-1。2.2.2 酶活测定土壤蔗糖酶、脲酶、脱氢酶的活性测定方法参照《土壤酶及其研究法》[17]并稍加改进。2.2.2.1 蔗糖酶活性测定方法蔗糖酶活性测定方法采用 3，5-二硝基水杨酸比色法。以蔗糖为基质，根据酶促产物葡萄糖与3，5-二硝基水杨酸生成有色化合物 3-氨基-5-硝基水杨酸的量进行比色测定。称5g风干土壤于 50ml 三角瓶中，注入15ml 8 % 蔗糖溶液，5ml ph 5.5 磷酸缓冲液和5滴甲苯，放入37℃恒温箱中震荡培养24h。到时取出，迅速从垫有滤纸的漏斗中过滤到 50ml 三角瓶中，从中吸取1ml滤液注入50 ml 容量瓶中，加 3ml 3,5-二硝基水杨酸，并在沸水域中加热5 min ,随即转移至自来水流下冷却3 min。溶液因生成3-氨基-5-硝基水杨酸而呈橙黄色，最后用蒸馏水稀释至50 ml ，并在分光光度计上于波长508nm处进行比色。同时做标准曲线、无基质对照和无土壤对照试验。蔗糖酶活性以 24h 后每克土样所产生葡萄糖的质量来表示（mg·g-1）。 标准曲线分别取0.01, 0.05,0.1,0.3,0.5 mg / ml 浓度的蔗糖溶液1 ml，按照测定酶活性同样的方法进行显色，比色后以光密度值为纵坐标，葡萄糖溶液浓度为横坐标绘制成标准曲线。得标准曲线如图二所示。图2 蔗糖酶标准曲线Fig. 2 The standard curve of sucrose2.2.2.2 脲酶活性测定方法脲酶测定同样采取比色法，称取5g风干土壤于50 ml 三角瓶中，加入10 ml 甲苯，静置15min后加10 ml 10%尿素液和20ml ph6.7柠檬酸盐缓冲液，摇匀后再37℃恒温培养箱中培养24h,过滤后取3ml滤液注入50 ml 容量瓶中，然后加蒸馏水至20 ml ，再加4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液，随加随摇匀。20min后显色定容，在1h之内在分光光度计上于波长578nm处比色。脲酶活性以24 h 后1 g 土壤中NH3-N的毫克数表示。标准曲线绘制吸取稀释的标准液1,3,5,7,9,11,13ml于50 ml 容量瓶中，用测定脲酶酶活同样的办法进行显色，比色后以光密度值为纵坐标，溶液浓度为横坐标绘制成标准曲线。得标准曲线如图3所示。图3 脲酶标准曲线Fig. 3 The standard curve of urease2.2.2.3 脱氢酶活性测定方法 取20g土壤置于50 ml 三角瓶中，加0.2g CaCO3，摇匀后加2ml 1% 三苯基四唑化合物，在加水至最大持水量的90%，在恒温培养箱中（30℃，相对湿度70%）培养24h。培养结束后，加25ml甲醇，振荡5min，快速过滤，再用甲醇多次洗涤漏斗上的土壤，直至获得无色滤液，合并滤液和洗涤液并定容至100ml容量瓶中，在分光光度计上于480nm处比色。脱氢酶活性以20g土壤中H+ 的微升数表示。·标准曲线绘制吸取10ml分别含有20，50，100，200，300μg的三苯基四唑氯化物溶液，加10mg NaHSO3和保险粉还原，显色后子分光光度计上460nm处比色测定并绘制标准曲线。得标准曲线如图四所示。图4 脱氢酶标准曲线Fig. 4 The standard curve of dehydrogenase3. 结果与讨论3.1 土壤类型对酶活性的影响3.1.1 土壤类型对脲酶活性的影响脲酶在不同土壤类型中的活性见表1，结果显示在不同土壤类型中，环氟菌胺对脲酶的活性整体均表现为抑制作用，并且在7 d时达到最大，抑制作用先增强再减弱，最后趋于稳定，由此可见，土壤类型对脲酶活性的影响作用不大。表1 不同土壤类型中脲酶的活性Table 1 Urease activity of soil with different soils土壤类型天数（d）03714213045江西红壤5.252.310.260.880.921.101.13南京黄棕壤8.263.210.861.441.881.211.53东北黑土8.296.430.731.231.501.561.483.1.2土壤类型对蔗糖酶活性的影响蔗糖酶在不同土壤类型中的活性见表2，结果显示在南京黄棕壤和东北黑土中，环氟菌胺对蔗糖酶活性影响效应相同，呈现反复抑制-激活-抑制-激活的趋势，且蔗糖酶的最大活性均出现在21天，南京黄棕壤和东北黑土分别达到28.43和19.92 mg·g-1；而在江西红壤中，环氟菌胺对蔗糖酶的活性表现相反，呈现出先激活后抑制的反复趋势，蔗糖酶的最大活性出现在第7d。由此可知，环氟菌胺在不同土壤类型中对脲酶活性的影响有差异的，可能主要受土壤有机质含量的影响。表2 不同土壤类型中蔗糖酶的活性Table 2 Sucrase activity of soil with different soils土壤类型天数（d）03714213045江西红壤2.7810.2019.228.3010.213.223.24南京黄棕壤10.018.4514.5511.3228.4311.309.80东北黑土11.079.2113.887.3019.9211.438.733.1.3土壤类型对脱氢酶活性的影响脱氢酶在不同土壤类型中的活性见表4，结果显示在不同土壤类型中，环氟菌胺对脱氢酶的活性整体均表现为促进作用，除南京黄棕壤在3d时出现脱氢酶活性下降外，其余土壤中脱氢酶活性均出现且随着时间的增加而稳定增加的现象，促进作用是先增强再减弱。 表3 不同土壤类型中脱氢酶的活性Table 3 Dehydrogenase activity of soil with different soils土壤类型天数（d）03714213045江西红壤16.3618.4421.5633.3337.5641.1042.50南京黄棕壤18.7618.3327.9636.4046.9655.6162.13东北黑土20.9623.4529.5641.2250.3657.8969.743.2不同初始浓度对酶活性的影响3.2.1 不同初始浓度对土壤脲酶的影响环氟菌胺不同初始浓度对土壤脲酶活性影响结果见图5。浓度为5 mg·kg-1、10 mg·kg-1、50 mg·kg-1时整体表现出抑制作用，0~7 d的抑制作用最强，7 d~21 d的抑制作用减弱，21 d~30 d抑制作用继续增强，最后30 d~45 d抑制作用趋于稳定，7d 时脲酶活性最低；浓度为100 mg·kg-1时，0~3 d表现为短期激活，3 d~7d大幅度被抑制，随后抑制作用减缓，接着也趋于稳定。总的来说，环氟菌胺对土壤中的脲酶活性起抑制作用，且各个浓度在第7 d时脲酶活性最低，最后抑制强度减缓并趋于稳定。图5 不同浓度环氟菌胺对土壤脲酶活性的影响Fig.5 Effect of different concentrations of cyflufenamid on urease activity3.2.2 不同初始浓度对土壤蔗糖酶的影响如图六所示。浓度为5 mg·kg-1时，0 d~3 d先是抑制作用，3 d~7 d抑制作用减弱，7 d~14 d抑制作用加强，14 d~21d蔗糖酶被激活，表现为促进作用，21 d~30 d 促进作用减弱，30 d~45 d 蔗糖酶的活性趋于稳定；浓度为10 mg·kg-1时，0 d~3 d被激活，接下来又被抑制，14 d~21d蔗糖酶活性继续激活，幅度最大，21 d~30 d 激活作用减弱，30 d~45 d 蔗糖酶的活性趋于稳定，21 d 时活性最强；浓度为50 mg·kg-1、100 mg·kg-1时，蔗糖酶的活性表现为反复激活后，最终趋于稳定。0 d~3 d 激活作用增强，3 d~7 d 激活作用减弱，7 d~14 d激活作用又被增强，14 d~21d激活作用又被减弱，21 d~45 d稍有下降，又基本稳定，3 d时活性最强。图6 不同浓度环氟菌胺对土壤蔗糖活性的影响Fig.6 Effect of different concentrations of cyflufenamid on sucrase activity3.2.3 不同初始浓度对土壤脱氢酶的影响如图7所示。浓度为5 mg·kg-1、10 mg·kg-1、50 mg·kg-1、100mg·kg-1时，环氟菌胺对土壤脱氢酶的活性均表现为促进作用，且0 d~7 d 时激活作用缓慢，7 d~21d 时激活作用大幅度提升，21 d~45 d时激活作用缓慢。随着浓度的增加，激活幅度也再增加，50 mg·kg-1、100mg·kg-1相比于5 mg·kg-1、10 mg·kg-1、50 mg·kg-1，增幅有所下降。图7 不同浓度环氟菌胺对土壤脱氢酶活性的影响Fig.7 Effect of different concentrations of cyflufenamid on dehydrogenase activity致谢最后，我还要向在学习和生活上给予我支持、理解和关怀的家人表示衷心的感谢，同时也向百忙中评阅和评议本论文的专家们表示诚挚的谢意。4结论本试验采用经典比色法，在同等环氟菌胺浓度,不同类型土壤的条件下，检测了环氟菌胺对土壤酶的影响，在土壤类型对土壤酶的影响实验中，脲酶和脱氢酶的活性变化趋势相同，分别呈现出抑制和促进作用，脲酶活性在7d时最低，后随时间的增加抑制作用逐渐降低；环氟菌胺对脱氢酶活性的促进作用明显；对于蔗糖酶，不同土壤表现出不一样的酶活性变化趋势，江西红壤中的蔗糖酶出现激活-抑制-激活-抑制的反复趋势，并在d7达到最大值19.22 μg·ml-1，造成这种现象出现的原因可能与土壤中的有机质有关。在环氟菌胺浓度对土壤酶的实验中发现，环氟菌胺对脲酶活性整体表现出抑制作用，0~7 d的抑制作用最强，7 d~21 d的抑制作用减弱，在浓度为100 mg·kg-1时，出现短期激活，随后大幅抑制作用，且抑制作用随时间的增加逐渐减缓，并趋于稳定。环氟菌胺对蔗糖酶的作用比较复杂，低浓度时蔗糖酶活性先激活随后受到抑制，高浓度时酶活性出现相反的抑制-激活-抑制-激活的重复趋势。环氟菌高浓度时激活脱氢酶活性，激活作用随浓度的增加而增强，7d~14d时激活作用最明显，后期逐渐平稳。参考文献[1] Tomlin C D S. 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目录
引言
mpany in Japan, which has good therapeutic activity for powdery mildew. This experiment research the effects of Cyclofluorine on soil enzyme activity, selecting sucrase, urease and dehydrogenase as the research objects, four treatment levels of Cyclofluorine were designed and the activities of three different soil enzymes samples cultured for 0, 3, 7, 14, 21, 30, and 45d were determined.. The results showed that the soil type had no obvious effect on urease and dehydrogenase, but sucrose enzyme showed different sensitivity in different soils. The 5-50mg/kg of cyclofluorine inhibited urease activity, the inhibition got weaker and stabilized as time went on,,and which was strongest at 7d. The effect of cyclofluorine on sucro se enzyme is complex, at first it showed sucrose enzyme has been activate and then inhibit, this trend repeated a long time until the end, the activation is strongest in 3d. The activity of cyclofluorine was obviously activated for dehydrogenase.1 选题背景农药因为兼具高效性和经济性，始终是防治病虫害的最佳选择，但目前，由于施药者的素质不同，仍然存在直接向土壤或植物表面喷洒农药的错误施药方法，这使得土壤中农药残留量增加，土壤污染严重。研究表明，进入土壤的农药中，有 80% 以上会残留在土壤 0～20 cm 的表土层[1-2]，并随着土层中的物质流动而逐步分散到微生物与植物中，影响能量循环与转移的过程。土壤酶在土壤生态环境中扮演着重要的角色，不仅是土壤的重要组成部分，参与土壤中的物质转化和能量转移，而且具有自净能力，能通过降解外来污染物来修复土壤，维持土壤生态系统的稳定。土壤酶活性对环境等外界因素引起的变化较敏感，能够现实土壤的综合肥力特征及土壤养分转化过程，因此被许多学者看作衡量生态系统土壤质量变化的预警和敏感指标。1.1 农药对土壤酶影响农药通常会会以两种形式——农药本身及其分解产物残留在土壤中,两种残留物都会对土壤生态环境产生影响,同时改变土壤酶活性。在大量室内试验和农业实践中,农药对土壤酶活性的影响呈现出不同的趋势,一部分直接抑制或激活土壤酶活性,另一部分会出现先激活后抑制的趋势,这可能由农药种类和浓度的不同而引起。农药还能通过影响植物根系功能或土壤生物的组成来改变土壤酶的含量与活性。所以，土壤酶常被选为指示剂来检测农药对土壤环境的影响。1.1.1 农药对土壤蔗糖酶的影响蔗糖酶广泛存在于生物体中，是催化蔗糖水解成为果糖和葡萄糖的一种酶，土壤中很多因子与蔗糖酶有相关性，如土壤中微生物数量、土壤呼吸强度，以及有机质，氮，磷的含量。通常情况下,土壤的肥力和蔗糖的酶活性强度呈正比，因此,蔗糖酶常被用来表示土壤生物学活性强度,也能够作为重要指标来评价土壤肥力水平。很多农药对土壤酶的影响都是符合计量一效应关系的,即高剂量对应高效应，在付岩[3]的研究中噻嗪酮在高浓度处理下对这蔗糖酶有极显著抑制作用，丙草胺和叶枯唑处理培养1天后对土壤中蔗糖酶表现出抑制作用，抑制率分别为7.4-34.5%、17.0-47.6%,均达到显著水平；代森锰锌和石硫合剂在低浓度时对土壤蔗糖酶有激活作用，但随着农药浓度的增加，激活作用逐渐降低，高浓度时有显著抑制作用，抑制率分别为4.01%～17.19%，1.02%～16.85%。乔思佳[4]的研究结果表明，嘧菌酯对土壤庶糖酶活性存在影响，低浓度的嘧菌酯对土壤蔗糖酶有激活作用，高浓度有抑制作用，且其影响程度与土壤理化性质相关，有机质含量低的土壤庶糖酶对嘧菌酯敏感，抑制作用随着时间的增加而逐渐减弱。1.1.2 农药对土壤脲酶的影响脲酶是土壤中最常见的酶之一，且国内外对其的研究的比较深入。脲酶的酶促产物——氮是植物的主要氮源。尿素氮肥水解与脲酶密切相关，有机肥中也有游离的脲酶存在，同时，脲酶与土壤中微生物含量，有机质含量也有密切关系。闫颖[5]的研究表明百菌清、多菌灵、百菌清-多菌灵混剂、氯氰菊酯对大棚土壤脲酶的激活作用随浓度增大而增大，氯氰菊酯对脲酶的激活效果最为显著，激活率由12.10%增至44.29%高浓度的嘧菌酯对土壤脲酶有抑制作用，但抑制作用不明显王学锋和苏霄雨[6]发现代森锰锌，石硫合剂两种农药在低浓度时对土壤脲酶起激发作用，高浓度的农药抑制了土壤微生Kalam等[7]发现, Propiconazole、Pro-fenofos和Pretilachlor可显著抑制土壤脲酶的活性，最大抑制率为62%。赵志强[8]等发现毒死蜱和丁硫克百威在施入土壤初期对脲酶活性有显著抑制作用，在1～2周内恢复到对照水平，说明这两种农药对土壤脲酶活性不会造成严重危害。杨惠芳的室内实验得出单甲眯〔Nl一2,4一二甲苯基一-N甲基甲眯〕,简称DMA)对土壤脲酶有抑制作用，且随脲酶浓度增加抑制作用增强。张宇[9]研究了5种除草剂（氯喀磺隆、乙草胺、异噁草酮、咪草烟、2,4D丁酯）对土壤脲酶活性的影响。氯喀磺隆和2,4D丁酯对土壤脲酶有抑制作用，乙草胺对脲酶始终保持促进作用,并随乙草胺用量的增加而增强，异噁草酮对脲酶活性的影响表现为“抑制一恢复一促进。咪草烟对脲酶活性影响表现为“抑制一激活。1.1.3 农药对土壤脱氢酶的影响脱氢酶能促进脱氢反应，在生物体内的电子传递和能量转换中起重要作用。在吕栋栋[10]的室内实验中，嘧菌酯对脱氢氧酶产生抑制作用，且抑制作用随着嘧菌酯染毒浓度和染毒时间的增加而增强。姜虎生[11]等研究了博洒、地虫克星、高渗吡虫啉、三氯 4 种农药对土壤脱氢酶活性及呼吸作用的影响。试验结果表明土壤脱氢酶活性在低剂量( ＜ 2 ml) 时随投加高渗吡虫啉、三氯的增加而降低，表现为抑制作用，当超过一定浓度阈值后趋于稳定。而博洒、地虫克星随农药用量的增加，脱氢酶活性先抑制再激活，加入等量( 0． 01ml) 农药的土样随培养时间增加抑制率呈线形增长；不同农药对土壤呼吸作用均表现为激活作用。郭明等[12]研究了四种农药对脱氢酶活性的影响，4种农药对酶活性都有不同程度的抑制效果，其大小顺序依次为天王星>功夫>氧化乐果>久效磷。1.2 环氟菌胺环境行为研究进展环氟菌胺（cyflufenamid），由日本曹达公司研发的新型酰胺类杀菌剂，主要防治各种农作物的白粉病；2003年在日本上市。化学名称 (Z)-N-[a-(环丙甲氧亚氨基)-2, 3-二氟-6-(三氟甲基)苄基]-2-苯乙酰胺，英文化学名称 (Z)-N-[a-(cyclopropylmethoxyi-mino)-2,3-difluoro-6-(trifluoromethyl)benzyl]-2-phenylacetamide，化学分子式为C20H17F5N2O2，相对分子量为412.35，化学结构式如图1。图1 环氟菌胺化学结构式Fig. 1 graph of chemical structures of cyflufenamid环氟菌胺是具芳香味的白色固体，物理性质熔点 61.5℃~62.5℃，沸点 256.8℃。相对密度 1.347 (20℃)。蒸气压3.54×10-5Pa (20℃)。在p H=5~7 的水溶液中稳定，p H = 9 水溶液半衰期为 2 8 8 d ；水溶液光解半衰期为 594d。p Ka 为 12.08[1,2]。环氟菌胺的毒理学性质ADI 值 0.041mg/kg。对兔皮肤无刺激性，对眼睛有轻微刺激性，对豚鼠皮肤无致敏性。国内外对于环氟菌胺的研究较多停留在其检测分析方法和田间药效试验。李立等[13]采用了气相色谱-质谱联用仪检测食品中环氟菌胺的残留量，使用乙腈提取，用固相萃取方法（SPE）进行净化，外标法定量，该方法的相对标准偏差为2.9%~10.8%，添加回收率为81.0%~101.3%，最低检测限为0.010 mg/kg。杨雯筌等[14]用乙酸乙酯作为提取剂对胡萝卜中的环氟菌胺进行提取，提取液经SPE净化后，由GC-NCI/MS在选择离子监测模式（SIM）下测定，该方法的准确度和精密度较高，在0.005,0.01,0.02,0.04mg/kg水平下胡萝卜中环氟菌胺的回收率为74.9%～ 96.4%,日间精密度小于9.7%,LOQ为0.005mg/kg,姜宜飞等[15]采用高效液相色谱法，以乙腈和磷酸缓冲溶液为流动相，在210 nm波长下对环氟菌胺原药进行分离和定量分析，该分析方法的线性相关系数为1.0000，平均回收率为99.80%，相对标准偏差为0.27%。马韵升等[16]在2005年的环氟菌胺室内保护活性试验结果表明环氟菌胺对小麦、黄瓜、草莓、苹果、葡萄白粉病的 EC75 (mg/L) 分别为 0.2、0.2、0.2、0.8、0.8。程志明[17]的研究发现环氟菌胺不仅对各类白粉病具有高活性，对桃灰星病菌的高活性也显示出高活性，且环氟菌胺对苯并咪挫类、咪挫类、甲氧基丙烯酸酯类抗菌剂和敏感菌具有同等活性。对于环氟菌胺环境行为的实验报道较少，魏海峰[15]对环氟菌胺的环境行为进行了较全面的研究。光降解试验中，相同浓度的环氟菌胺在自然光或紫外光照射下均属于难降解农药，且随着初始环氟菌胺浓度的提高，光降解速率会变慢，当环氟菌胺的初始浓度为 5.0 mg/L 时，其光解半衰期增大到36.5 d；室内实验发现水解速率常数会随着温度每升高10 °C而相应的增加2~4，且自然条件下自然环境中的水解半衰期为16.9 d，降解速度远远大于其在实验室条件下的水解速率；在探究环氟菌胺在土壤中的降解行为时，三种土壤中环氟菌胺的降解速率大小依次为森林土壤>稻田土壤>城市土壤，且不同土壤中的降解均符合一级动力学方程，相关系数为 0.9528~0.9902，线性相关性良好。在灭菌土壤的降解实验中，环氟菌胺的降解速率比较未灭菌土壤中的降解速率明显减慢，其中又以森林土壤中灭菌后降解速率下降的最显著，稻田土壤中灭菌后环氟菌胺的降解速率也较明显下降，城市土壤中环氟菌胺的降解速率受到的影响最小，说明微生物数量和有机物种类对环氟菌胺在土壤中的降解速率有明显影响。在土壤迁徙试验中得到环氟菌胺在三种土壤中的吸附常数，稻田土壤为2.87，森林土壤为1.18，城市土壤为 0.91，均为中等移动。 1.3 研究内容及意义环氟菌胺具有优异的治疗活性、持效活性和耐雨水冲刷活性，且与正在使用的很多同类杀菌剂无交互抗性，该药的专利在世界各地已经陆续到期，拥有很高的应用前景。目前国内关于环氟菌胺的环境行为研究报道很少，对其土壤生态毒理学效应的研究还没有报道，已有研究主要集中在合成路线、药效实验及检测分析方法上。本课题以蔗糖酶，脲酶和脱氢酶为指标，采用经典比色法建立了环氟菌胺对三种土壤酶活性的测定法，并研究在不同初始浓度以及不同土壤类型下环氟菌胺对三种酶活性的影响，为评估环氟菌胺对生态环境的危害和安全合理使用提供科学依据。2. 材料与方法2.1 实验材料2.1.1 试剂和药品环氟菌胺标准品质量分数99.0%，江苏龙灯化学有限公司丙酮分析纯，上海凌峰化学试剂有限公司甲苯、乙醇、甲醇分析纯，天津科密欧化学试剂有限公司二硝基水杨酸、苯甲酸、柠檬酸分析纯，广东西陇化工股份有限公司无水硫酸钠、氯化钠分析纯，广东西陇化工股份有限公司氢氧化钠、苯酚、硫酸铵分析纯，广东西陇化工股份有限公司酒石酸钾钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠分析纯，广东西陇化工股份有限公司蔗糖、尿素分析纯，广东西陇化工股份有限公司次氯酸钠、亚硫酸氢钠分析纯，广东西陇化工股份有限公司氯化三甲苯基四氮唑分析纯，广东西陇化工股份有限公司2.1.2 仪器和设备SpectraMax M5 多功能读板机美国Molecular Devices 公司DNP-9052 型新型电热恒温培养箱浙江宁波江南仪器厂BS110S电子天平北京塞多利斯天平有限公司TDL-40B台式离心机上海安亭仪器有限公司CQ25-12D超声波清洗机宁波江南仪器厂Vortex Genius 3涡流混合器德国IKA集团ZHWY-2102恒温培养振荡器上海智城分析仪器有限公司2.1.3 供试土壤类型南京黄棕壤、江西红壤、东北黑土2.2 实验方法2.2.1 土壤试验不同土壤类型分别称取500 g三种类型的土样于1000 ml 锥形瓶中，在25℃的恒温培养箱中培养7d后，取出各类土样于干净的白瓷盘中，一边喷洒环氟菌胺的丙酮标准溶液，一边搅拌，使三类土壤中环氟菌胺的浓度都为5 mg·kg-1,待溶剂挥发后，调节土壤含水量，使其达到饱和持水量的60%，继续放于25℃的恒温箱中继续培养，期间定时补充水分，保持土壤含水量恒定，于0d、3d、7d、14d、21d、30d、45d取样，测定土壤酶活性。不同初始浓度方法同上，土壤只用南京的黄棕壤，添加浓度为0、5、10、50、100 mg·kg-1。2.2.2 酶活测定土壤蔗糖酶、脲酶、脱氢酶的活性测定方法参照《土壤酶及其研究法》[17]并稍加改进。2.2.2.1 蔗糖酶活性测定方法蔗糖酶活性测定方法采用 3，5-二硝基水杨酸比色法。以蔗糖为基质，根据酶促产物葡萄糖与3，5-二硝基水杨酸生成有色化合物 3-氨基-5-硝基水杨酸的量进行比色测定。称5g风干土壤于 50ml 三角瓶中，注入15ml 8 % 蔗糖溶液，5ml ph 5.5 磷酸缓冲液和5滴甲苯，放入37℃恒温箱中震荡培养24h。到时取出，迅速从垫有滤纸的漏斗中过滤到 50ml 三角瓶中，从中吸取1ml滤液注入50 ml 容量瓶中，加 3ml 3,5-二硝基水杨酸，并在沸水域中加热5 min ,随即转移至自来水流下冷却3 min。溶液因生成3-氨基-5-硝基水杨酸而呈橙黄色，最后用蒸馏水稀释至50 ml ，并在分光光度计上于波长508nm处进行比色。同时做标准曲线、无基质对照和无土壤对照试验。蔗糖酶活性以 24h 后每克土样所产生葡萄糖的质量来表示（mg·g-1）。 标准曲线分别取0.01, 0.05,0.1,0.3,0.5 mg / ml 浓度的蔗糖溶液1 ml，按照测定酶活性同样的方法进行显色，比色后以光密度值为纵坐标，葡萄糖溶液浓度为横坐标绘制成标准曲线。得标准曲线如图二所示。图2 蔗糖酶标准曲线Fig. 2 The standard curve of sucrose2.2.2.2 脲酶活性测定方法脲酶测定同样采取比色法，称取5g风干土壤于50 ml 三角瓶中，加入10 ml 甲苯，静置15min后加10 ml 10%尿素液和20ml ph6.7柠檬酸盐缓冲液，摇匀后再37℃恒温培养箱中培养24h,过滤后取3ml滤液注入50 ml 容量瓶中，然后加蒸馏水至20 ml ，再加4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液，随加随摇匀。20min后显色定容，在1h之内在分光光度计上于波长578nm处比色。脲酶活性以24 h 后1 g 土壤中NH3-N的毫克数表示。标准曲线绘制吸取稀释的标准液1,3,5,7,9,11,13ml于50 ml 容量瓶中，用测定脲酶酶活同样的办法进行显色，比色后以光密度值为纵坐标，溶液浓度为横坐标绘制成标准曲线。得标准曲线如图3所示。图3 脲酶标准曲线Fig. 3 The standard curve of urease2.2.2.3 脱氢酶活性测定方法 取20g土壤置于50 ml 三角瓶中，加0.2g CaCO3，摇匀后加2ml 1% 三苯基四唑化合物，在加水至最大持水量的90%，在恒温培养箱中（30℃，相对湿度70%）培养24h。培养结束后，加25ml甲醇，振荡5min，快速过滤，再用甲醇多次洗涤漏斗上的土壤，直至获得无色滤液，合并滤液和洗涤液并定容至100ml容量瓶中，在分光光度计上于480nm处比色。脱氢酶活性以20g土壤中H+ 的微升数表示。·标准曲线绘制吸取10ml分别含有20，50，100，200，300μg的三苯基四唑氯化物溶液，加10mg NaHSO3和保险粉还原，显色后子分光光度计上460nm处比色测定并绘制标准曲线。得标准曲线如图四所示。图4 脱氢酶标准曲线Fig. 4 The standard curve of dehydrogenase3. 结果与讨论3.1 土壤类型对酶活性的影响3.1.1 土壤类型对脲酶活性的影响脲酶在不同土壤类型中的活性见表1，结果显示在不同土壤类型中，环氟菌胺对脲酶的活性整体均表现为抑制作用，并且在7 d时达到最大，抑制作用先增强再减弱，最后趋于稳定，由此可见，土壤类型对脲酶活性的影响作用不大。表1 不同土壤类型中脲酶的活性Table 1 Urease activity of soil with different soils土壤类型天数（d）03714213045江西红壤5.252.310.260.880.921.101.13南京黄棕壤8.263.210.861.441.881.211.53东北黑土8.296.430.731.231.501.561.483.1.2土壤类型对蔗糖酶活性的影响蔗糖酶在不同土壤类型中的活性见表2，结果显示在南京黄棕壤和东北黑土中，环氟菌胺对蔗糖酶活性影响效应相同，呈现反复抑制-激活-抑制-激活的趋势，且蔗糖酶的最大活性均出现在21天，南京黄棕壤和东北黑土分别达到28.43和19.92 mg·g-1；而在江西红壤中，环氟菌胺对蔗糖酶的活性表现相反，呈现出先激活后抑制的反复趋势，蔗糖酶的最大活性出现在第7d。由此可知，环氟菌胺在不同土壤类型中对脲酶活性的影响有差异的，可能主要受土壤有机质含量的影响。表2 不同土壤类型中蔗糖酶的活性Table 2 Sucrase activity of soil with different soils土壤类型天数（d）03714213045江西红壤2.7810.2019.228.3010.213.223.24南京黄棕壤10.018.4514.5511.3228.4311.309.80东北黑土11.079.2113.887.3019.9211.438.733.1.3土壤类型对脱氢酶活性的影响脱氢酶在不同土壤类型中的活性见表4，结果显示在不同土壤类型中，环氟菌胺对脱氢酶的活性整体均表现为促进作用，除南京黄棕壤在3d时出现脱氢酶活性下降外，其余土壤中脱氢酶活性均出现且随着时间的增加而稳定增加的现象，促进作用是先增强再减弱。 表3 不同土壤类型中脱氢酶的活性Table 3 Dehydrogenase activity of soil with different soils土壤类型天数（d）03714213045江西红壤16.3618.4421.5633.3337.5641.1042.50南京黄棕壤18.7618.3327.9636.4046.9655.6162.13东北黑土20.9623.4529.5641.2250.3657.8969.743.2不同初始浓度对酶活性的影响3.2.1 不同初始浓度对土壤脲酶的影响环氟菌胺不同初始浓度对土壤脲酶活性影响结果见图5。浓度为5 mg·kg-1、10 mg·kg-1、50 mg·kg-1时整体表现出抑制作用，0~7 d的抑制作用最强，7 d~21 d的抑制作用减弱，21 d~30 d抑制作用继续增强，最后30 d~45 d抑制作用趋于稳定，7d 时脲酶活性最低；浓度为100 mg·kg-1时，0~3 d表现为短期激活，3 d~7d大幅度被抑制，随后抑制作用减缓，接着也趋于稳定。总的来说，环氟菌胺对土壤中的脲酶活性起抑制作用，且各个浓度在第7 d时脲酶活性最低，最后抑制强度减缓并趋于稳定。图5 不同浓度环氟菌胺对土壤脲酶活性的影响Fig.5 Effect of different concentrations of cyflufenamid on urease activity3.2.2 不同初始浓度对土壤蔗糖酶的影响如图六所示。浓度为5 mg·kg-1时，0 d~3 d先是抑制作用，3 d~7 d抑制作用减弱，7 d~14 d抑制作用加强，14 d~21d蔗糖酶被激活，表现为促进作用，21 d~30 d 促进作用减弱，30 d~45 d 蔗糖酶的活性趋于稳定；浓度为10 mg·kg-1时，0 d~3 d被激活，接下来又被抑制，14 d~21d蔗糖酶活性继续激活，幅度最大，21 d~30 d 激活作用减弱，30 d~45 d 蔗糖酶的活性趋于稳定，21 d 时活性最强；浓度为50 mg·kg-1、100 mg·kg-1时，蔗糖酶的活性表现为反复激活后，最终趋于稳定。0 d~3 d 激活作用增强，3 d~7 d 激活作用减弱，7 d~14 d激活作用又被增强，14 d~21d激活作用又被减弱，21 d~45 d稍有下降，又基本稳定，3 d时活性最强。图6 不同浓度环氟菌胺对土壤蔗糖活性的影响Fig.6 Effect of different concentrations of cyflufenamid on sucrase activity3.2.3 不同初始浓度对土壤脱氢酶的影响如图7所示。浓度为5 mg·kg-1、10 mg·kg-1、50 mg·kg-1、100mg·kg-1时，环氟菌胺对土壤脱氢酶的活性均表现为促进作用，且0 d~7 d 时激活作用缓慢，7 d~21d 时激活作用大幅度提升，21 d~45 d时激活作用缓慢。随着浓度的增加，激活幅度也再增加，50 mg·kg-1、100mg·kg-1相比于5 mg·kg-1、10 mg·kg-1、50 mg·kg-1，增幅有所下降。图7 不同浓度环氟菌胺对土壤脱氢酶活性的影响Fig.7 Effect of different concentrations of cyflufenamid on dehydrogenase activity致谢最后，我还要向在学习和生活上给予我支持、理解和关怀的家人表示衷心的感谢，同时也向百忙中评阅和评议本论文的专家们表示诚挚的谢意。4结论本试验采用经典比色法，在同等环氟菌胺浓度,不同类型土壤的条件下，检测了环氟菌胺对土壤酶的影响，在土壤类型对土壤酶的影响实验中，脲酶和脱氢酶的活性变化趋势相同，分别呈现出抑制和促进作用，脲酶活性在7d时最低，后随时间的增加抑制作用逐渐降低；环氟菌胺对脱氢酶活性的促进作用明显；对于蔗糖酶，不同土壤表现出不一样的酶活性变化趋势，江西红壤中的蔗糖酶出现激活-抑制-激活-抑制的反复趋势，并在d7达到最大值19.22 μg·ml-1，造成这种现象出现的原因可能与土壤中的有机质有关。在环氟菌胺浓度对土壤酶的实验中发现，环氟菌胺对脲酶活性整体表现出抑制作用，0~7 d的抑制作用最强，7 d~21 d的抑制作用减弱，在浓度为100 mg·kg-1时，出现短期激活，随后大幅抑制作用，且抑制作用随时间的增加逐渐减缓，并趋于稳定。环氟菌胺对蔗糖酶的作用比较复杂，低浓度时蔗糖酶活性先激活随后受到抑制，高浓度时酶活性出现相反的抑制-激活-抑制-激活的重复趋势。环氟菌高浓度时激活脱氢酶活性，激活作用随浓度的增加而增强，7d~14d时激活作用最明显，后期逐渐平稳。参考文献[1] Tomlin C D S. 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