恩诺沙星在鱼体内的药代动力学
恩诺沙星在鱼体内的药代动力学[20200510204422]
摘要：在水温24-26℃条件下，采用高效液相色谱法（HPLC）,给健康乌鳢静注和口服恩诺沙星后,间隔不同时间对试验动物进行采血，将测得的血药浓度与各取样时间点一一对应，绘制药物浓度－时间曲线，并进行分析，得出相关的药动学参数，研究出恩诺沙星在鱼体内的药代动力学规律，推算得休药期和给药方案。实验结果表明，恩诺沙星经静脉注射，血药浓度逐渐减小，且消除速度逐渐下降；口灌给药后，血药浓度先升高后下降，但消除速度也是逐渐下降的。5d后的血药浓度均在0.65μg/mL。对照恩诺沙星对若干细菌的MIC，发现恩诺沙星可用于乌鳢疾病的防治。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3_5_1_9_1_6_0_7_2
关键字:乌鳢；恩诺沙星；药代动力学
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1材料与方法2
1.1试验动物2
1.2药品与试剂 2
1.3给药方式及采样2
1.3. 1静脉注射2
1.3. 2口灌给药2
1.3. 3样品采集2
1.4样品前处理2
1.5分析方法2
1.6标准曲线、回收率3
2结果与分析3
2.1恩诺沙星在乌鳢体内的脱乙基代谢 3
2.2恩诺沙星在乌鳢体内的药代动力学规律 3
3讨论5
3.1两种给药方式下恩诺沙星在乌鳢体内的药代动力学总体规律 5
3.2关于休药期 5
3.3单次给药的用药浓度 5
3.4给药建议 6
致谢6
参考文献6
图14
图25
表13
表24
恩诺沙星在鱼体内的药代动力学
引言
引言 恩诺沙星(Enrofloxacin)又名乙基环丙氟呱酸、乙基环丙沙星。与前几代喹诺酮类药物以及其他抗菌药相比, 具有抗菌谱广、抗菌力强、作用迅速、体内分布广泛及与其他抗生素之间无交叉耐药性等特点[1]。
乌鳢(Ophiocephalus argus Cantor)俗称乌鱼、黑鱼、火头等,属鲈形目,攀鲈亚目,鳢科,广布于我国南北水域。乌鳢骨刺少,肉味鲜美,具有去瘀生新、生肌补血、滋补调养、利尿祛风、促进伤口愈合等功效[2]。乌鳢作为集食补与药补于一身的名贵鱼类,在我国深受广大消费者的喜爱。近 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3_5_1_9_1_6_0_7_2
年来,随着乌鳢养殖面积的增加、集约化养殖的发展,其病害也逐年增多,尤其是细菌性疾病日趋严重,已成为制约乌鳢养殖业健康可持续发展的重大障碍。目前,有关乌鳢细菌性疾病的治疗多采用投喂抗生素的方法,但此方法易导致乌鳢体内药物残留以及细菌耐药性增加[3]。目前在水产动物病害防治中应用极为广泛。但恩诺沙星代谢缓慢,容易残留于肝、肌肉等动物组织中,长期摄入该药容易引起关节和软骨损伤,大量药物还可能造成消化系统、泌尿系统甚至神经系统的损害。目前恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星的残留已引起广泛关注。我国关于恩诺沙星在水产动物体内的药物代谢动力学研究较少,仅见恩诺沙星在鲤(Cyprinus carpio)、中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)、凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)、中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)等体内的药物代谢动力学报道。
鉴此，本试验应用高效液相色谱法（HPLC）研究恩诺沙星在乌鳢体内的药代动力学规律，为设计最佳合理给药方案提供依据，以期指导生产实践中合理用药。
1 材料与方法
1．1 实验动物
健康乌鳢(Ophiocephalus argus Cantor)，重约190-210g，饲养于玻璃水族箱中，水温控制在24-26℃，盐度低于1‰，持续充气。实验开始前，暂养15d，期间饲喂商品饵料，不添加任何药物。
1．2 药品与试剂
恩诺沙星(Enrofloxacin，EF)标准品，环丙沙星(Cipmfloxacin，CF)标准品，纯度≥99．5％，中国兽药监察所生产。恩诺沙星针剂，四川华蜀动物药业有限公司，批准文号：（2007）220261295。乙腈为色谱级，购自美国Tedia公司，磷酸、正己烷、三乙胺均为化学纯，超纯水自制（美国Milli-Q系统）。
1. 3 给药方式及采样
1.3.1 静脉注射 每尾乌鳢通过尾静脉注射给药，注射量0.2 mL/100 g（体重），给药剂量10mg/kg。给药前，实验鱼用三卡因甲基磺酸盐（MS-222）深度麻醉， 称重，并以湿毛巾包裹，注射使用1ml一次性注射器，先回血定位，注射过程中，若针尖移动，则另换实验鱼重新操作。
1.3.2 口灌给药 使用1ml注射器（去针头）将含有药物的糜状饲料灌入实验鱼前肠，灌入饲料量0.4 g每100g体重，给药剂量10mg/kg。操作前，同样进行麻醉、称重，并以湿毛巾包裹，给药后，将实验鱼放入一个单独的水族箱，观察有无回吐，若有回吐，则另换实验鱼重新灌服。
1.3.3 样品采集 静脉注射后第0.083, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8, 24, 48, 72, 96, 和120h，口灌给药后第1, 2, 4, 8, 12, 24, 48, 72, 96, 和120h，采集血液样本，经离心（1665g，10min）后取血浆，置入-70℃冰箱待检测。
1. 4 样品前处理
组织样本室温下解冻，准确称吸取ml组织，置入10ml离心管，加入5ml乙腈，高速匀浆，静置后离心（3500g, 10min），取上清液，40℃水浴氮气吹干，残渣用1ml流动相溶解，正己烷去脂肪，经0.22µm微孔滤膜过滤待测。
1. 5 分析方法 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3_5_1_9_1_6_0_7_2
检测仪器选用日立高效液相色谱仪，配备四元泵、手动进样器、荧光检测器等，检测波长：激发波长278 nm，发射波长440 nm；色谱柱：Waters SunFire C18反相色谱柱(4.6×250 mm)；流动相：3 ml/L磷酸缓冲盐（三乙胺调pH至3.0）与乙腈体积比为84:16，进样量10µL，流速1mL/min。
1. 6 标准曲线、回收率
准确称取0.01g 沙拉沙星标准品溶于100 mL0.03M氢氧化钠溶液中，配成100µg/mL的母液，再依次用流动相稀释成20，10，5，1，0.5，0.2，0.1，0.05，0.02，0.01µg/mL的标准溶液，于冰箱中4℃保存。
将配制的标准品溶液分别加入空白组织（血液）中，使组织药物浓度分别为20，10，5，1，0.5，0.2，0.1，0.05，0.02，0.01µg/mL的按样品处理方法处理后进行HPLC测定，以浓度为纵坐标，峰面积为横坐标做标准曲线，分别求出回归方程和相关系数。
往空白组织中（血液）按5个浓度梯度（0.05，0.1，1，10，50µg/mL）加入标准液，然后按样品处理方法处理，并测定。按照公式进行计算：回收率（%）=（测定值/标准液样品浓度）×100%。
2 结果与分析
2．1 恩诺沙星在乌鳢体内的脱乙基代谢
乌鳢在静注和口服恩诺沙星后，各组在血浆中并未检测出其代谢物环丙沙星。
2．2 恩诺沙星在乌鳢体内的药物代谢动力学规律
26℃左右的温度条件下，组1静脉注射给药，以10mg/kg（药物/体重）的剂量，将药物通过注射器经尾静脉注入鱼体内；组2口服给药，以10mg/kg的剂量，将药物通过注射器和乳胶管经食道注入鱼消化道内。在所设定的12个和10个采样点采集鱼血液样品，经处理后，HPLC分别测定恩诺沙星的药物浓度，结果如表1和表2
24.36±0.86
43.55±0.92
82.03±0.63
摘要：在水温24-26℃条件下，采用高效液相色谱法（HPLC）,给健康乌鳢静注和口服恩诺沙星后,间隔不同时间对试验动物进行采血，将测得的血药浓度与各取样时间点一一对应，绘制药物浓度－时间曲线，并进行分析，得出相关的药动学参数，研究出恩诺沙星在鱼体内的药代动力学规律，推算得休药期和给药方案。实验结果表明，恩诺沙星经静脉注射，血药浓度逐渐减小，且消除速度逐渐下降；口灌给药后，血药浓度先升高后下降，但消除速度也是逐渐下降的。5d后的血药浓度均在0.65μg/mL。对照恩诺沙星对若干细菌的MIC，发现恩诺沙星可用于乌鳢疾病的防治。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3_5_1_9_1_6_0_7_2
关键字:乌鳢；恩诺沙星；药代动力学
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1材料与方法2
1.1试验动物2
1.2药品与试剂 2
1.3给药方式及采样2
1.3. 1静脉注射2
1.3. 2口灌给药2
1.3. 3样品采集2
1.4样品前处理2
1.5分析方法2
1.6标准曲线、回收率3
2结果与分析3
2.1恩诺沙星在乌鳢体内的脱乙基代谢 3
2.2恩诺沙星在乌鳢体内的药代动力学规律 3
3讨论5
3.1两种给药方式下恩诺沙星在乌鳢体内的药代动力学总体规律 5
3.2关于休药期 5
3.3单次给药的用药浓度 5
3.4给药建议 6
致谢6
参考文献6
图14
图25
表13
表24
恩诺沙星在鱼体内的药代动力学
引言
引言 恩诺沙星(Enrofloxacin)又名乙基环丙氟呱酸、乙基环丙沙星。与前几代喹诺酮类药物以及其他抗菌药相比, 具有抗菌谱广、抗菌力强、作用迅速、体内分布广泛及与其他抗生素之间无交叉耐药性等特点[1]。
乌鳢(Ophiocephalus argus Cantor)俗称乌鱼、黑鱼、火头等,属鲈形目,攀鲈亚目,鳢科,广布于我国南北水域。乌鳢骨刺少,肉味鲜美,具有去瘀生新、生肌补血、滋补调养、利尿祛风、促进伤口愈合等功效[2]。乌鳢作为集食补与药补于一身的名贵鱼类,在我国深受广大消费者的喜爱。近 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3_5_1_9_1_6_0_7_2
年来,随着乌鳢养殖面积的增加、集约化养殖的发展,其病害也逐年增多,尤其是细菌性疾病日趋严重,已成为制约乌鳢养殖业健康可持续发展的重大障碍。目前,有关乌鳢细菌性疾病的治疗多采用投喂抗生素的方法,但此方法易导致乌鳢体内药物残留以及细菌耐药性增加[3]。目前在水产动物病害防治中应用极为广泛。但恩诺沙星代谢缓慢,容易残留于肝、肌肉等动物组织中,长期摄入该药容易引起关节和软骨损伤,大量药物还可能造成消化系统、泌尿系统甚至神经系统的损害。目前恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星的残留已引起广泛关注。我国关于恩诺沙星在水产动物体内的药物代谢动力学研究较少,仅见恩诺沙星在鲤(Cyprinus carpio)、中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)、凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)、中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)等体内的药物代谢动力学报道。
鉴此，本试验应用高效液相色谱法（HPLC）研究恩诺沙星在乌鳢体内的药代动力学规律，为设计最佳合理给药方案提供依据，以期指导生产实践中合理用药。
1 材料与方法
1．1 实验动物
健康乌鳢(Ophiocephalus argus Cantor)，重约190-210g，饲养于玻璃水族箱中，水温控制在24-26℃，盐度低于1‰，持续充气。实验开始前，暂养15d，期间饲喂商品饵料，不添加任何药物。
1．2 药品与试剂
恩诺沙星(Enrofloxacin，EF)标准品，环丙沙星(Cipmfloxacin，CF)标准品，纯度≥99．5％，中国兽药监察所生产。恩诺沙星针剂，四川华蜀动物药业有限公司，批准文号：（2007）220261295。乙腈为色谱级，购自美国Tedia公司，磷酸、正己烷、三乙胺均为化学纯，超纯水自制（美国Milli-Q系统）。
1. 3 给药方式及采样
1.3.1 静脉注射 每尾乌鳢通过尾静脉注射给药，注射量0.2 mL/100 g（体重），给药剂量10mg/kg。给药前，实验鱼用三卡因甲基磺酸盐（MS-222）深度麻醉， 称重，并以湿毛巾包裹，注射使用1ml一次性注射器，先回血定位，注射过程中，若针尖移动，则另换实验鱼重新操作。
1.3.2 口灌给药 使用1ml注射器（去针头）将含有药物的糜状饲料灌入实验鱼前肠，灌入饲料量0.4 g每100g体重，给药剂量10mg/kg。操作前，同样进行麻醉、称重，并以湿毛巾包裹，给药后，将实验鱼放入一个单独的水族箱，观察有无回吐，若有回吐，则另换实验鱼重新灌服。
1.3.3 样品采集 静脉注射后第0.083, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 8, 24, 48, 72, 96, 和120h，口灌给药后第1, 2, 4, 8, 12, 24, 48, 72, 96, 和120h，采集血液样本，经离心（1665g，10min）后取血浆，置入-70℃冰箱待检测。
1. 4 样品前处理
组织样本室温下解冻，准确称吸取ml组织，置入10ml离心管，加入5ml乙腈，高速匀浆，静置后离心（3500g, 10min），取上清液，40℃水浴氮气吹干，残渣用1ml流动相溶解，正己烷去脂肪，经0.22µm微孔滤膜过滤待测。
1. 5 分析方法 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: 3_5_1_9_1_6_0_7_2
检测仪器选用日立高效液相色谱仪，配备四元泵、手动进样器、荧光检测器等，检测波长：激发波长278 nm，发射波长440 nm；色谱柱：Waters SunFire C18反相色谱柱(4.6×250 mm)；流动相：3 ml/L磷酸缓冲盐（三乙胺调pH至3.0）与乙腈体积比为84:16，进样量10µL，流速1mL/min。
1. 6 标准曲线、回收率
准确称取0.01g 沙拉沙星标准品溶于100 mL0.03M氢氧化钠溶液中，配成100µg/mL的母液，再依次用流动相稀释成20，10，5，1，0.5，0.2，0.1，0.05，0.02，0.01µg/mL的标准溶液，于冰箱中4℃保存。
将配制的标准品溶液分别加入空白组织（血液）中，使组织药物浓度分别为20，10，5，1，0.5，0.2，0.1，0.05，0.02，0.01µg/mL的按样品处理方法处理后进行HPLC测定，以浓度为纵坐标，峰面积为横坐标做标准曲线，分别求出回归方程和相关系数。
往空白组织中（血液）按5个浓度梯度（0.05，0.1，1，10，50µg/mL）加入标准液，然后按样品处理方法处理，并测定。按照公式进行计算：回收率（%）=（测定值/标准液样品浓度）×100%。
2 结果与分析
2．1 恩诺沙星在乌鳢体内的脱乙基代谢
乌鳢在静注和口服恩诺沙星后，各组在血浆中并未检测出其代谢物环丙沙星。
2．2 恩诺沙星在乌鳢体内的药物代谢动力学规律
26℃左右的温度条件下，组1静脉注射给药，以10mg/kg（药物/体重）的剂量，将药物通过注射器经尾静脉注入鱼体内；组2口服给药，以10mg/kg的剂量，将药物通过注射器和乳胶管经食道注入鱼消化道内。在所设定的12个和10个采样点采集鱼血液样品，经处理后，HPLC分别测定恩诺沙星的药物浓度，结果如表1和表2
24.36±0.86
43.55±0.92
82.03±0.63
版权保护: 本文由 hbsrm.com编辑，转载请保留链接: www.hbsrm.com/yxlw/dwyx/1041.html
