弓形虫微线体分泌蛋白10基因的克隆与表达
弓形虫微线体分泌蛋白10基因的克隆与表达[20200507190926]
摘要：通过对弓形虫JS株微线体分泌蛋白TgMICl0编码基因进行克隆与表达，为检测弓形虫感染方法的建立做准备。提取弓形虫速殖子总 RNA, 设计并合成引物, RT-PCR 扩增 TgMIC10 编码基因, 与克隆载体pMD19-T 连接, 经酶切和 PCR 鉴定及 DNA 测序证实后,连接表达载体pET-28a, IPTG 诱导表达pET-28a-TgMIC10 阳性重组子转化宿主菌 E. coli BL21。结果显示为 PCR扩增出了一597bp 左右的 DNA 片断, 将重组质粒pMD19-T-TgMIC10、pET-28a-TgMIC10 分别作EcoR I 和HindⅢ双酶切, 均能得到一个大小与 PCR 扩增产物一致的插入片断, 表明 Tg-MIC10基因的克隆和亚克隆均获成功, 用 IPTG 诱导带有重组质粒pET-28a-TgMIC10的大肠杆菌, 产物行 SDS -PAGE, 可得到一约 21kDa 融合蛋白。
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关键字:弓形虫；微线体分泌蛋白；TgMIC10；克隆；表达
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1 材料与方法2
1.1 材料 3
1.2 方法 4
1.2.1 小鼠弓形虫感染传代及弓形虫速殖子的收集4
1.2.2 总RNA提取4
1.2.3 引物设计和RT-PCR扩增TgMIC10目的基因3
1.2.4 PCR扩增产物的胶回收4
1.2.5 E.coli DH5α感受态细胞的制备4
1.2.6 外源片段和T载体的连接、转化4
1.2.7 目的基因质粒的提取4
1.2.8 酶切鉴定重组质粒4
1.2.9 重组表达载体的构建4
2 结果与分析 6
2.1 TgMIC10基因的PCR扩增结果6
2.2 pMD19-T- TgMIC10重组质粒的酶切鉴定 7
2.3 pET-TgMIC10重组质粒的酶切鉴定7
2.4 重组蛋白表达 7
3 讨论7 3.1 本实验的研究意义7 3.2 本实验的优化条件8
致谢8
参考文献9
弓形虫微线体分泌蛋白10基因的克隆与表达
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摘要：通过对弓形虫JS株微线体分泌蛋白TgMICl0编码基因进行克隆与表达，为检测弓形虫感染方法的建立做准备。提取弓形虫速殖子总 RNA, 设计并合成引物, RT-PCR 扩增 TgMIC10 编码基因, 与克隆载体pMD19-T 连接, 经酶切和 PCR 鉴定及 DNA 测序证实后,连接表达载体pET-28a, IPTG 诱导表达pET-28a-TgMIC10 阳性重组子转化宿主菌 E. coli BL21。结果显示为 PCR扩增出了一597bp 左右的 DNA 片断, 将重组质粒pMD19-T-TgMIC10、pET-28a-TgMIC10 分别作EcoR I 和HindⅢ双酶切, 均能得到一个大小与 PCR 扩增产物一致的插入片断, 表明 Tg-MIC10基因的克隆和亚克隆均获成功, 用 IPTG 诱导带有重组质粒pET-28a-TgMIC10的大肠杆菌, 产物行 SDS -PAGE, 可得到一约 21kDa 融合蛋白。
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引言（或绪论）1
1 材料与方法2
1.1 材料 3
1.2 方法 4
1.2.1 小鼠弓形虫感染传代及弓形虫速殖子的收集4
1.2.2 总RNA提取4
1.2.3 引物设计和RT-PCR扩增TgMIC10目的基因3
1.2.4 PCR扩增产物的胶回收4
1.2.5 E.coli DH5α感受态细胞的制备4
1.2.6 外源片段和T载体的连接、转化4
1.2.7 目的基因质粒的提取4
1.2.8 酶切鉴定重组质粒4
1.2.9 重组表达载体的构建4
2 结果与分析 6
2.1 TgMIC10基因的PCR扩增结果6
2.2 pMD19-T- TgMIC10重组质粒的酶切鉴定 7
2.3 pET-TgMIC10重组质粒的酶切鉴定7
2.4 重组蛋白表达 7
3 讨论7 3.1 本实验的研究意义7 3.2 本实验的优化条件8
致谢8
参考文献9
弓形虫微线体分泌蛋白10基因的克隆与表达
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