石榴籽不同提取物的体外抗菌活试验研究
石榴籽不同提取物的体外抗菌活试验研究[20200507191444]
摘要：研究石榴籽不同提取物的体外抗菌活性。本研究以石榴籽为试验材料，以抑菌圈直径为活性追踪指标，用药敏纸片法（Bauer Kirby）对石榴籽挥发油、醇提物、水提物及其醇后水提物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌等细菌的抑菌效果进行研究。结果表明—当药物浓度为100mg/mL 时，大肠杆菌对该药中度敏感，其抑菌圈直径分别为10-15mm；当石榴籽挥发油浓度为25mg/mL 时，大肠杆菌和链球菌对该药中度敏感，其抑菌圈直径分别为10-15mm。研究—说明这几种提取物表现出不同的抑菌能力，对上述菌种有不同的抑菌能力。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
关键字:石榴籽；提取物；体外抗菌活性
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1 材料与方法2
1.1 材料 2
1.1.1试验菌种2
1.1.2药物和各种中药试剂 2
1.1.3主要仪器 2
1.2方法2
1.2.1石榴籽提取液的制备2
1.2.2培养基的制备2
1.2.3接种细菌2
1．2．4药敏片准备3
1.2.5抗菌药纸片的制作 3
1.2.6贴药纸片 3
1.2.7结果判定表准3
2结果与分析 3
3.讨论 4
致谢4
参考文献5
石榴籽提取物的体外抗菌活性试验研究
引言
石榴是石榴科(Punicaceae) 石榴属 (Punica L.) 植物，又名若榴、丹若，维吾尔语为“阿那尔”，原产伊朗、阿富汗及印度西北部地区，是一种古老的果树。石榴果实具有很高的食用和药用价值：研究发现石榴具有抗氧化、抗癌、抗病毒和降血脂等多种生理活性功能。
石榴加工的副产品石榴皮、籽、渣利用率极低，石榴籽大多都被作为废物丢弃或焚烧，导致宝贵的可再生利用资源被大量的浪费。石榴籽不仅是历代药典中的重要成分，也是维药中的重要药材之一；传统的中医认为，石榴籽性温涩，味甘酸，五毒，润燥兼收敛之效，有生津化食，健脾益胃，降压止泻，驱除肠道寄生虫等保健疗效作用。现有药理研究显示石榴籽可改善关节弹力，皮肤弹性，抗癌、抗突变、抗菌作用。另据以色列最新研究发现，石榴及其产品中含有抗衰老、预防心脏病及减缓癌变进程 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
高浓度的抗氧化剂。维医认为该药有祛风散寒、暖胃健脾、利水逐水、散结水肿等功效，可治疗胃寒呃逆、食欲不振、腹泻腹胀、胃腹胀痛、淋病、小便不利、血凝经闭、睾丸肿胀、疝气等疾病。
鉴于石榴具有十分重要的研究价值，因此筛选出具有靶向抗菌作用的药用成分将有助于新兽药研究的趋势。目前，对石榴籽的生物活性研究主要集中在抗氧化活性方面，对其抑菌活性方面的研究较少，从石榴籽提取物抑菌活性的研究更鲜有报道。本研究通过利用石榴加工中的副产物——石榴籽为实验材料研究其不同提取成分对三种常见致病菌的抑菌效果，为进一步研究和开发新疆维吾尔药石榴籽提供参考数据和理论依据。
1 材料和方法
1．1 材料
1．1．1 试验菌种
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠杆菌（Salmonella antiserum）、链球菌（Streptococcus）由新疆农业大学动物医学院微生物学实验室提供。
1．1．2药物和各种重要试剂
95%乙醇、灭菌生理盐水、MH肉汤培养基、THB培养基、营养琼脂培养基，试验药物石榴籽购于新疆，经实验室洗净晒干处理，由新疆大学植物学教研室鉴定为石榴籽。
1．1．3主要仪器
主要试验仪器见表 1
表1主要试验仪器
名称 型号 厂家
小型粉碎机 ZN-08 北京兴时利和科技发展有限公司
旋转蒸发器水浴槽 RE- 52A
上海青浦泸西仪器厂 循环水式多用真空泵 SHB-Ⅲ
郑州长城科工贸有限公司 电热恒温鼓风干燥箱 DHG-9140A
上海-恒科技有限公司台式离心机 TDL-5 上海安亭科学仪器厂
生物净洁工作台 BSN-1307 上海半球仪器厂
高压蒸汽灭菌锅 ES-315 基因有限公司
智能生物培养箱 ZPS-250 黑龙江东扩仪器制造厂
1．2 方法
1．2．1 石榴籽提取液的制备
石榴籽挥发油制备 取当年产的石榴，晒干，取出石榴籽，洗净，晒干两三天。取晒干的石榴籽100g，置圆底烧瓶中，用600mL 蒸馏水浸泡24h，按1998年版的中药制剂学提取挥发油的方法，通过水蒸气蒸馏，得油率为4.3%。所得挥发油白色透明，有强烈气味儿，取4mL 于小瓶中0-4℃ 冷藏待用。
石榴籽醇提液制备 取200g 石榴籽粉，加入3倍量的乙醇，在75-80℃ 的条件下回流提取3h，反复3次提取后合并提取物，回收乙醇，用旋转蒸发仪浓缩提取物，制得浸膏。
石榴籽水提液制备 取200g石榴籽粉，加入3倍量的蒸馏水，在75-80℃ 的条件下回流提取3h，反复3次提取后合并提取物，用旋转蒸发仪浓缩提取物，制得浸膏。
石榴籽醇后水提液制备 将乙醇回流后的提取物（药渣）经水煎煮合并；煎煮液浓缩，制得水提浸膏。
1．2．2 培养基的制备
MH 肉汤培养基的制备 称取青岛日水生物技术有限公司生产的MH 肉汤培养基粉4.2g，加入200ml蒸馏水加热溶解，121℃ 高压灭菌15min，备用。
THB 培养基的制备 称取胰蛋白胨4g、牛肉粉2g、 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
葡萄糖0.4g、氯化钠0.4g、磷酸氢二钠十二水、0.08g、碳酸氢钠0.4g 加400mL 蒸馏水加热溶解，分装至200Ml 的三角瓶，其中一个加4g 琼脂加热溶解，做固体培养基，121℃ 高压灭菌15min，备用。
营养琼脂培养基：称取蛋白胨4g、牛肉膏粉1.2g、氯化钠2g、琼脂7g加400mL蒸馏水加热溶解，分装至200mL的三角瓶，121℃ 高压灭菌15min，备用。
1．2．3 接种细菌
取大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌纯培养液，用划线法分别涂布到营养琼脂固体培养基、THB固体培养基和MH固体培养基表面。具体方法为：用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。
1．2．4药敏片的准备
取一号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。取小圆纸片200片放入净洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层报纸包扎。经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃ 温箱中数天，使完全干燥。
1．2．5抗菌药制片的制作
在上述含有200片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25mL，并翻动纸片，各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能讲纸片捣烂。同时在瓶口上记录药物名称，放37℃ 温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6月。
１．２．６药敏片法贴药纸片
本科生毕业论文（设计）成绩评定表
论文题目 石榴籽不同提取物的体外抗菌活性实验研究
一、对待毕业实习的态度及实习期间遵守纪律情况
优良（15—11分） 一般（10—6分） 较差（5—0）
本科生毕业论文（设计）成绩评阅表
论文题目 石榴籽不同提取物的体外抗菌活性实验研究
摘要：研究石榴籽不同提取物的体外抗菌活性。本研究以石榴籽为试验材料，以抑菌圈直径为活性追踪指标，用药敏纸片法（Bauer Kirby）对石榴籽挥发油、醇提物、水提物及其醇后水提物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、链球菌等细菌的抑菌效果进行研究。结果表明—当药物浓度为100mg/mL 时，大肠杆菌对该药中度敏感，其抑菌圈直径分别为10-15mm；当石榴籽挥发油浓度为25mg/mL 时，大肠杆菌和链球菌对该药中度敏感，其抑菌圈直径分别为10-15mm。研究—说明这几种提取物表现出不同的抑菌能力，对上述菌种有不同的抑菌能力。
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关键字:石榴籽；提取物；体外抗菌活性
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1 材料与方法2
1.1 材料 2
1.1.1试验菌种2
1.1.2药物和各种中药试剂 2
1.1.3主要仪器 2
1.2方法2
1.2.1石榴籽提取液的制备2
1.2.2培养基的制备2
1.2.3接种细菌2
1．2．4药敏片准备3
1.2.5抗菌药纸片的制作 3
1.2.6贴药纸片 3
1.2.7结果判定表准3
2结果与分析 3
3.讨论 4
致谢4
参考文献5
石榴籽提取物的体外抗菌活性试验研究
引言
石榴是石榴科(Punicaceae) 石榴属 (Punica L.) 植物，又名若榴、丹若，维吾尔语为“阿那尔”，原产伊朗、阿富汗及印度西北部地区，是一种古老的果树。石榴果实具有很高的食用和药用价值：研究发现石榴具有抗氧化、抗癌、抗病毒和降血脂等多种生理活性功能。
石榴加工的副产品石榴皮、籽、渣利用率极低，石榴籽大多都被作为废物丢弃或焚烧，导致宝贵的可再生利用资源被大量的浪费。石榴籽不仅是历代药典中的重要成分，也是维药中的重要药材之一；传统的中医认为，石榴籽性温涩，味甘酸，五毒，润燥兼收敛之效，有生津化食，健脾益胃，降压止泻，驱除肠道寄生虫等保健疗效作用。现有药理研究显示石榴籽可改善关节弹力，皮肤弹性，抗癌、抗突变、抗菌作用。另据以色列最新研究发现，石榴及其产品中含有抗衰老、预防心脏病及减缓癌变进程 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
高浓度的抗氧化剂。维医认为该药有祛风散寒、暖胃健脾、利水逐水、散结水肿等功效，可治疗胃寒呃逆、食欲不振、腹泻腹胀、胃腹胀痛、淋病、小便不利、血凝经闭、睾丸肿胀、疝气等疾病。
鉴于石榴具有十分重要的研究价值，因此筛选出具有靶向抗菌作用的药用成分将有助于新兽药研究的趋势。目前，对石榴籽的生物活性研究主要集中在抗氧化活性方面，对其抑菌活性方面的研究较少，从石榴籽提取物抑菌活性的研究更鲜有报道。本研究通过利用石榴加工中的副产物——石榴籽为实验材料研究其不同提取成分对三种常见致病菌的抑菌效果，为进一步研究和开发新疆维吾尔药石榴籽提供参考数据和理论依据。
1 材料和方法
1．1 材料
1．1．1 试验菌种
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠杆菌（Salmonella antiserum）、链球菌（Streptococcus）由新疆农业大学动物医学院微生物学实验室提供。
1．1．2药物和各种重要试剂
95%乙醇、灭菌生理盐水、MH肉汤培养基、THB培养基、营养琼脂培养基，试验药物石榴籽购于新疆，经实验室洗净晒干处理，由新疆大学植物学教研室鉴定为石榴籽。
1．1．3主要仪器
主要试验仪器见表 1
表1主要试验仪器
名称 型号 厂家
小型粉碎机 ZN-08 北京兴时利和科技发展有限公司
旋转蒸发器水浴槽 RE- 52A
上海青浦泸西仪器厂 循环水式多用真空泵 SHB-Ⅲ
郑州长城科工贸有限公司 电热恒温鼓风干燥箱 DHG-9140A
上海-恒科技有限公司台式离心机 TDL-5 上海安亭科学仪器厂
生物净洁工作台 BSN-1307 上海半球仪器厂
高压蒸汽灭菌锅 ES-315 基因有限公司
智能生物培养箱 ZPS-250 黑龙江东扩仪器制造厂
1．2 方法
1．2．1 石榴籽提取液的制备
石榴籽挥发油制备 取当年产的石榴，晒干，取出石榴籽，洗净，晒干两三天。取晒干的石榴籽100g，置圆底烧瓶中，用600mL 蒸馏水浸泡24h，按1998年版的中药制剂学提取挥发油的方法，通过水蒸气蒸馏，得油率为4.3%。所得挥发油白色透明，有强烈气味儿，取4mL 于小瓶中0-4℃ 冷藏待用。
石榴籽醇提液制备 取200g 石榴籽粉，加入3倍量的乙醇，在75-80℃ 的条件下回流提取3h，反复3次提取后合并提取物，回收乙醇，用旋转蒸发仪浓缩提取物，制得浸膏。
石榴籽水提液制备 取200g石榴籽粉，加入3倍量的蒸馏水，在75-80℃ 的条件下回流提取3h，反复3次提取后合并提取物，用旋转蒸发仪浓缩提取物，制得浸膏。
石榴籽醇后水提液制备 将乙醇回流后的提取物（药渣）经水煎煮合并；煎煮液浓缩，制得水提浸膏。
1．2．2 培养基的制备
MH 肉汤培养基的制备 称取青岛日水生物技术有限公司生产的MH 肉汤培养基粉4.2g，加入200ml蒸馏水加热溶解，121℃ 高压灭菌15min，备用。
THB 培养基的制备 称取胰蛋白胨4g、牛肉粉2g、 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ^351916072*
葡萄糖0.4g、氯化钠0.4g、磷酸氢二钠十二水、0.08g、碳酸氢钠0.4g 加400mL 蒸馏水加热溶解，分装至200Ml 的三角瓶，其中一个加4g 琼脂加热溶解，做固体培养基，121℃ 高压灭菌15min，备用。
营养琼脂培养基：称取蛋白胨4g、牛肉膏粉1.2g、氯化钠2g、琼脂7g加400mL蒸馏水加热溶解，分装至200mL的三角瓶，121℃ 高压灭菌15min，备用。
1．2．3 接种细菌
取大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌纯培养液，用划线法分别涂布到营养琼脂固体培养基、THB固体培养基和MH固体培养基表面。具体方法为：用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。
1．2．4药敏片的准备
取一号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。取小圆纸片200片放入净洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层报纸包扎。经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃ 温箱中数天，使完全干燥。
1．2．5抗菌药制片的制作
在上述含有200片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25mL，并翻动纸片，各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能讲纸片捣烂。同时在瓶口上记录药物名称，放37℃ 温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6月。
１．２．６药敏片法贴药纸片
本科生毕业论文（设计）成绩评定表
论文题目 石榴籽不同提取物的体外抗菌活性实验研究
一、对待毕业实习的态度及实习期间遵守纪律情况
优良（15—11分） 一般（10—6分） 较差（5—0）
本科生毕业论文（设计）成绩评阅表
论文题目 石榴籽不同提取物的体外抗菌活性实验研究
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