红山动物园环尾狐猴弓形虫病的诊断
为了确定引起南京红山动物园圈养环尾狐猴肺炎、厌食和发热的病原，对发病的环尾狐猴进行弓形虫形态学、病理学诊断和分子学诊断，并对2017年该动物园环尾狐猴进行弓形虫抗体追溯性调查。结果显示，该群环尾狐猴在肝脏触片中发现弓形虫滋养体，病理学诊断显示中度肺炎、严重的肝炎，并在肝脏中发现弓形虫滋养体。PCR检测发现3只环尾狐猴的肝脏组织均为弓形虫基因阳性。对抗原检测为阳性的样本，提取基因组，进行弓形虫PCR扩增。扩增产物进行克隆测序。用软件将测序结果进行比对，对该弓形虫毒株的亲缘性、同源性等生物遗传学信息进行了分析比对。
目录
摘要3关键词3
Abstract3
Key words3
引言（或绪论）3
1材料与方法4
1.1材料 4
1.2方法 4
1.2.1PCR扩增4
1.2.2弓形虫形态学检测4
1.2.3弓形虫抗体检测4
1.2.4病理学诊断4
1.2.4弓形虫序列分析比对4
2结果与分析5
2.1阳性环尾狐猴的临床诊断5
2.2病理学诊断结果5
2.3弓形虫形态学检测结果7
2.4弓形虫抗体检测结果7
2.5PCR扩增结果7
2.6弓形虫序列分析比对结果8
3讨论 8
致谢10
参考文献10
图1 环尾狐猴肠道5
图2 环尾狐猴肝脏5
图3 肝脏病理切片图 100X6
图4 肝脏病理切片图 1000X6
图5 肺脏病理切片图100X6
图6 肺脏病理切片图1000X7
图7 肝脏触片图1000X7
图8 弓形虫PCR电泳图7
红山动物园环尾狐猴弓形虫病的诊断
引言
弓形虫病是由刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)所引起的全世界范围内分布的人兽共患性寄生虫病。弓形虫的寄生细胞除红细胞以外几乎包括了所有有核细胞[1]。人类普遍易感弓形虫，据报道全世界约有１/３的人感染弓形虫[4] *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
。动物或人类一旦在怀孕期被弓形虫感染，将会出现对生产及胎儿带来严重的影响[2]；免疫缺陷患者、艾滋病患者被弓形虫感染，则会产生严重的并发症[3]。动物感染很普遍，但多呈隐形感染[1]。
有资料表明被圈养的环尾狐猴常见疾病有：弓形虫病、球孢子菌病、含铁血黄素沉着症等[510]。环尾狐猴是弓形虫易感动物，首次在环尾狐猴身分离到刚地弓形虫是1962年[7]。一头3岁的环尾狐猴出现呼吸困难、嗜睡、厌食等症状。但是在其死亡前没有进行全面检查。尸检初步结果显示是由于中度肺炎和肝病所致，死因是急性II型弓形虫感染[5]。
2017年8月，南京红山森林动物园有两群笼养的环尾狐猴，A群为3只，B群为4只，分别饲养在两个笼舍内。A群环尾狐猴突然陆续出现精神不振，食欲废绝，体温升高，听诊肺部湿罗音。其中2只在治疗第四天时死亡，另一只在持续治疗一个月后死亡。在2017年9月，B群环尾狐猴有一只也发现精神不振，食欲废绝，体温升高，听诊肺部湿罗音，并治疗2个月后死亡。A群环尾狐猴，发病率和死亡率均为100%(3/3)；B群环尾狐猴，发病率为25%(1/4)，死亡率为100%(1/1)。
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1血清采集
无菌采集红山动物园圈养A群、B群环尾狐猴全血，标记后分离血清，放入20℃冰箱保存。其中A群3份，B群4份。
1.1.2血样采集
分从A群、B群环尾狐猴静脉采集1ml全血，放置抗凝管中，放入20℃冰箱保存。
1.1.3病死动物组织样本采集
对此期间，死亡的环尾狐猴，取心脏、胸肌、肝脏组织各5g，至于20℃冰箱保存。
1.1.4试剂
TIANamp Blood DNA Kit血液基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）购自天根生物有限公司。ID Screen Toxoplasmosis Indirect ELISA Kit试剂盒购自法国IDVET公司。弓形虫PCR检测试剂盒购自世纪元亨生物有限公司。
1.1.5仪器
梯度PCR仪从杭州龙扬仪器公司购进。凝胶成像系统自上海欧翔仪器公司购进。水平电泳仪由北京君意东方有限公司购进。高速冷冻仪离心机由上海沪粤明科学仪器有限公司购进。奥林巴斯CX31显微镜购自南京石城仪器设备公司。
1.2方法
1.2.1PCR扩增
分别用弓形虫PCR检测试剂盒中特异性上下引物对阴阳对照物和7份全血样本的总DNA进行了PCR扩增。在反应体系均为：Mix 12.5μL，上下游引物均为0.5μL，双蒸水6.5μL，DNA模板5μL。反应条件均为：94℃ 5min；94℃ 450s，57℃ 30s，72℃ 1min，35个循环；72℃ 10min。
1.2.2弓形虫形态学检测
取一滴采集的全血样本于载玻片上，进行瑞氏染色后镜检，观察是否有弓形虫。
1.2.3弓形虫抗体检测
由于弓形虫血液涂片阳性率不高，采集的样本，对其进行弓形虫抗原ELISA检测。同时，对血清进行弓形虫IgG抗体监测，判定是否感染过弓形虫或正处于感染期。
1.2.4病理学诊断
取环尾狐猴病变最严重的肝脏、肺脏等病料进行10 % 甲醛溶液固定后，将制作石蜡切片进行H.E染色，在光学显微镜下对各脏器的病理变化进行观察。
1.2.5弓形虫序列分析比对
对抗原检测为阳性的样本，提取基因组，进行弓形虫PCR扩增。扩增产物送至生物公司进行克隆测序。测序结果通过软件比对，分析其弓形虫毒株的亲缘性，同源性等生物遗传学信息。
2 结果与分析
2.1阳性环尾狐猴的临床诊断
目录
摘要3关键词3
Abstract3
Key words3
引言（或绪论）3
1材料与方法4
1.1材料 4
1.2方法 4
1.2.1PCR扩增4
1.2.2弓形虫形态学检测4
1.2.3弓形虫抗体检测4
1.2.4病理学诊断4
1.2.4弓形虫序列分析比对4
2结果与分析5
2.1阳性环尾狐猴的临床诊断5
2.2病理学诊断结果5
2.3弓形虫形态学检测结果7
2.4弓形虫抗体检测结果7
2.5PCR扩增结果7
2.6弓形虫序列分析比对结果8
3讨论 8
致谢10
参考文献10
图1 环尾狐猴肠道5
图2 环尾狐猴肝脏5
图3 肝脏病理切片图 100X6
图4 肝脏病理切片图 1000X6
图5 肺脏病理切片图100X6
图6 肺脏病理切片图1000X7
图7 肝脏触片图1000X7
图8 弓形虫PCR电泳图7
红山动物园环尾狐猴弓形虫病的诊断
引言
弓形虫病是由刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)所引起的全世界范围内分布的人兽共患性寄生虫病。弓形虫的寄生细胞除红细胞以外几乎包括了所有有核细胞[1]。人类普遍易感弓形虫，据报道全世界约有１/３的人感染弓形虫[4] *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
。动物或人类一旦在怀孕期被弓形虫感染，将会出现对生产及胎儿带来严重的影响[2]；免疫缺陷患者、艾滋病患者被弓形虫感染，则会产生严重的并发症[3]。动物感染很普遍，但多呈隐形感染[1]。
有资料表明被圈养的环尾狐猴常见疾病有：弓形虫病、球孢子菌病、含铁血黄素沉着症等[510]。环尾狐猴是弓形虫易感动物，首次在环尾狐猴身分离到刚地弓形虫是1962年[7]。一头3岁的环尾狐猴出现呼吸困难、嗜睡、厌食等症状。但是在其死亡前没有进行全面检查。尸检初步结果显示是由于中度肺炎和肝病所致，死因是急性II型弓形虫感染[5]。
2017年8月，南京红山森林动物园有两群笼养的环尾狐猴，A群为3只，B群为4只，分别饲养在两个笼舍内。A群环尾狐猴突然陆续出现精神不振，食欲废绝，体温升高，听诊肺部湿罗音。其中2只在治疗第四天时死亡，另一只在持续治疗一个月后死亡。在2017年9月，B群环尾狐猴有一只也发现精神不振，食欲废绝，体温升高，听诊肺部湿罗音，并治疗2个月后死亡。A群环尾狐猴，发病率和死亡率均为100%(3/3)；B群环尾狐猴，发病率为25%(1/4)，死亡率为100%(1/1)。
1 材料与方法
1.1材料
1.1.1血清采集
无菌采集红山动物园圈养A群、B群环尾狐猴全血，标记后分离血清，放入20℃冰箱保存。其中A群3份，B群4份。
1.1.2血样采集
分从A群、B群环尾狐猴静脉采集1ml全血，放置抗凝管中，放入20℃冰箱保存。
1.1.3病死动物组织样本采集
对此期间，死亡的环尾狐猴，取心脏、胸肌、肝脏组织各5g，至于20℃冰箱保存。
1.1.4试剂
TIANamp Blood DNA Kit血液基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）购自天根生物有限公司。ID Screen Toxoplasmosis Indirect ELISA Kit试剂盒购自法国IDVET公司。弓形虫PCR检测试剂盒购自世纪元亨生物有限公司。
1.1.5仪器
梯度PCR仪从杭州龙扬仪器公司购进。凝胶成像系统自上海欧翔仪器公司购进。水平电泳仪由北京君意东方有限公司购进。高速冷冻仪离心机由上海沪粤明科学仪器有限公司购进。奥林巴斯CX31显微镜购自南京石城仪器设备公司。
1.2方法
1.2.1PCR扩增
分别用弓形虫PCR检测试剂盒中特异性上下引物对阴阳对照物和7份全血样本的总DNA进行了PCR扩增。在反应体系均为：Mix 12.5μL，上下游引物均为0.5μL，双蒸水6.5μL，DNA模板5μL。反应条件均为：94℃ 5min；94℃ 450s，57℃ 30s，72℃ 1min，35个循环；72℃ 10min。
1.2.2弓形虫形态学检测
取一滴采集的全血样本于载玻片上，进行瑞氏染色后镜检，观察是否有弓形虫。
1.2.3弓形虫抗体检测
由于弓形虫血液涂片阳性率不高，采集的样本，对其进行弓形虫抗原ELISA检测。同时，对血清进行弓形虫IgG抗体监测，判定是否感染过弓形虫或正处于感染期。
1.2.4病理学诊断
取环尾狐猴病变最严重的肝脏、肺脏等病料进行10 % 甲醛溶液固定后，将制作石蜡切片进行H.E染色，在光学显微镜下对各脏器的病理变化进行观察。
1.2.5弓形虫序列分析比对
对抗原检测为阳性的样本，提取基因组，进行弓形虫PCR扩增。扩增产物送至生物公司进行克隆测序。测序结果通过软件比对，分析其弓形虫毒株的亲缘性，同源性等生物遗传学信息。
2 结果与分析
2.1阳性环尾狐猴的临床诊断
版权保护: 本文由 hbsrm.com编辑，转载请保留链接: www.hbsrm.com/yxlw/dwyx/261.html
