某地区禽巴氏杆菌的分离鉴定和某地区禽巴氏杆菌的分离鉴定和耐药性试验(附件)【字数：8160】
3对2016年10月南京地区多个鸡场疑似禽霍乱的病死鸡进行诊断。通过实验室检测手段，将分离所得的7株细菌做染色镜检及生化试验，检测结果初步证实该细菌为多杀性巴氏杆菌。通过分子生物学技术——特异性PCR反应，得到了与Genbank登陆中的禽多杀性巴氏杆菌kmt1基因同源性高达98%的特异性核酸片段，据此确定了该批鸡所感染的病原菌确为多杀性巴氏杆菌，并利用分离纯化所得的细菌进行了药敏试验，选择了敏感药物，通过综合防治手段有效控制了疫病，降低了损失。
目 录
Abstract3
Key words3
引言3
1材料与方法4
1.1病料来源 4
1.2所用试剂 4
1.3 PCR引物的设计与合成4
1.4病菌的分离纯化4
1.5生化试验 4
1.6 PCR检测4
1.7耐药性试验5
2结果与分析5
2.1分离鉴定结果5
2.2生化试验结果5
2.3分子生物学鉴定结果5
2.4药敏试验结果5
2.5后续治疗5
3讨论5
3.1传统实验室检测手段6
3.2分子生物学检测手段6
3.3其他检测手段6
3.4药敏试验结果讨论7
3.5防治手段7
致谢9
参考文献9
图1 革兰氏染色镜检结果5
图2 瑞氏染色镜检结果5
图3 PCR产物凝胶电泳结果6
表1 生化试验结果5
表2 药敏试验结果6
南京地区禽巴氏杆菌的分离鉴定和耐药性试验
动物医学专业学生 倪琰阳
指导教师 苗晋锋
Isolation, Identification and Drug Resistance of Pasteurella multocida in Nanjing
Student majoring in Veterinary Medicine Ni Yanyang
Tutor *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
Miao Jinfeng
Abstract：In this paper, the diagnosis process of a batch of dead chickens suspected of poultry cholera form several farms in Nanjing in October 2016 was described. The experiment has been done by separating the pathogenic bacteria,using these bacteria to do microscopic examination and biochemical tests, then, by observing the experimental results, we doubted that the bacteria can be Pasteurella multocida, and then we used the molecular biology technology specific PCR reaction, finding that the specific nucleic acid fragments we got has 98% of the gene sequence as the Pseudomonas aeruginosa kmt1 gene homology landing in Genbank, which told that pathogens infected by the chickens were identified as Pasteurella multocida, and Drug sensitivity test were done to determine the sensitive drugs, using which the disease has been controlled.
Key words: Pasteurella multocida；Bacterial isolation；PCR；Drug susceptibility test
多杀性巴氏杆菌（Pasteurel multocida,Pm）是一种人畜共患病病原菌，属巴氏杆菌科巴氏杆菌属，是该属最重要的畜禽治病菌，可以引起多种畜禽传染病，如猪类的猪肺疫（swine plague）、猪传染性萎缩性鼻炎（swine infectious atrophic rhinitis），牛类的牛出血性败血症（haemorrhagica bovum septicemia）等疾病，该菌同时对人也有致病性，但病例少见，多为动物咬伤或抓伤导致，以伤口出血为主要症状。感染禽类时主要导致禽类的禽霍乱（fowl cholera），该病主要侵袭禽类的呼吸道和消化道，也可经皮肤、黏膜的伤口感染；发生时往往查不出传染源，在寒冷、潮湿、拥挤、通风不良的环境下易发，发病率和死亡率都较高，对养禽业造成了巨大经济损失。[1]加强饲养管理是防治Pm病的主要手段，饲养管理不当，如饲料突变和环境变化都会增加禽类对该菌的易感性。
2016年10月，南京及周边地区出现了多例鸡急性死亡病例，死亡率较高，周围养殖户损失惨重。少数鸡无明显临诊症状便迅速死亡，剖检也未见明显症状，只见有少数出血点；多数鸡临诊可见食欲不振或废绝，精神沉郁，腹泻，排粪呈黄色稀状，鸡冠和肉髯呈青紫色。对病鸡剖检可见肝质地脆，呈棕色，表面有许多灰白色、针尖大小的坏死点；心包内积有不透明液体；肌胃可见明显出血，肠道有肠炎症状。根据临诊症状与剖检结果，初步怀疑该批病鸡所患病为禽霍乱。据此，为了进一步确定该致病菌是否为多杀性巴氏杆菌，选取了数只病鸡的内脏病料，通过分离纯化培养进行生化反应和形态学观察的实验室手段，以及分子生物学技术检测，确定了该致病菌为禽多杀性巴氏杆菌，并使用分离纯化所得的细菌进行了药敏试验，确定了敏感药，有效控制了该病的进一步传播。
目 录
Abstract3
Key words3
引言3
1材料与方法4
1.1病料来源 4
1.2所用试剂 4
1.3 PCR引物的设计与合成4
1.4病菌的分离纯化4
1.5生化试验 4
1.6 PCR检测4
1.7耐药性试验5
2结果与分析5
2.1分离鉴定结果5
2.2生化试验结果5
2.3分子生物学鉴定结果5
2.4药敏试验结果5
2.5后续治疗5
3讨论5
3.1传统实验室检测手段6
3.2分子生物学检测手段6
3.3其他检测手段6
3.4药敏试验结果讨论7
3.5防治手段7
致谢9
参考文献9
图1 革兰氏染色镜检结果5
图2 瑞氏染色镜检结果5
图3 PCR产物凝胶电泳结果6
表1 生化试验结果5
表2 药敏试验结果6
南京地区禽巴氏杆菌的分离鉴定和耐药性试验
动物医学专业学生 倪琰阳
指导教师 苗晋锋
Isolation, Identification and Drug Resistance of Pasteurella multocida in Nanjing
Student majoring in Veterinary Medicine Ni Yanyang
Tutor *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥351916072￥
Miao Jinfeng
Abstract：In this paper, the diagnosis process of a batch of dead chickens suspected of poultry cholera form several farms in Nanjing in October 2016 was described. The experiment has been done by separating the pathogenic bacteria,using these bacteria to do microscopic examination and biochemical tests, then, by observing the experimental results, we doubted that the bacteria can be Pasteurella multocida, and then we used the molecular biology technology specific PCR reaction, finding that the specific nucleic acid fragments we got has 98% of the gene sequence as the Pseudomonas aeruginosa kmt1 gene homology landing in Genbank, which told that pathogens infected by the chickens were identified as Pasteurella multocida, and Drug sensitivity test were done to determine the sensitive drugs, using which the disease has been controlled.
Key words: Pasteurella multocida；Bacterial isolation；PCR；Drug susceptibility test
多杀性巴氏杆菌（Pasteurel multocida,Pm）是一种人畜共患病病原菌，属巴氏杆菌科巴氏杆菌属，是该属最重要的畜禽治病菌，可以引起多种畜禽传染病，如猪类的猪肺疫（swine plague）、猪传染性萎缩性鼻炎（swine infectious atrophic rhinitis），牛类的牛出血性败血症（haemorrhagica bovum septicemia）等疾病，该菌同时对人也有致病性，但病例少见，多为动物咬伤或抓伤导致，以伤口出血为主要症状。感染禽类时主要导致禽类的禽霍乱（fowl cholera），该病主要侵袭禽类的呼吸道和消化道，也可经皮肤、黏膜的伤口感染；发生时往往查不出传染源，在寒冷、潮湿、拥挤、通风不良的环境下易发，发病率和死亡率都较高，对养禽业造成了巨大经济损失。[1]加强饲养管理是防治Pm病的主要手段，饲养管理不当，如饲料突变和环境变化都会增加禽类对该菌的易感性。
2016年10月，南京及周边地区出现了多例鸡急性死亡病例，死亡率较高，周围养殖户损失惨重。少数鸡无明显临诊症状便迅速死亡，剖检也未见明显症状，只见有少数出血点；多数鸡临诊可见食欲不振或废绝，精神沉郁，腹泻，排粪呈黄色稀状，鸡冠和肉髯呈青紫色。对病鸡剖检可见肝质地脆，呈棕色，表面有许多灰白色、针尖大小的坏死点；心包内积有不透明液体；肌胃可见明显出血，肠道有肠炎症状。根据临诊症状与剖检结果，初步怀疑该批病鸡所患病为禽霍乱。据此，为了进一步确定该致病菌是否为多杀性巴氏杆菌，选取了数只病鸡的内脏病料，通过分离纯化培养进行生化反应和形态学观察的实验室手段，以及分子生物学技术检测，确定了该致病菌为禽多杀性巴氏杆菌，并使用分离纯化所得的细菌进行了药敏试验，确定了敏感药，有效控制了该病的进一步传播。
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