一猪场仔猪肠道大肠杆菌噬菌体的分离鉴定
肠道内噬菌体是组成肠道微生态的一部分，噬菌体的种类和数量也直接影响着肠道内的生理状态和微生物区系。本实验对仔猪肠道内大肠杆菌噬菌体进行分离鉴定，且研究断奶前后仔猪肠道内噬菌体种类分布情况。实验取断奶前断奶后各5窝健康仔猪的粪样作为样品，以113株已分离到的大肠杆菌作指示菌，对大肠杆菌噬菌体分离鉴定，点滴法测定其宿主谱，根据提取到的基因组以及基因组酶切图谱鉴定不同种类噬菌体，最后在电镜下观察噬菌体形态特征。试验结果表明试验分离到的噬菌体全是尾病毒目，且断奶后仔猪肠道内能分离到更多不同的噬菌体。并且，断奶后仔猪肠道内噬菌体宿主谱更宽。结果说明，仔猪断奶前后噬菌体种类会发生变化，为以后的研究噬菌体对细菌的影响奠定了基础。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
引言 1
1. 材料与方法 2
1.1 材料 2
1.1.1 仪器 2
1.1.2 试剂 2
1.1.3 耗材 2
1.2 材料的制备 2
1.2.1 液体LB培养基的制备 2
1.2.2 半固体LB培养基的制备 2
1.2.3 固体LB培养基的制备 2
1.2.4 SM保存液的制备 2
1.2.5 PBS的配制 2
1.2.6 琼脂糖凝胶的配置 2
1.3 试验方法 2
1.3.1 猪场采样及处理 2
1.3.2 大肠杆菌噬菌体的分离与纯化 3
1.3.3 点滴法测定宿主谱 3
1.3.4 噬菌体的保存 3
1.3.5 提取基因组鉴定噬菌体 3
1.3.6 大肠杆菌噬菌体酶切 3
1.3.7 电镜观察形态 3
2. 结果与分析 4
2.1 噬菌体的初步分离 4
2.2 噬菌体的宿主谱测定 4
2.3 噬菌体的酶切图谱分析 5
2.4 电镜观察噬菌体形态 6
3.讨论 7
致谢 8 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: #351916072#
参考文献 8
南京一猪场仔猪肠道大肠杆菌噬菌体的分离鉴定
引言
引言 伴随着人们对微生物的正视，肠道微生物被广泛研究。作为人体中复杂程度最高，种群最丰富的微生物系统，寄生在宿主肠道内的所有微生物被称为肠道微生态[1]。肠道内噬菌体也是肠道微生态的组成部分之一。因其数量多，分布范围广，可感染细菌等特点，噬菌体被认为是地球上最多且增殖能力最强的生物之一[2]。近几年，科研学者们对肠道内噬菌体和微生物菌群之间的关系愈来愈关注。细菌和噬菌体之间存在的“捕食”关系使它们之间存在着动态变化关系，噬菌体的种类和数量也直接影响着肠道内的生理状态和微生物区系[3]。
大肠杆菌，大多是肠道内的正常的菌群，但也可在特殊条件下致病[4]。断奶仔猪腹泻是非常常见而且严重的仔猪疾病，也是引起断奶仔猪死亡的重要原因，给我国养猪业带来了巨大损失。为了解决断奶仔猪腹泻的问题，研究学者们一直在研究。过去常使用 抗生素来抑制大肠杆菌活性，但最近几年，病原菌对抗生素的耐药性使抗生素治疗也逐渐失去了起初的高效性[5]。噬菌体制剂的安全性及有效性使噬菌体替代抗生素的研究受到重视。并有实验表明，给鸡服用含有大肠杆菌噬菌体的水可以明显使粪便中大肠杆菌数量降低，且对肠道菌群多样性没有显著影响[6]。大肠杆菌与仔猪腹泻有密切关系，仔猪肠道内大肠杆菌噬菌体对大肠杆菌的影响是否影响仔猪腹泻值得进一步随研究。本研究将首次对仔猪肠道内的大肠杆菌噬菌体进行分离鉴定，并研究大肠杆菌噬菌体在仔猪断奶前和断奶后的分布规律。
1.材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器
表1 主要仪器一览表
仪器
规格
来源
隔水式电热恒温培养箱
PYXDHS40*5085
上海跃进医疗器械厂
离心机
TGL16G
上海安亭科学仪器厂
恒温振荡器
ISRSH1
CRYSTAL
立式压力蒸汽灭菌锅
MSLN
日本TOMY
精密电子分析天平
BS1245
北京赛多利斯仪器系统有限公司
生物洁净工作台
BCM1000A
苏州安泰空气技术有限公司
1.1.2 试剂
表2 主要试剂一览表
药品
规格
来源
胰蛋白胨
分析纯
OXOID
酵母提取物
分析纯
OXOID
琼脂粉
分析纯
DSBIO
氯化钠
分析纯
江苏强盛功能化学股份有限公司
硫酸镁
分析纯
江苏强盛功能化学股份有限公司
无水乙醇
分析纯
成都市科龙化工试剂厂
1.1.3 耗材 离心管、2ml EP管、1.5ml EP管、0.22μm滤器（MILLEX）、注射器、超滤管、DNA Mini Column(HiBind)
1.2 材料的制备
1.2.1 液体LB培养基的制备 按常规方式配制，分别将胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 10加入去离子水中定容至1000ml，用玻璃棒使其混匀，进行121℃高压灭菌20min。
1.2.2 半固体LB培养基的制备 往每1L液体LB培养基中添加7g琼脂粉，进行121℃高压灭菌20min。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
引言 1
1. 材料与方法 2
1.1 材料 2
1.1.1 仪器 2
1.1.2 试剂 2
1.1.3 耗材 2
1.2 材料的制备 2
1.2.1 液体LB培养基的制备 2
1.2.2 半固体LB培养基的制备 2
1.2.3 固体LB培养基的制备 2
1.2.4 SM保存液的制备 2
1.2.5 PBS的配制 2
1.2.6 琼脂糖凝胶的配置 2
1.3 试验方法 2
1.3.1 猪场采样及处理 2
1.3.2 大肠杆菌噬菌体的分离与纯化 3
1.3.3 点滴法测定宿主谱 3
1.3.4 噬菌体的保存 3
1.3.5 提取基因组鉴定噬菌体 3
1.3.6 大肠杆菌噬菌体酶切 3
1.3.7 电镜观察形态 3
2. 结果与分析 4
2.1 噬菌体的初步分离 4
2.2 噬菌体的宿主谱测定 4
2.3 噬菌体的酶切图谱分析 5
2.4 电镜观察噬菌体形态 6
3.讨论 7
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参考文献 8
南京一猪场仔猪肠道大肠杆菌噬菌体的分离鉴定
引言
引言 伴随着人们对微生物的正视，肠道微生物被广泛研究。作为人体中复杂程度最高，种群最丰富的微生物系统，寄生在宿主肠道内的所有微生物被称为肠道微生态[1]。肠道内噬菌体也是肠道微生态的组成部分之一。因其数量多，分布范围广，可感染细菌等特点，噬菌体被认为是地球上最多且增殖能力最强的生物之一[2]。近几年，科研学者们对肠道内噬菌体和微生物菌群之间的关系愈来愈关注。细菌和噬菌体之间存在的“捕食”关系使它们之间存在着动态变化关系，噬菌体的种类和数量也直接影响着肠道内的生理状态和微生物区系[3]。
大肠杆菌，大多是肠道内的正常的菌群，但也可在特殊条件下致病[4]。断奶仔猪腹泻是非常常见而且严重的仔猪疾病，也是引起断奶仔猪死亡的重要原因，给我国养猪业带来了巨大损失。为了解决断奶仔猪腹泻的问题，研究学者们一直在研究。过去常使用 抗生素来抑制大肠杆菌活性，但最近几年，病原菌对抗生素的耐药性使抗生素治疗也逐渐失去了起初的高效性[5]。噬菌体制剂的安全性及有效性使噬菌体替代抗生素的研究受到重视。并有实验表明，给鸡服用含有大肠杆菌噬菌体的水可以明显使粪便中大肠杆菌数量降低，且对肠道菌群多样性没有显著影响[6]。大肠杆菌与仔猪腹泻有密切关系，仔猪肠道内大肠杆菌噬菌体对大肠杆菌的影响是否影响仔猪腹泻值得进一步随研究。本研究将首次对仔猪肠道内的大肠杆菌噬菌体进行分离鉴定，并研究大肠杆菌噬菌体在仔猪断奶前和断奶后的分布规律。
1.材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器
表1 主要仪器一览表
仪器
规格
来源
隔水式电热恒温培养箱
PYXDHS40*5085
上海跃进医疗器械厂
离心机
TGL16G
上海安亭科学仪器厂
恒温振荡器
ISRSH1
CRYSTAL
立式压力蒸汽灭菌锅
MSLN
日本TOMY
精密电子分析天平
BS1245
北京赛多利斯仪器系统有限公司
生物洁净工作台
BCM1000A
苏州安泰空气技术有限公司
1.1.2 试剂
表2 主要试剂一览表
药品
规格
来源
胰蛋白胨
分析纯
OXOID
酵母提取物
分析纯
OXOID
琼脂粉
分析纯
DSBIO
氯化钠
分析纯
江苏强盛功能化学股份有限公司
硫酸镁
分析纯
江苏强盛功能化学股份有限公司
无水乙醇
分析纯
成都市科龙化工试剂厂
1.1.3 耗材 离心管、2ml EP管、1.5ml EP管、0.22μm滤器（MILLEX）、注射器、超滤管、DNA Mini Column(HiBind)
1.2 材料的制备
1.2.1 液体LB培养基的制备 按常规方式配制，分别将胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，NaCl 10加入去离子水中定容至1000ml，用玻璃棒使其混匀，进行121℃高压灭菌20min。
1.2.2 半固体LB培养基的制备 往每1L液体LB培养基中添加7g琼脂粉，进行121℃高压灭菌20min。
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