淫羊藿及其有效成分对小鼠生殖发育的影响
淫羊藿及其有效成分对小鼠生殖发育的影响[20200507184742]
摘要：对健康雌性小鼠灌服不同剂量的淫羊藿水煎液、淫羊藿苷和淫羊藿多糖，研究淫羊藿及其有效成分对小鼠生殖发育的影响。结果表明，连续7 d、每天1次灌服淫羊藿水煎液后，60 mg/0.1 ml组子宫卵巢系数与对照组相比差异显著（0.48%对0.36%；P<0.05）, 100 mg/0.1 ml组子宫卵巢系数0.65%与对照组相比差异极显著（P<0.01）,但140 mg/0.1 ml组子宫卵巢系数与对照组差异不显著(P>0.05)。连续灌服14 d淫羊藿水煎液后，60和100 mg/0.1 ml组子宫卵巢系数均较对照组有极显著增加（P<0.01），140mg/0.1ml组相较于对照组有显著提高（P<0.05）。连续灌服淫羊藿苷7 d，1和3 mg/0.1 ml组子宫卵巢系数均较对照组有显著增加（P<0.05），5和7 mg/0.1 ml组较对照组有极显著增加（P<0.01）；灌服14 d后，1、3和5 mg/0.1 ml组子宫卵巢系数均较对照组有极显著增加（P<0.01），但7 mg/0.1 ml组却变得与对照组差别不明显(P>0.05)。连续灌服淫羊藿多糖7 d，4和6 mg/0.1 ml组子宫卵巢系数较对照组有显著增加（P<0.05），但2和8 mg/0.1 ml组则和对照组相比差异不显著(P>0.05)；灌服14 d，仅4 mg/0.1 ml组与对照组差异极显著（P<0.01），其余各组均与对照组无差异(P>0.05)。灌服淫羊藿及其有效成分后，小鼠卵巢卵泡的直径和数量均增加；组织学分析表明，试验组的有腔卵泡数量增加，并有黄体出现。由此可见，淫羊藿水煎液、淫羊藿苷和淫羊藿多糖均对小鼠生殖发育具有积极的作用，最佳剂量与灌服时间有一定的关系。
*好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥3^5`1^9`1^6^0`7^2$
关键字:小鼠；淫羊藿；淫羊藿苷；淫羊藿多糖
目录
摘要2
关键词2
Abstract...2
Key words...3
引言 ...3
1 材料与方法.3
1.1 试验小鼠 .3
1.2 主要仪器和试剂 ..3
1.3 分组和给药 4
1.4 取材 .4
1.5 小鼠卵巢组织切片及HE染色4
1.6 数据处理 ..4
2 结果与分析.4
2.1 淫羊藿水煎液对小鼠生殖系统发育的影响4
2.2 淫羊藿苷对小鼠生殖系统发育的影响.... .6
2.3 淫羊藿多糖对小鼠生殖系统发育的影响.... 7
2.4 淫羊藿及其有效成分影响小鼠卵巢发育的形态学观察 8
3 讨论.9
致谢...9
参考文献...10
图1 EP组小鼠卵泡发育状况5
表1淫羊藿水提物对小鼠生殖发育的影响5
图2 ICA组小鼠卵泡发育状况6
表2 淫羊藿苷对小鼠生殖发育的影响7
图3 EPS组小鼠卵泡发育状况7
表3 淫羊藿多糖对小鼠生殖发育的影响8
图4 小鼠卵巢组织切片 8
淫羊藿及其有效成分对小鼠生殖发育的影响
（大学动物医学院，南京210095）
引言
淫羊藿属于小檗科（Berberidaceae）淫羊藿属（Epimedium）植物，始载于《神农本草经》，是应用较为广泛的传统中药。中医认为，淫羊藿具有坚筋骨、益精气、补腰膝、强心力等功效。中国是淫羊藿属植物的地理分布中心和物种多样性 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥3^5`1^9`1^6^0`7^2$
中心，共有淫羊藿属植物48种[1]。淫羊藿对生殖及内分泌系统的影响早在20世纪30年代即见报道[2]，迄今仍是其药理学研究的重要内容，研究样品主要包括淫羊藿水提物、总黄酮（total flavonoids of epimedium,TFE）、多糖（epimedium polysaccharides,EPS）和淫羊藿苷（icariin,Ica）；涉及多种整体动物模型及离体器官和细胞模型。淫羊藿在心脑血管系统、血液系统、免疫系统、生殖系统、骨髓系统等方面的研究应用均已有报道，它具有调节雄性发育、调节免疫、抑制肿瘤、改善心血管系统功能、缓解妇女更年期症状、调节内分泌、抗骨质疏松、抗肝毒素、抗氧化和抗衰老等多种生理活性[3]。淫羊藿苷是淫羊藿的黄酮类主要药效成分，具有抗神经元损伤、促神经突触生长、促成骨、抗炎症、抗肿瘤、提高性功能和抗抑郁等作用[4]。淫羊藿多糖则普遍存在于原料药各个组织部位，由10个以上的单糖分子聚合而成；不仅参与细胞骨架的构成，而且是多种内源性生物活性分子的重要组成成分。药理学研究显示，淫羊藿多糖具有抗病毒[5]、抗肿瘤[6]、调节免疫[7]和延缓衰老[8]等多种活性；但淫羊藿及其有效成分对雌性小鼠生殖发育的影响及机理的报道依然偏少。为了深入研究淫羊藿及其有效成分的作用及机理，本试验以雌性小鼠为研究对象，旨在探讨淫羊藿及其有效成分对小鼠生殖发育的影响，侧重观察子宫卵巢系数、卵泡发育等变化，以期为开展进一步的研究提供实验参考。
1 材料与方法
1.1 试验小鼠
4周龄清洁级健康雌性昆明小鼠，体重28~32 g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证号为SCXK(沪)2012-0002；按清洁级标准（GB14925 2001）饲养，自由饮水。
1.2 主要仪器和试剂
主要仪器：数码体视显微镜（SMZ140-N2LED）、分析天平(上海精密科学仪器有限公司，FA1104N)和电子称等。
试剂：淫羊藿购自中药店，实验室自行煎制获得其水煎液；淫羊藿苷购自南京泽朗医药科技有限公司；淫羊藿多糖由大学王德云教授惠赠。
1.3 动物分组和给药
小鼠适应性饲养1周后，随机分为淫羊藿水煎液组、淫羊藿苷组和淫羊藿多糖组。各组按照灌服时间分为7 d组和14 d组，按照灌服剂量又另分为4组，并设置生理盐水灌服对照组。各组灌服时间均在每天下午7:00开始，每只小鼠灌服0.1 ml。淫羊藿水煎液各组淫羊藿浓度分别为20、60、100和140 mg/0.1 ml。淫羊藿苷各组灌服浓度分别为1、3、5和7 mg/0.1 ml。淫羊藿多糖各组灌服浓度分别为2、4、6和8 mg/0.1 ml，对照组仅同时灌服生理盐水0.1 ml。
1.4 子宫卵巢系数测定
末次给药后14~24 h，小鼠颈椎脱臼法致死并称重。打开腹腔，分离子宫及卵巢，细心剔除脂肪和系膜等多余组织后称重，计算子宫卵巢系数（子宫卵巢湿重(g)/体重(g)×100%）。
1.5 卵巢发育观察与取材
各组小鼠致死后打开腹腔，观察子宫、卵巢发育情况，所分离卵巢一侧用于组织切片样品放置于固定液中，另一侧根据试验设计用于其他分析。
1.6 小鼠卵巢组织切片与HE染色
取小鼠一侧卵巢于Bouin氏液中固定，乙醇逐级 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥3^5`1^9`1^6^0`7^2$
脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。待蜡块冷却后修整，并进行常规切片，切片厚度为5μm，展片后37℃烘烤过夜。取己干燥的切片放入二甲苯脱蜡2次后，依次经100%、100%、95%、80%、70%酒精浸泡2 min，蒸馏水漂洗，苏木精染色5 min，当切片变为绛紫色时用流水冲洗至颜色变蓝，伊红浸染2 min，当切片变为紫红色用流水洗3 min，然后酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，室温晾干，普通光镜下观察。
1.7 数据处理
所有数据以平均数±标准误（x±s）表示，采用SPSS16统计软件多元方差分析中Fisher’s LSD法进行差异显著性检验，P<0.05判为差异显著，P<0.01判为差异极显著。
2 结果与分析
2.1 淫羊藿水煎液对小鼠生殖发育的影响
与对照组小鼠相比较，试验组小鼠在灌服淫羊藿水煎液期间并未发现行为与采食等方面的明显异常。从所分离的卵巢发现，对照组小鼠卵巢发育一般，卵巢表面卵泡数量少，卵泡表面直径小；而60、100和140 mg组小鼠的卵巢变化十分明显，卵泡数量多、表面直径较大，有的可见黄体产生。小鼠子宫卵巢系数随着灌服淫羊藿水提物浓度的提高而出现一定的变化，20 mg/0.1 ml组小鼠子宫卵巢系数与对照组相比差异不显著（P>0.05），但是60、100和140 mg/0.1 ml组子宫卵巢系数均较对照组有显著（P<0.05）或极显著(P<0.01)的增加。其中60 mg/0.1 ml组在7 d时与对照组差异显著（P<0.05），但灌服14 d差异变得极显著(P<0.01)，说明60 mg/0.1 ml组小鼠随着灌服天数的增加，子宫卵巢发育越来越好。而100 mg/0.1 ml组虽然7 d和14 d与对照组差异均极显著，但是随着天数增加出现了系数的下降。但看7 d和14 d组，两这分别在100 mg/0.1 ml组合60 mg/0.1 ml组出现最大值，说明灌服淫羊藿水提物浓度和时间长短均会影响子宫卵巢系数。
图2.ICA组小鼠卵泡发育状况
Fig.2. Developmental status of mouse follicles from ICA groups
摘要：对健康雌性小鼠灌服不同剂量的淫羊藿水煎液、淫羊藿苷和淫羊藿多糖，研究淫羊藿及其有效成分对小鼠生殖发育的影响。结果表明，连续7 d、每天1次灌服淫羊藿水煎液后，60 mg/0.1 ml组子宫卵巢系数与对照组相比差异显著（0.48%对0.36%；P<0.05）, 100 mg/0.1 ml组子宫卵巢系数0.65%与对照组相比差异极显著（P<0.01）,但140 mg/0.1 ml组子宫卵巢系数与对照组差异不显著(P>0.05)。连续灌服14 d淫羊藿水煎液后，60和100 mg/0.1 ml组子宫卵巢系数均较对照组有极显著增加（P<0.01），140mg/0.1ml组相较于对照组有显著提高（P<0.05）。连续灌服淫羊藿苷7 d，1和3 mg/0.1 ml组子宫卵巢系数均较对照组有显著增加（P<0.05），5和7 mg/0.1 ml组较对照组有极显著增加（P<0.01）；灌服14 d后，1、3和5 mg/0.1 ml组子宫卵巢系数均较对照组有极显著增加（P<0.01），但7 mg/0.1 ml组却变得与对照组差别不明显(P>0.05)。连续灌服淫羊藿多糖7 d，4和6 mg/0.1 ml组子宫卵巢系数较对照组有显著增加（P<0.05），但2和8 mg/0.1 ml组则和对照组相比差异不显著(P>0.05)；灌服14 d，仅4 mg/0.1 ml组与对照组差异极显著（P<0.01），其余各组均与对照组无差异(P>0.05)。灌服淫羊藿及其有效成分后，小鼠卵巢卵泡的直径和数量均增加；组织学分析表明，试验组的有腔卵泡数量增加，并有黄体出现。由此可见，淫羊藿水煎液、淫羊藿苷和淫羊藿多糖均对小鼠生殖发育具有积极的作用，最佳剂量与灌服时间有一定的关系。
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关键字:小鼠；淫羊藿；淫羊藿苷；淫羊藿多糖
目录
摘要2
关键词2
Abstract...2
Key words...3
引言 ...3
1 材料与方法.3
1.1 试验小鼠 .3
1.2 主要仪器和试剂 ..3
1.3 分组和给药 4
1.4 取材 .4
1.5 小鼠卵巢组织切片及HE染色4
1.6 数据处理 ..4
2 结果与分析.4
2.1 淫羊藿水煎液对小鼠生殖系统发育的影响4
2.2 淫羊藿苷对小鼠生殖系统发育的影响.... .6
2.3 淫羊藿多糖对小鼠生殖系统发育的影响.... 7
2.4 淫羊藿及其有效成分影响小鼠卵巢发育的形态学观察 8
3 讨论.9
致谢...9
参考文献...10
图1 EP组小鼠卵泡发育状况5
表1淫羊藿水提物对小鼠生殖发育的影响5
图2 ICA组小鼠卵泡发育状况6
表2 淫羊藿苷对小鼠生殖发育的影响7
图3 EPS组小鼠卵泡发育状况7
表3 淫羊藿多糖对小鼠生殖发育的影响8
图4 小鼠卵巢组织切片 8
淫羊藿及其有效成分对小鼠生殖发育的影响
（大学动物医学院，南京210095）
引言
淫羊藿属于小檗科（Berberidaceae）淫羊藿属（Epimedium）植物，始载于《神农本草经》，是应用较为广泛的传统中药。中医认为，淫羊藿具有坚筋骨、益精气、补腰膝、强心力等功效。中国是淫羊藿属植物的地理分布中心和物种多样性 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥3^5`1^9`1^6^0`7^2$
中心，共有淫羊藿属植物48种[1]。淫羊藿对生殖及内分泌系统的影响早在20世纪30年代即见报道[2]，迄今仍是其药理学研究的重要内容，研究样品主要包括淫羊藿水提物、总黄酮（total flavonoids of epimedium,TFE）、多糖（epimedium polysaccharides,EPS）和淫羊藿苷（icariin,Ica）；涉及多种整体动物模型及离体器官和细胞模型。淫羊藿在心脑血管系统、血液系统、免疫系统、生殖系统、骨髓系统等方面的研究应用均已有报道，它具有调节雄性发育、调节免疫、抑制肿瘤、改善心血管系统功能、缓解妇女更年期症状、调节内分泌、抗骨质疏松、抗肝毒素、抗氧化和抗衰老等多种生理活性[3]。淫羊藿苷是淫羊藿的黄酮类主要药效成分，具有抗神经元损伤、促神经突触生长、促成骨、抗炎症、抗肿瘤、提高性功能和抗抑郁等作用[4]。淫羊藿多糖则普遍存在于原料药各个组织部位，由10个以上的单糖分子聚合而成；不仅参与细胞骨架的构成，而且是多种内源性生物活性分子的重要组成成分。药理学研究显示，淫羊藿多糖具有抗病毒[5]、抗肿瘤[6]、调节免疫[7]和延缓衰老[8]等多种活性；但淫羊藿及其有效成分对雌性小鼠生殖发育的影响及机理的报道依然偏少。为了深入研究淫羊藿及其有效成分的作用及机理，本试验以雌性小鼠为研究对象，旨在探讨淫羊藿及其有效成分对小鼠生殖发育的影响，侧重观察子宫卵巢系数、卵泡发育等变化，以期为开展进一步的研究提供实验参考。
1 材料与方法
1.1 试验小鼠
4周龄清洁级健康雌性昆明小鼠，体重28~32 g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证号为SCXK(沪)2012-0002；按清洁级标准（GB14925 2001）饲养，自由饮水。
1.2 主要仪器和试剂
主要仪器：数码体视显微镜（SMZ140-N2LED）、分析天平(上海精密科学仪器有限公司，FA1104N)和电子称等。
试剂：淫羊藿购自中药店，实验室自行煎制获得其水煎液；淫羊藿苷购自南京泽朗医药科技有限公司；淫羊藿多糖由大学王德云教授惠赠。
1.3 动物分组和给药
小鼠适应性饲养1周后，随机分为淫羊藿水煎液组、淫羊藿苷组和淫羊藿多糖组。各组按照灌服时间分为7 d组和14 d组，按照灌服剂量又另分为4组，并设置生理盐水灌服对照组。各组灌服时间均在每天下午7:00开始，每只小鼠灌服0.1 ml。淫羊藿水煎液各组淫羊藿浓度分别为20、60、100和140 mg/0.1 ml。淫羊藿苷各组灌服浓度分别为1、3、5和7 mg/0.1 ml。淫羊藿多糖各组灌服浓度分别为2、4、6和8 mg/0.1 ml，对照组仅同时灌服生理盐水0.1 ml。
1.4 子宫卵巢系数测定
末次给药后14~24 h，小鼠颈椎脱臼法致死并称重。打开腹腔，分离子宫及卵巢，细心剔除脂肪和系膜等多余组织后称重，计算子宫卵巢系数（子宫卵巢湿重(g)/体重(g)×100%）。
1.5 卵巢发育观察与取材
各组小鼠致死后打开腹腔，观察子宫、卵巢发育情况，所分离卵巢一侧用于组织切片样品放置于固定液中，另一侧根据试验设计用于其他分析。
1.6 小鼠卵巢组织切片与HE染色
取小鼠一侧卵巢于Bouin氏液中固定，乙醇逐级 *好棒文|www.hbsrm.com +Q: ￥3^5`1^9`1^6^0`7^2$
脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。待蜡块冷却后修整，并进行常规切片，切片厚度为5μm，展片后37℃烘烤过夜。取己干燥的切片放入二甲苯脱蜡2次后，依次经100%、100%、95%、80%、70%酒精浸泡2 min，蒸馏水漂洗，苏木精染色5 min，当切片变为绛紫色时用流水冲洗至颜色变蓝，伊红浸染2 min，当切片变为紫红色用流水洗3 min，然后酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，室温晾干，普通光镜下观察。
1.7 数据处理
所有数据以平均数±标准误（x±s）表示，采用SPSS16统计软件多元方差分析中Fisher’s LSD法进行差异显著性检验，P<0.05判为差异显著，P<0.01判为差异极显著。
2 结果与分析
2.1 淫羊藿水煎液对小鼠生殖发育的影响
与对照组小鼠相比较，试验组小鼠在灌服淫羊藿水煎液期间并未发现行为与采食等方面的明显异常。从所分离的卵巢发现，对照组小鼠卵巢发育一般，卵巢表面卵泡数量少，卵泡表面直径小；而60、100和140 mg组小鼠的卵巢变化十分明显，卵泡数量多、表面直径较大，有的可见黄体产生。小鼠子宫卵巢系数随着灌服淫羊藿水提物浓度的提高而出现一定的变化，20 mg/0.1 ml组小鼠子宫卵巢系数与对照组相比差异不显著（P>0.05），但是60、100和140 mg/0.1 ml组子宫卵巢系数均较对照组有显著（P<0.05）或极显著(P<0.01)的增加。其中60 mg/0.1 ml组在7 d时与对照组差异显著（P<0.05），但灌服14 d差异变得极显著(P<0.01)，说明60 mg/0.1 ml组小鼠随着灌服天数的增加，子宫卵巢发育越来越好。而100 mg/0.1 ml组虽然7 d和14 d与对照组差异均极显著，但是随着天数增加出现了系数的下降。但看7 d和14 d组，两这分别在100 mg/0.1 ml组合60 mg/0.1 ml组出现最大值，说明灌服淫羊藿水提物浓度和时间长短均会影响子宫卵巢系数。
图2.ICA组小鼠卵泡发育状况
Fig.2. Developmental status of mouse follicles from ICA groups
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