糖酵解相关基因对猪肉系水力的影响
系水力是影响猪肉品质及经济价值的重要因素。改善系水力是提高猪肉品质的主要途径。本研究以杜长大三元杂种猪为实验对象，采用压力法测定猪肉失水率来判断系水力的高低。选择系水力极高与极低的各12个个体，采用Illumina Porcine 60K SNP 芯片对24个个体进行全基因组分型，通过比较分析发掘与失水率性状相关的SNP位点。根据SNP芯片分析结果，结合SNP位点信息，选择位于系水力QTL区域或潜在相关功能基因内的5个SNP位点，扩大样本验证候选SNP位点与失水率的相关性。对与失水率相关的SNP位点进一步研究不同基因型间基因表达水平差异，以及基因表达水平与性状的相关性。以此在全基因组范围发掘与猪肉系水力相关的遗传标记或功能基因。
目录
摘要4
关键词4
Abstract4
Key words4
引言4
1材料与方法4
1.1材料 4
1.1.1实验动物及样品采集4
1.1.2 DNA提取等试剂4
1.1.3主要仪器及实验器械5
1.1.4主要软件及网站5
1.2方法 5
1.2.1肌肉DNA的提取5
1.2.2 DNA的纯度和浓度测定6
1.2.3失水率测定6
1.2.4构建DNA样品混池6
1.2.5引物的设计和合成6
1.2.6 PCR反应体系和程序7
1.2.7琼脂糖电泳检测7
1.2.8目的片段测序7
1.2.9引物设计7
1.2.10组织RNA 提取8
1.2.11RNA质量8
1.2.12反转录3
1.2.13荧光实时定量PCR8
1.2.14数据分析9
2 结果与分析9
2.1失水率高低组中基因mRNA表达水平分析9
2.2寻找高低组中差异显著的突变位点10
3 讨论 11
3.1候选基因的表达水平与失水率性状的相关性分析11
3.2荧光定量PCR11
3.3 RNA提取方法11< *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
br /> 致谢12
参考文献12
糖酵解相关基因对猪肉系水力的影响
引言
近年来，随着中国进入改革开放以后，科技飞速发展，人们的生活水平也不断提高，对于肉蛋奶的要求也不断提高。这种不断提高的要求不仅体现在数量上也体现在肉蛋奶的质量上。猪肉，这一被人们广泛需要的肉制品，提升其质量也就显得尤为重要。而猪肉系水力被广泛认为对猪肉品质有着很重要的影响。在一定范围内，提升猪肉的系水力能很有效的提升猪肉的观感和食用品质。所以提升猪肉系水力是改善猪肉品质的重要途径。而猪肉系水力也在一定程度上受到基因的调控，因此，我们重点通过研究与猪肉系水力相关的基因来试图提高猪肉系水力并借此改善猪肉品质。
材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物及样品采集
实验动物为江苏省南通市海安县嘉伦食品厂屠宰的168头杜长大三元杂种猪（杜洛克×长白×大约克）。屠宰后在最后一节腰椎处迅速采集背最长肌，分别保存在液氮或冰盒内，分别用于核酸提取和系水力测定。
1.1.2 DNA提取等试剂
DNA Green核酸染液等：南京寿德试剂有限公司
氯仿、异戊醇、无水乙醇等分析纯试剂：大学后勤处
琼脂糖、Tris饱和酚、蛋白酶K等：南京鼎国有限公司
DNA Marker等：南京东盛生物技术有限公司和TaKaRa公司
2×Taq PCR Mix、DNA Marker、2×LA Taq PCR Mix：TaKaRa公司
电泳所需溶液：
（1）10×TBE：TrisBas 108g；硼酸55 g；0.5 mol EDTA（pH8.0）40 mL；溶于蒸馏水并定容至1000 mL。
1.1.3 主要仪器及实验器械
低温高速离心机：Eppendorf，德国
超净工作台、超低温冰箱、NanoDrop分光光度计：Thermo，美国
可调式微量移液器：Eppendorf，德国
GEL EQ凝胶成像系统：BIORAD，美国
电子天平：Yamatoz，美国
高压消毒锅：上海申安医疗器械厂
恒温水浴锅：北京医疗设备厂
手术镊子、手术剪、手术刀、医用纱布、游标卡尺、圆形取样器、新华定性滤纸、自封袋、标签纸：大学后勤处
土壤允许膨胀压缩仪：南京土壤仪器厂有限公司
电泳仪：北京六一仪器厂产品
普通PCR仪，梯度PCR仪：TaKaRa，日本
实时荧光定量PCR仪：美国应用生物系统公司
1.1.4主要软件及网站
引物设计软件和序列分析软件：
Primer premier 5.0
Chromas 2.0
DNAMAN 6.0
相关网站：
用http://www.ncbi.nlm.nih.gov/得到相关基因序列
用http://cn.animalgenome.org/cgibin/QTLdb/SS/index进行QTL分析
方法
1.2.1 肌肉DNA的提取
方法详细如下：
（1）剪下100 mg左右样品，切碎，放到2.0 mL EP管内；
（2）往EP管中分别加裂解液1ml和蛋白酶K 50 μL充分混匀，水浴锅内55 ℃水浴消化12 h至过夜，次日向2.0 mL管中加Tris饱和酚800 μL，轻微混匀10 min，4 ℃，12000 rpm离心15 min；
（3）吸取650 μL上层液体放入2 mL EP管内，加氯仿/异戊醇（24：1）400 μL和400 μL饱和酚，静置10 min，4 ℃、12000 rpm离心15 min；
（4）吸取550 μL上层液体放入2 mL EP管中，加氯仿800 μL，混匀10 min，4 ℃，12000 rpm离心15 min；
（5）吸取450 μL上层液体放入2 mL EP管中，加2倍体积无水乙醇，6 min，4 ℃，12000 rpm离心10 min；
（6）弃去上层液体，加1 mL 70%无水乙醇400 μL震荡，洗涤DNA沉淀，4 ℃，12000 rpm离心5 min；
（7）倒掉上层液体，除去管内剩余液体，超净台吹干至EP管内无水滴，干燥时间约25 min；
（8）样品加50 μL H2O，使DNA完全溶解，可用振荡器混匀，进行样品质量检测，最用放入20 ℃冰箱保存。
1.2.2 DNA的纯度和浓度测定
采用NanoDrop分光光度计测定各个样品DNA浓度，计算OD260/OD280比值判定DNA提取质量。所有样品OD260/OD280比值应为1.8~2.0。
1.2.3 失水率测定
目录
摘要4
关键词4
Abstract4
Key words4
引言4
1材料与方法4
1.1材料 4
1.1.1实验动物及样品采集4
1.1.2 DNA提取等试剂4
1.1.3主要仪器及实验器械5
1.1.4主要软件及网站5
1.2方法 5
1.2.1肌肉DNA的提取5
1.2.2 DNA的纯度和浓度测定6
1.2.3失水率测定6
1.2.4构建DNA样品混池6
1.2.5引物的设计和合成6
1.2.6 PCR反应体系和程序7
1.2.7琼脂糖电泳检测7
1.2.8目的片段测序7
1.2.9引物设计7
1.2.10组织RNA 提取8
1.2.11RNA质量8
1.2.12反转录3
1.2.13荧光实时定量PCR8
1.2.14数据分析9
2 结果与分析9
2.1失水率高低组中基因mRNA表达水平分析9
2.2寻找高低组中差异显著的突变位点10
3 讨论 11
3.1候选基因的表达水平与失水率性状的相关性分析11
3.2荧光定量PCR11
3.3 RNA提取方法11< *好棒文|www.hbsrm.com +Q: @351916072@
br /> 致谢12
参考文献12
糖酵解相关基因对猪肉系水力的影响
引言
近年来，随着中国进入改革开放以后，科技飞速发展，人们的生活水平也不断提高，对于肉蛋奶的要求也不断提高。这种不断提高的要求不仅体现在数量上也体现在肉蛋奶的质量上。猪肉，这一被人们广泛需要的肉制品，提升其质量也就显得尤为重要。而猪肉系水力被广泛认为对猪肉品质有着很重要的影响。在一定范围内，提升猪肉的系水力能很有效的提升猪肉的观感和食用品质。所以提升猪肉系水力是改善猪肉品质的重要途径。而猪肉系水力也在一定程度上受到基因的调控，因此，我们重点通过研究与猪肉系水力相关的基因来试图提高猪肉系水力并借此改善猪肉品质。
材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物及样品采集
实验动物为江苏省南通市海安县嘉伦食品厂屠宰的168头杜长大三元杂种猪（杜洛克×长白×大约克）。屠宰后在最后一节腰椎处迅速采集背最长肌，分别保存在液氮或冰盒内，分别用于核酸提取和系水力测定。
1.1.2 DNA提取等试剂
DNA Green核酸染液等：南京寿德试剂有限公司
氯仿、异戊醇、无水乙醇等分析纯试剂：大学后勤处
琼脂糖、Tris饱和酚、蛋白酶K等：南京鼎国有限公司
DNA Marker等：南京东盛生物技术有限公司和TaKaRa公司
2×Taq PCR Mix、DNA Marker、2×LA Taq PCR Mix：TaKaRa公司
电泳所需溶液：
（1）10×TBE：TrisBas 108g；硼酸55 g；0.5 mol EDTA（pH8.0）40 mL；溶于蒸馏水并定容至1000 mL。
1.1.3 主要仪器及实验器械
低温高速离心机：Eppendorf，德国
超净工作台、超低温冰箱、NanoDrop分光光度计：Thermo，美国
可调式微量移液器：Eppendorf，德国
GEL EQ凝胶成像系统：BIORAD，美国
电子天平：Yamatoz，美国
高压消毒锅：上海申安医疗器械厂
恒温水浴锅：北京医疗设备厂
手术镊子、手术剪、手术刀、医用纱布、游标卡尺、圆形取样器、新华定性滤纸、自封袋、标签纸：大学后勤处
土壤允许膨胀压缩仪：南京土壤仪器厂有限公司
电泳仪：北京六一仪器厂产品
普通PCR仪，梯度PCR仪：TaKaRa，日本
实时荧光定量PCR仪：美国应用生物系统公司
1.1.4主要软件及网站
引物设计软件和序列分析软件：
Primer premier 5.0
Chromas 2.0
DNAMAN 6.0
相关网站：
用http://www.ncbi.nlm.nih.gov/得到相关基因序列
用http://cn.animalgenome.org/cgibin/QTLdb/SS/index进行QTL分析
方法
1.2.1 肌肉DNA的提取
方法详细如下：
（1）剪下100 mg左右样品，切碎，放到2.0 mL EP管内；
（2）往EP管中分别加裂解液1ml和蛋白酶K 50 μL充分混匀，水浴锅内55 ℃水浴消化12 h至过夜，次日向2.0 mL管中加Tris饱和酚800 μL，轻微混匀10 min，4 ℃，12000 rpm离心15 min；
（3）吸取650 μL上层液体放入2 mL EP管内，加氯仿/异戊醇（24：1）400 μL和400 μL饱和酚，静置10 min，4 ℃、12000 rpm离心15 min；
（4）吸取550 μL上层液体放入2 mL EP管中，加氯仿800 μL，混匀10 min，4 ℃，12000 rpm离心15 min；
（5）吸取450 μL上层液体放入2 mL EP管中，加2倍体积无水乙醇，6 min，4 ℃，12000 rpm离心10 min；
（6）弃去上层液体，加1 mL 70%无水乙醇400 μL震荡，洗涤DNA沉淀，4 ℃，12000 rpm离心5 min；
（7）倒掉上层液体，除去管内剩余液体，超净台吹干至EP管内无水滴，干燥时间约25 min；
（8）样品加50 μL H2O，使DNA完全溶解，可用振荡器混匀，进行样品质量检测，最用放入20 ℃冰箱保存。
1.2.2 DNA的纯度和浓度测定
采用NanoDrop分光光度计测定各个样品DNA浓度，计算OD260/OD280比值判定DNA提取质量。所有样品OD260/OD280比值应为1.8~2.0。
1.2.3 失水率测定
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